分子生物學(xué)知識(shí)點(diǎn)

一、名詞解釋：基因DNARNA基因表達(dá)因的激活、轉(zhuǎn)錄、翻譯以及相關(guān)的加工修飾等多個(gè)步驟或過(guò)程。管家基因GAPDH、β因。啟動(dòng)子：是指位于基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游、能夠與RNADNA操縱子操縱序列等。如：乳糖操縱子、色氨酸操縱子等。反式作用因子而參與調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄的蛋白因子（轉(zhuǎn)錄因子。順式作用元件DNA列。是轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合而實(shí)現(xiàn)對(duì)真核基因轉(zhuǎn)錄的精確調(diào)控。Ct值：即循環(huán)閾值（cyclethreshold，Ct，是指在PCR物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（PCR存在線性對(duì)數(shù)關(guān)系，由此可以對(duì)擴(kuò)增樣品中的目的基因的模板量進(jìn)行準(zhǔn)確的絕對(duì)和（或））核酸分子雜交：是指核酸分子在變性后再?gòu)?fù)性的過(guò)程中，來(lái)源不同但互不配對(duì)的核酸單鏈（包括DNARNA）特性或現(xiàn)象，依據(jù)此特性建立的一種對(duì)目的核酸分子進(jìn)行定性和定量分析的技術(shù)則稱為分子雜交技術(shù)。至尼龍膜等支持載體上的一種方法，該技術(shù)類似于用吸墨紙吸收紙張上的墨跡。酸片段。DNADNADNADNA有這些分子中的插入片段的總和，可代表某種生物的全部基因組序列或全部的mRNADNAcDNA克?。菏莵?lái)自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。DNADNADNA基因工程（GeneticEngineering：又稱基因操作（genemanipulation、DNA重組DNArecombination的藍(lán)圖，將一種或多種生物體（供體）的基因育載體在體外進(jìn)行拼接重組構(gòu)建成DNA（受體）內(nèi)，以改變生物原有的遺傳特性并表達(dá)出新的性狀。獲得新品種，生產(chǎn)新產(chǎn)品，或是研究基因的結(jié)構(gòu)和功能。因此，供體、受體和載體稱為基因工程的三大要素，其中相對(duì)于受體而言，來(lái)自供DNA可以將基因工程表征為分子克隆（MolecularCloning）或基因的無(wú)性繁殖。DNA生長(zhǎng)因子（growthfactor）部，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖的多肽類物質(zhì)。基因組：泛指一個(gè)生命體、病毒或細(xì)胞器的全部遺傳物質(zhì)。胞或組織在翻譯水平的蛋白質(zhì)表達(dá)譜。198630及其表達(dá)水平是否正常，從而對(duì)人體狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。揮作用而達(dá)到治療疾病目的的方法均稱為基因治療。DNARNA癌基因（oncogene）達(dá)異常，可以引起細(xì)胞癌變。病毒癌基因：存在于腫瘤細(xì)胞中，能使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。抑癌基因化，和抑制細(xì)胞遷移，因此起負(fù)調(diào)控作用，抑癌基因的突變是隱性的（）DNA二、問(wèn)答題轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)——操縱子調(diào)控模式基因、啟動(dòng)序列、操縱序列等。如：乳糖操縱子、色氨酸操縱子等。IO、一個(gè)PZYA。其中調(diào)節(jié)基因I（CAP）Z、YA其調(diào)節(jié)機(jī)制主要有正性和負(fù)性兩種模式。①阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：當(dāng)沒(méi)有乳糖時(shí)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)生成阻遏蛋白，阻遏蛋白結(jié)合操縱子序列出，阻礙RNA結(jié)合酶與啟動(dòng)序列結(jié)合，抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)，此時(shí)操縱子處于阻遏狀態(tài)；當(dāng)有半乳糖存在時(shí)，乳糖首先被轉(zhuǎn)變成半乳糖，半乳糖則作為一種誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，誘發(fā)蛋白質(zhì)構(gòu)象改變，使阻遏蛋白從啟動(dòng)序列上解離下來(lái)，從而啟動(dòng)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，此時(shí)操縱子處于誘導(dǎo)狀態(tài)。②CAPCAPcAMPCAP③協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：實(shí)際情況下，上述兩種調(diào)節(jié)方式是相輔相成、相互協(xié)調(diào)的。譬如：在無(wú)乳糖且有葡萄糖時(shí)，阻遏蛋白負(fù)性調(diào)節(jié)起作用，此時(shí)結(jié)構(gòu)基因不被轉(zhuǎn)錄；在有乳糖且有葡萄糖時(shí)，阻遏蛋白負(fù)性調(diào)節(jié)不起作用，此時(shí)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄水平低；結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平最高。生長(zhǎng)因子的作用機(jī)制同的響應(yīng)，生長(zhǎng)因子是作用機(jī)制分為三種情況：①生長(zhǎng)因子與具有酪氨酸蛋白激酶（TPK）活性的跨膜受體結(jié)合，TPK被活化，磷酸化相應(yīng)蛋白質(zhì)，產(chǎn)生生理效應(yīng)。因轉(zhuǎn)錄，達(dá)到調(diào)節(jié)生長(zhǎng)與分化的作用。與膜受體結(jié)與胞內(nèi)受體胞生長(zhǎng)。與膜受體結(jié)與胞內(nèi)受體活化酪氨酸激

生長(zhǎng)因子作用機(jī)制示意圖產(chǎn)生第二信生長(zhǎng)因子-受體復(fù)常規(guī)PCR生長(zhǎng)因子-受體復(fù)

活化蛋白激DNA核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活

激活胞核相關(guān)PCR由變性——退火——延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。（denatureDNA經(jīng)加熱至95DNAPCRDNA②退火annealing（復(fù)性：模板DNATm（55℃左右DNA交鏈。③延伸（extension：DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模DNA2~4302~3DNA貝。定量PCRPCRPCRPCRPCR反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（即Ct）和（或）相對(duì)定量。循環(huán)閾值（cyclethreshold，Ct）PCR信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。熒光閾值（threshold）PCR15（baseline3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10實(shí)際上就是熒光信號(hào)開(kāi)始由本底信號(hào)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)階段的拐點(diǎn)時(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度。SangerSanger法也稱雙脫氧鏈末端終止法，是目前應(yīng)用最為廣泛的方法。DNAddNTPdNTPDNADNAddNTPDNA由于ddNTP3'5'-位磷3',5'DNAddNTPSouthernNorthern相同點(diǎn)：基本流程相似不同點(diǎn)：SouthernSouthern（雜交）Northern（雜交）用途主要用于檢測(cè)基因組主要用于檢測(cè)RNADNA事先進(jìn)行限制性內(nèi)切酶需要不需要，可直接電泳處理進(jìn)行堿變性需要不需要，采而是用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳基因工程中如何選擇載體？基因工程選擇載體的標(biāo)準(zhǔn)如下：①能自主復(fù)制②具有兩個(gè)以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定③有克隆位點(diǎn)（外源DNA插入點(diǎn)DNA重組DNA重組DNA技術(shù)的基本操作過(guò)程可形象的歸納為“分、切、接、轉(zhuǎn)、篩DNADNAcDNAPCRDNADNADNA重組DNA分子導(dǎo)入相應(yīng)宿主細(xì)胞后，隨受體細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖而得以復(fù)制、擴(kuò)增。⑤重組體的篩選根據(jù)載體體系、宿主細(xì)胞特性及外源基因在受體細(xì)胞表達(dá)情況，采取直接選擇法和非直接選擇法進(jìn)行篩選，獲得含有重組DNA分子的克隆。⑥克隆基因的表達(dá)?？寺〉哪康幕蛉绻枰_而大量表達(dá)有特殊意義的蛋白質(zhì)，則需要建立相應(yīng)的表達(dá)體系，包括表達(dá)載體的構(gòu)建、受體細(xì)胞的建立及表達(dá)產(chǎn)物的分離、純化等。目前基因治療采用的方法分為哪幾種？基因治療的方法分為以下：①基因矯正，將致病基因的異常堿基進(jìn)行糾正，而正常部分予以保留的基因治療方法；②基因置換，用正常的基因通過(guò)體內(nèi)基因同源DNA治療方法；③基因增補(bǔ)，將目的基因?qū)氩∽兓蚱渌?xì)胞，不去除異常基因，通過(guò)目的基因的非定點(diǎn)整合，使其表達(dá)產(chǎn)物補(bǔ)償缺陷基因的功能或使原有的功能得以加強(qiáng)的基因治療方法；④基因失活，將特定的序列導(dǎo)入細(xì)胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)的治療方法；⑤自殺基因的應(yīng)用，用某些病毒或細(xì)菌的基因所表達(dá)的酶能將對(duì)人體無(wú)毒或低毒的藥物前體在人體細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞毒性產(chǎn)物，從而導(dǎo)致攜帶該基因的受體細(xì)胞也被殺死，故稱這類基因?yàn)椤白詺⒒蛑委煹幕具^(guò)程？?jī)?nèi)，將治療基因修飾的細(xì)胞以不同的方式回輸體內(nèi)以發(fā)揮治療作用。人類基因組計(jì)劃的基本任務(wù)及意義HCGHCG、序列圖。①遺傳圖：又稱連鎖圖，是具有遺傳多態(tài)性的遺傳標(biāo)記作RFLP、VNTRSNP。②物理圖譜：是以一段已知核苷酸的DNA片段DNA實(shí)際長(zhǎng)度（Mbkb）作為圖距的基因組圖。③5cDNA這四張圖被譽(yù)為人類“分子水平上的解剖圖”或“生命元素周期表性。因醫(yī)學(xué)的新時(shí)代；③推動(dòng)模式生物基因組的研究；④促進(jìn)學(xué)科交叉與重組。什么是基因組學(xué)？包括哪些內(nèi)容？基因組學(xué)于1986年被首次提出，以“人類基因組計(jì)劃”為誕生標(biāo)志，由“后基因組計(jì)劃”的實(shí)施推動(dòng)其發(fā)展的一門(mén)學(xué)科。基因組學(xué)的內(nèi)容亞領(lǐng)域 內(nèi)容結(jié)構(gòu)基因組學(xué)