熒光顯微鏡的基本使用方法演示文稿

熒光顯微鏡的基本使用方法演示文稿當前第1頁\共有21頁\編于星期四\10點（優(yōu)選）熒光顯微鏡的基本使用方法當前第2頁\共有21頁\編于星期四\10點實驗目的1.了解熒光顯微鏡的基本原理；2.掌握熒光顯微鏡的基本結構和使用注意事項；當前第3頁\共有21頁\編于星期四\10點自發(fā)性熒光物質神經(jīng)細胞和心肌細胞等內的脂褐素呈棕黃色熒光。肝貯脂細胞和視網(wǎng)膜色素上皮細胞內的維生素A呈綠色熒光。某些神經(jīng)內分泌細胞和神經(jīng)纖維內的單胺類物質（兒茶酚胺、5－羥色胺、組胺等）在甲醛作用下呈不同顏色的熒光。組織內含有的奎寧、四環(huán)素等藥物也呈現(xiàn)一定的熒光。嗜中性粒細胞中脫氫酶輔酶呈現(xiàn)一定的熒光。當前第4頁\共有21頁\編于星期四\10點當前第5頁\共有21頁\編于星期四\10點優(yōu)點：檢出能力高對細胞的刺激小能進行多重染色用途：物體構造的觀察熒光的有無、色調比較進行物質判別發(fā)熒光量的測定對物質定性、定量分析熒光顯微鏡的優(yōu)點和用途當前第6頁\共有21頁\編于星期四\10點實驗原理光源激發(fā)濾色鏡分色鏡發(fā)射濾色鏡（阻擋濾片）當前第7頁\共有21頁\編于星期四\10點實驗原理熒光顯微鏡的光路及主要部件光源激發(fā)光擋片激發(fā)濾色鏡分色鏡發(fā)射濾色鏡當前第8頁\共有21頁\編于星期四\10點當前第9頁\共有21頁\編于星期四\10點Microscopeswithanupright-styleframearecapableofproducingfluorescenceilluminationeitherthroughepiscopicordiascopicopticalpathways,althoughthelatterisrarelyusedtoday.Epi-illuminatorsusuallyconsistofamercuryorxenonlamphousecoupledtoaverticalilluminatorthatispositionedabovethemainframeinaseparateassembly.Themicroscopenosepieceandtransmittedlightcomponents(diascopicilluminator,condenser,fielddiaphragm,filters,etc.)arebuiltintothemainframe,whilefluorescencecomponentsarehousedintheverticalilluminator.Theseilluminatorsoftencontainarevolvingorslidingturretthathousesfourtosix"cubes"thatcontainamixtureofinterferencefiltersincludingabarrierfilter,dichroicmirror,andanexcitationfilter.Asillustratedabove,lightemittedfromthelamppositionedintheepiscopiclamphousepassesthroughacollectorlensandthenthefieldandaperturediaphragmsbeforeenteringthefirstinterferencefilterinthecubeset,theemissionfilter.Thislightisthendirectedthroughtheobjectiveandontothespecimenbyaspecialdichroicmirrorthatreflectscertainwavelengthswhilepassingothers.Secondaryfluorescence,emittedbyfluorophoresresidinginthespecimen,travelsbackthroughtheobjectiveandthedichroicmirrorbeforepassingthroughabarrierfilterandintothemicroscopeeyepiecesorcamerasystem.當前第10頁\共有21頁\編于星期四\10點激發(fā)光源高壓汞燈擁有313,337,365,405,436,546,and577

納米的峰值譜。高壓

Xenon燈有連續(xù)的可見光光譜范圍,光源強度比較平均。汞燈光譜當前第11頁\共有21頁\編于星期四\10點激發(fā)濾色塊具有多套激發(fā)濾色塊：激發(fā)濾色鏡（ExcitationFilter），分光鏡（DichromaticMirror），發(fā)射濾色鏡（EmissionFilter）。激發(fā)濾色塊六孔激發(fā)塊轉盤當前第12頁\共有21頁\編于星期四\10點多用途型BX-RFA(適合多種科研要求)及通用型BX-URA2?？赏瑫r使用6種熒光激發(fā)塊，“輕撥式”激發(fā)塊轉換功能，使不同熒光激發(fā)之間的迅速轉換非常方便，并可消除震動，有利于復染樣品的熒光觀察。激發(fā)塊標識在暗室環(huán)境中發(fā)光，在暗室中也能很容易地選擇需要的熒光激發(fā)塊。另外，根據(jù)需要還可以選擇6孔濾色片滑塊(U-RSL6/U-RSL6EM)安放激發(fā)濾色片和發(fā)射濾色片進行熒光觀察。當前第13頁\共有21頁\編于星期四\10點當前第14頁\共有21頁\編于星期四\10點BX51在鏡基上裝有3個濾色片（ND6，ND25，LBD），另外，還可以選裝第四個。鏡基側面的拉桿可以很容易地插入/取出濾色鏡。SpecimencolorfadingcanbedelayedbyreducingtheexcitationlightintensitywithNDfilters.UsetheNDfiltersasfarastheydonothinderobservations.InserttheNDfilters(U-25ND6and/orU-25ND25)withthemarkedsidefacingtowardtheobserver.當前第15頁\共有21頁\編于星期四\10點當前第16頁\共有21頁\編于星期四\10點1、

該鏡可作為明視場顯微鏡使用，也可作為熒光顯微鏡使用，根據(jù)需要，做相應的附件連接，開啟相應的電源。禁止亂調設置，以免影響他人正常使用。

2、

作為明視場顯微鏡使用；A、接通電源后，打開顯微鏡底座前的電源開關，按光亮需要調節(jié)底座右側的滑竿。B、根據(jù)需要，調節(jié)底座光柵和聚光器光柵及其高度，可獲得最佳的圖象效果。C、需要圖片，要把鏡體上的相應拉桿拉到綠線位子。按下相應附件上的照相按扭。

3、

作為熒光顯微鏡使用；A、先關閉熒光通道，再打開熒光激發(fā)器電源，等待15分鐘。B、等待期間，打開顯微鏡光源，找到需要觀察的樣品，選用合適的物鏡，調整焦距。C、關閉顯微鏡光源，打開熒光通道。D、需要圖片，要把鏡體上的相應拉桿拉到綠線位子。按下相應附件上的照相按扭。當前第17頁\共有21頁\編于星期四\10點細胞核與細胞質DNA的直接熒光染色當前第18頁\共有21頁\編于星期四\10點線粒體GFP轉基因擬南芥根（顯示葉綠體）葉片當前第19頁\共有21頁\編于星期四\10點注意事項激發(fā)光擋片的使用----減少淬滅當前第20頁\共有21頁\編于星期四\10點注意事項熒光的淬滅與激發(fā)光的照射時間成正比，因此應盡量減少觀察時間外激發(fā)光對樣品的照射。激發(fā)光擋片可以部分或完全阻斷激發(fā)光光路。在正式觀察樣品之前，激發(fā)光光路應該處于完全阻斷狀態(tài)。否則，在我們將樣品放到載物臺上，移動樣品臺將樣品調整到物鏡位置，找到要觀察的細胞并進行調焦的過程中，樣品上的熒光可能已經(jīng)發(fā)生了相當程度的淬滅。為了避免觀察前不必要的淬滅，上述一