化驗(yàn)室檢驗(yàn)分析技術(shù) 血液檢驗(yàn)（獸醫(yī)臨床診療技術(shù)）

獸醫(yī)臨床診療技術(shù)模塊2實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)分析技術(shù)項(xiàng)目1血液學(xué)檢查任務(wù)3血液生化檢驗(yàn)一、血糖的測(cè)定

血糖的測(cè)定采用光電比色法（福林-吳法）。原理無(wú)蛋白血濾液與堿性硫酸銅試劑混合加熱后，濾液內(nèi)的葡萄糖將二價(jià)的高銅[Cu(OH)2]還原為一價(jià)的低銅[Cu2O]，再加磷鉬酸試劑后，生成藍(lán)色的化合物鉬藍(lán)[Mo2O8]，藍(lán)色的深淺與葡萄糖濃度成正比。與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)管比色，即可求得血液中葡萄糖的濃度1．特制的血糖測(cè)定管2．堿性硫酸銅溶液3．磷鉬酸試劑4．0.25%安息香酸和10%鎢酸鈉5．1/3mol/L硫酸6．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液7．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液材料與設(shè)備一、血糖的測(cè)定1.制備無(wú)蛋白血濾液2.測(cè)血糖

取血糖測(cè)定管3支，標(biāo)明標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定和空白操作方法一、血糖的測(cè)定葡萄糖（mg/dl）＝單位轉(zhuǎn)換：（葡萄糖）mmol/L＝mg/dl×0.05551

正常值（mmol/L）：犬3.89～5.55計(jì)算判定標(biāo)準(zhǔn)一、血糖的測(cè)定二、血清總蛋白、白蛋白及球蛋白的測(cè)定原理與方法：

蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀、堿性酒石酸鈉、堿性酒石酸銅作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)，稱為雙縮脲反應(yīng)。根據(jù)顏色深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液比色，即可求得血蛋白質(zhì)含量參考值：犬總蛋白為54～78g/L，白蛋白為24～38g/L；貓的總蛋白為58～78g/L，白蛋白為26～41g/L臨床意義總蛋白增高

見于重癥脫水、水分?jǐn)z入障礙的失水、糖尿病、酸中毒和休克總蛋白減少

見于長(zhǎng)時(shí)間重度蛋白尿的各種腎病、肝硬化、營(yíng)養(yǎng)不良、重度甲狀腺亢進(jìn)、中毒、大量出血及貧血分光光度法原理

分光光度法，常被用來(lái)測(cè)定溶液中存在的光吸收物質(zhì)的濃度，其基本原理是根據(jù)Lambert和Beer定律。

Lambert定律

一束平行單色光垂直照射于一均勻物質(zhì)（溶液）時(shí)，由于溶液吸收一部分光能，使光的強(qiáng)度減弱，若溶液的濃度不變，則溶液的厚度愈大，光線強(qiáng)度的減弱也愈顯著。設(shè)：入射光強(qiáng)度為I0L表示溶液的厚度（即光程）出射光（透過(guò)光）強(qiáng)度為I根據(jù)輻射能理論推導(dǎo)，I0與I之間關(guān)系為lg（I0/I）=K1L（1）K1是常數(shù)，受光線波長(zhǎng)、溶液性質(zhì)、溶液濃度的影響。

Beer定律

當(dāng)一束單色光通過(guò)一溶液時(shí)，光能被溶液介質(zhì)吸收一部分，若溶液的厚度不變，則溶液濃度C愈大，光吸收愈大，透射光線強(qiáng)度的減弱也愈顯著，光強(qiáng)度減弱的量與溶液濃度增加量成正比

lg（I0/I）=K2C（2）K2為吸收系數(shù)，是常數(shù)，溶液對(duì)光吸收的大小與溶液濃度C成正比。Lambert-Beer定律（又稱吸收定律）

上二式合并（即（l）與（2）合并）

lg（I0/I）=CL令A(yù)=lg（I0/I），T=I/I0

；則A=CL，A=-lgT。T為透光率，A為吸光度（光密度、消光度）。其中為常數(shù)，又稱消光系數(shù)（extinctioncoefficient），表示物質(zhì)對(duì)光線吸收的能力，其值因物質(zhì)種類和光線波長(zhǎng)而異。對(duì)于相同物質(zhì)和相同波長(zhǎng)的單色光則消光系數(shù)不變。分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)

光源：鎢燈和氫燈（或氘燈）單色器：分解為單一波長(zhǎng)光的裝置狹縫：調(diào)節(jié)入射單色光的強(qiáng)度，形成平行光線吸收池：又稱比色杯、比色皿、比色池，裝待測(cè)溶液用檢測(cè)系統(tǒng)：感受光能，轉(zhuǎn)化為電能，輸出A值、T值。幾類分光光度計(jì)22PC型可見光分光光度計(jì)UNICO2000型S54型紫外分光光度計(jì)UV8500型紫外分光光度計(jì)比色杯（比色皿）玻璃比色杯石英比色杯熒光比色杯比色杯使用注意事項(xiàng)

1、拿取比色皿時(shí)，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，避免接觸光學(xué)面,光玻璃面對(duì)著光路。

2、不得將光學(xué)面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時(shí)，液面高于光路,高度為比色皿的2/3處即可，光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用檫鏡紙擦拭。

3、測(cè)定時(shí)濃度由低到高，進(jìn)行潤(rùn)洗。比色皿在使用后，應(yīng)立即用水沖洗干凈。必要時(shí)可用1：1的鹽酸浸泡，然后用水沖洗干凈。

4、不能將比色皿放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤；

5、在測(cè)量時(shí)如對(duì)比色皿有懷疑，可自行檢測(cè)。微量移液器吸嘴裝在吸液桿上，應(yīng)套牢避免間隙。依據(jù)所需容量旋轉(zhuǎn)手輪，使數(shù)輪顯示所需值。輕輕地將推動(dòng)按鈕下壓，使推動(dòng)按鈕推移至第一停點(diǎn)位置。手持取液器垂直浸入溶液中，吸嘴浸入深度為2-4mm，停留2-3秒后緩慢放松按鈕，即回到原來(lái)位置，溶液吸入后稍停即可將吸嘴移出液面。將取液器吸嘴置于排液容器內(nèi)。使吸嘴尖緊貼容器內(nèi)壁，按壓推動(dòng)按鈕至第二停點(diǎn)位置，使溶液排盡，松開按鈕。移液完畢，按壓卸嘴按鈕，將吸嘴脫卸。分光光度計(jì)的使用722型分光光度計(jì)樣品測(cè)試操作①打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘②用“波長(zhǎng)設(shè)置”按鈕將波長(zhǎng)設(shè)置在您將要使用的分析波長(zhǎng)位置上③

打開樣品室蓋，將參比溶液倒入比色皿中放入比色皿架靠近測(cè)定者一端位置，并將樣品溶液倒入比色皿中放入比色皿架的其它位置，蓋好樣品室蓋。④拉動(dòng)比色皿架拉桿一小格使比色皿架擋住光路，按“0%T”鍵調(diào)透射比零⑤

推入比色皿架使參比溶液位于光路中，蓋好樣品室蓋，按“100%T”調(diào)100%透射比⑥按“方式鍵”（MODE）將測(cè)試方式設(shè)置為吸光度方式(A)⑦打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋⑧將參比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”調(diào)A零⑨

將被測(cè)溶液拉入光路中，此時(shí)，顯示器上所顯示是被測(cè)樣品的吸光度參數(shù)⑩實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉電源，洗凈比色皿，并蓋好蓋布。光路光路血液葡萄糖測(cè)定(費(fèi)吳氏法)血液非蛋白氮測(cè)定血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測(cè)定（雙縮脲法）血清尿素測(cè)定（二乙酰-肟法）(一)血液葡萄糖測(cè)定(費(fèi)吳氏法)原理無(wú)蛋白血濾液中的葡萄糖，具有還原性，與堿性高銅混合加熱后，將高銅還原成氧化低銅而呈紅色沉淀，此沉淀物再被磷鉬酸氧化成藍(lán)色物質(zhì)。與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖管比色，而求得血糖含量。試劑0.25％苯甲酸溶液葡萄糖貯存標(biāo)準(zhǔn)液(1ml含10mg葡萄糖)

葡萄糖應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌0.1毫克葡萄糖)

堿性銅溶液磷鉬酸試劑

10％鎢酸鈉溶液

1/3mol／L硫酸溶液操作方法

鎢酸鈉法制備無(wú)蛋白血濾液50ml：取小燒杯或大試管一支，先加入蒸餾水7ml，再加入新鮮抗凝血1ml，充分混勻，使之溶血。然后，加入10％鎢酸鈉溶液1.0ml，混勻。最后，徐徐加入2／3N硫酸溶液1ml，隨加隨搖，充分混勻。放置5～10min后，用優(yōu)質(zhì)濾紙過(guò)濾或離心沉淀，即可獲得無(wú)色清亮無(wú)蛋白血濾液以供備用。

此法所得無(wú)蛋白血濾液近中性，不僅適用于葡萄糖的測(cè)定，還可用于非蛋白氮、尿素氮，肌酐等的測(cè)定。

步驟測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1無(wú)蛋白血濾液（ml）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）蒸餾水（ml）堿性銅溶液（ml）2002020200222混合后，在沸水中煮沸8min，取出后浸于冷水中2-3min（不可搖動(dòng)）3磷鉬酸試劑2ml2ml2ml4混合后，于室溫下靜置2min5蒸餾水加至25ml25ml25ml6混勻，待管內(nèi)二氧化碳逸出后比色，選用620nm濾光板比色，讀取各管密度值取血糖測(cè)定管3支，分別標(biāo)明測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管及空白管，按表操作。全血血糖含量（mg/100ml）＝測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.2×100/0.2臨床意義增高病理性增高糖尿病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)暫時(shí)性增高全麻后、肺炎、腎炎、顱內(nèi)壓增高、中樞神經(jīng)感染缺氧窒息減低生理性減低病理性減低胰島素分泌過(guò)多、嚴(yán)重貧血腎功能衰竭的慢性腎炎及功能減弱、甲狀腺功能減弱、腦垂休功能減退。多見長(zhǎng)時(shí)間的劇烈運(yùn)動(dòng)過(guò)后、過(guò)分饑餓及哺乳期竺(二)血液非蛋白氮測(cè)定原理血中的非蛋白氮物質(zhì)主要有尿素、尿酸、肌酸和肌醇等，均為蛋白質(zhì)代謝中間產(chǎn)物或最終產(chǎn)物。由于這些化合物不被蛋白沉淀，故測(cè)定無(wú)蛋白血濾液的含氮量即為非蛋白氮含量。試劑硫酸銨貯存標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌1mg氮)

硫酸銨應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌0.03mg氮)50%硫酸溶液碘化汞鉀試劑貯存液碘化汞鉀試劑應(yīng)用液步驟測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1無(wú)蛋白血濾液（ml）硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）100.21010.21000.202

將測(cè)定管置酒精燈上以小火加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色透明時(shí)為止，冷卻30min。3蒸餾水加至（ml）7774碘化汞鉀試劑應(yīng)用液（ml）3335

混合后，待10min，用480nm波長(zhǎng)或藍(lán)色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點(diǎn)，分別讀取各管讀數(shù)。此項(xiàng)操作應(yīng)在20min內(nèi)完成。

操作方法取草酸鉀抗凝全血（不能用雙草酸鹽抗凝血），以鎢酸鈉法制備無(wú)蛋白血濾液后，按表操作。全血非蛋白氮含量（mg/100ml）＝測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.03×100/0.1降低增高急、慢性腎炎尿毒癥腎盂積水泌尿系結(jié)核、結(jié)石阻塞嚴(yán)重?zé)齻罅繃I吐腹瀉腸梗阻血紅蛋白尿甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)末期腎上腺機(jī)能不全重金屬中毒等中毒性肝炎膽道術(shù)后妊娠晚期臨床意義(三)血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測(cè)定原理蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀/納/銅作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)，成為雙縮脲反應(yīng)。根據(jù)顏色的深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液比色，即可求得血液蛋白質(zhì)含量。試劑27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液雙縮脲試劑原理：當(dāng)脲加熱至180℃時(shí)，兩分子脲縮合，放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性條件下能與硫酸銅生成紫紅色絡(luò)合物，即發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵，與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，故蛋白質(zhì)與堿性硫酸銅也能形成紫紅色絡(luò)合物,在一定條件下其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可用來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。最大波長(zhǎng)位于540nm處。本法測(cè)定蛋白質(zhì)范圍1-10mg。雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度操作方法1、制備標(biāo)準(zhǔn)血清及測(cè)定其總蛋白量若無(wú)已備標(biāo)準(zhǔn)血清時(shí)，可收集多份健畜血清混合而成標(biāo)準(zhǔn)血清，并用微量定氮法測(cè)其總蛋白量。微量定氮法取血清1ml置于50ml量瓶中，用生理鹽水做50倍稀釋，混勻，供測(cè)總蛋白。另用血清制備無(wú)蛋白血濾液（同全血制備無(wú)蛋白血濾液法），供測(cè)非蛋白氮。然后按后表操作：步驟總蛋白測(cè)定管非蛋白氮測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）0.9%氯化鈉稀釋血清（ml）無(wú)蛋白血濾液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）00.200.21001.00.211.0000.210000.202除空白管外，均需加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色透明為止，冷卻3蒸餾水加至（ml）77774碘化汞鉀試劑應(yīng)用液（ml）33335

混勻后，用440nm波長(zhǎng)或藍(lán)色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點(diǎn)，分別讀取各管讀數(shù)。記錄。血清氮含量（mg/100ml）＝總蛋白測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.03×1000/0.004血清非蛋白氮含量（mg/100ml）＝非蛋白測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.03×1000/0.1血清總蛋白質(zhì)含量（g/100ml）＝（含氮量－非蛋白氮）×6.25/10002、制備標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)用液未經(jīng)稀釋標(biāo)準(zhǔn)血清0.2ml，加27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液3.8ml，混勻，備用。3、制備被檢血清總蛋白混懸液和白蛋白澄清液被檢血清0.2ml置試管中加入27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液3.8ml，混勻即得總蛋白混懸液。放置片刻，待氣泡上升后，取此混懸液1ml，做總蛋白測(cè)定。想剩余部分內(nèi)加入乙醚2.5ml，振搖混勻，2500rpm離心5min。后斜執(zhí)試管，用1ml吸管小心吸取下層澄清的白蛋白液1ml，供測(cè)白蛋白用。步驟總蛋白測(cè)定管非蛋白氮測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1被檢血清總蛋白混懸液液（ml）被檢血清白蛋白澄清液（ml）標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)用液（ml）27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液（ml）雙縮脲試劑（ml）00.200.21001.00.211.0000.210000.202充分混合均勻，置37℃恒溫箱或室溫暗處30min后，以540nm或綠色濾光板光電比色，以空白管校正光密度到0點(diǎn)，讀取各管讀數(shù)，記錄被檢血清總蛋白含量（g/100ml）＝總蛋白測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×標(biāo)準(zhǔn)血清總蛋白被檢血清白蛋白含量（g/100ml）＝白蛋白測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×標(biāo)準(zhǔn)血清總蛋白被檢血清球蛋白含量（g/100ml）＝被檢血清總蛋白量－被檢血清白蛋白量總蛋白升高重癥脫水、水分?jǐn)z入障礙的失水、糖尿病、酸中毒、休克總蛋白減低長(zhǎng)時(shí)間中毒蛋白尿的各種腎病、肝硬化腹水、營(yíng)養(yǎng)不良、重度甲狀腺功能亢進(jìn)、中毒、大量出血、貧血白蛋白增高嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、飲水不足、燒傷造成脫水及大出血，致使血漿濃縮而白蛋白相對(duì)增高白蛋白減少

白蛋白丟失過(guò)多腎病綜合征、嚴(yán)重出血、大面積燒傷、胸腹腔積水

白蛋白合成功能不全慢性肝臟疾病、惡性貧血和感染

蛋白質(zhì)攝入量不足營(yíng)養(yǎng)不良、消化吸收功能不良、蛋白攝入不足

蛋白質(zhì)消耗過(guò)大甲狀腺功能亢進(jìn)、各種慢性消耗性疾病、感染、外傷球蛋白增高肝硬化、絲蟲病、肺炎、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、結(jié)合活動(dòng)期臨床意義(四)血清尿素測(cè)定（二乙酰-肟法）原理在酸性反應(yīng)環(huán)境中加熱，二乙酰-肟分解二乙酰和羥胺，二乙酰與樣品中的尿素反應(yīng)，縮合成紅色的二嗪衍生物，成為Fearon反應(yīng)。反應(yīng)中加入硫胺脲和硫酸鎘，可提高反應(yīng)的靈敏度和顯色的穩(wěn)定性試劑酸性試劑

二乙酰-肟溶液

50%硫酸溶液尿素標(biāo)準(zhǔn)貯存液尿素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液操作方法步驟測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1二乙酰-肟溶液（ml）血清（ml）尿素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）蒸餾水（ml）酸性試劑（ml）100.21010.21000.202

混勻，置沸水浴中加熱12min，置冷水中冷卻5min，以空白管校正光密度至0點(diǎn)，540nm波長(zhǎng)比色血清尿素含量（mmol/L）＝測(cè)定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×5尿素含量增高腎前性

失水，引起血液濃縮，腎血流量減少，腎小球?yàn)V過(guò)率降低，使血中尿素潴留。腎性

急性腎衰竭時(shí)腎功能輕度受損腎后性

因尿道狹窄、尿路結(jié)石、膀胱腫瘤等致使尿道受壓臨床意義五、自動(dòng)生化分析儀及其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用檢測(cè)系統(tǒng)樣品、試劑處理系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)清洗系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

三、血清各類離子的測(cè)定

血清鈉測(cè)定

常用的測(cè)定方法有醋酸鈾鎂比色法、火焰光度計(jì)法、原子吸收分光光度計(jì)法和離子選擇電極法等參考值：犬

138～156mmol/L

貓

147～

156mmol/L臨床意義：1.血清鈉含量升高

臨床上少見，但也可見腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)或原發(fā)性醛固酮增多癥、失水性脫水和過(guò)多輸入高滲鹽水及食鹽中毒

2.血清鈉含量降低

（1）胃腸道失鈉

可見幽門梗阻、嘔吐、腹瀉、引流等都可丟失大量消化液而發(fā)生缺鈣

（2）鈉排出增多

可見嚴(yán)重腎盂腎炎、腎小管嚴(yán)重?fù)p害、腎上腺皮質(zhì)機(jī)能不全、糖尿病、應(yīng)用利尿劑治療、皮膚失鈉等（3）抗利尿激素過(guò)多

腎病綜合征的低蛋白血癥、肝硬化腹水等

常用的測(cè)定方法有四苯硼鈉比濁法、亞硝酸鈷鈾法、火焰光度計(jì)法、原子吸收分光光度計(jì)法和離子選擇電極法等

血清鉀測(cè)定正常值：犬

3.80～5.80mmol/L，貓

3.80～4.60mmol/L臨床意義：

血清鉀含量增高

見于腎上腺皮質(zhì)功能減退癥、急性或慢性腎功能衰竭、休克、組織擠壓傷、嚴(yán)重溶血、口服或注射含鉀液過(guò)多等

血清鉀含量低

常見于鉀鹽攝入不足，嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)，服用利尿劑，胰島素作用等

常見的測(cè)定方法有鈦黃比色法和原子吸收分光光度計(jì)法等參考值：犬

0.79～1.06mmol/L，貓

0.62～1.03mmol/L

血清鎂測(cè)定臨床意義1.血清鎂含量升高

見于腎衰竭、甲狀腺、甲狀旁腺機(jī)能減退及多發(fā)性骨髓瘤2.血清鎂含量降低

消化道丟失、消化吸收不良、尿路丟失、甲狀腺、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)等

常用的測(cè)定方法有乙二胺四乙酸二鈉滴定法、火焰分光光度計(jì)法、高錳酸鉀滴定法和離子選擇電極法等參考值：犬

2.57～2.97mmol/L貓

2.09～2.74mmol/L

血清鈣測(cè)定臨床意義1.血清鈣含量升高

見于甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)、內(nèi)服和注射維生素D過(guò)量、多發(fā)性骨髓瘤、胃腸炎和由于脫水而發(fā)生酸中毒時(shí)2.血清鈣含量降低

見于甲狀旁腺機(jī)能減退、維生素D缺乏、骨軟病、產(chǎn)后低鈣血癥及慢性腎炎和尿毒癥等

四、血漿二氧化碳結(jié)合力的測(cè)定原理臨床意義1．二氧化碳結(jié)合力增加（1）代謝性堿中毒：由于碳酸氫鈉過(guò)多所致，如胃酸分泌過(guò)多、小腸阻塞、嘔吐、攝入堿過(guò)多等（2）呼吸性酸中毒：由于二氧化碳過(guò)多所致。當(dāng)呼吸發(fā)生障礙時(shí)，二氧化碳不能自由呼出，血液中碳酸濃度增加，見于肺氣腫、肺炎、心力衰竭等

2.二氧化碳結(jié)合力降低（1）代謝性酸中毒由于碳酸氫鈉不足所致，見于長(zhǎng)期饑餓、腎炎后期、嚴(yán)重腹瀉、服用氯化銨過(guò)多等（2）呼吸性堿中毒由于二氧化碳不足所致，如換氣過(guò)度呼出二氧化碳過(guò)多，見于發(fā)熱性疾病、腦炎等

五、血清酶學(xué)檢驗(yàn)

小動(dòng)物臨床檢驗(yàn)常測(cè)定的血清酶有轉(zhuǎn)氨酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脫氫酶同工酶等。主要了解以上酶簡(jiǎn)單的測(cè)定方法和理解其臨床意義。常用的測(cè)定方法為肌酸顯色法犬正常值為60～359IU/L，貓正常值為95～1294IU/L

對(duì)心肌、骨骼肌損失及肌營(yíng)養(yǎng)不良的診斷有特異性。當(dāng)各種類型進(jìn)行性肌萎縮、腦損傷時(shí)，CPK增高；不適當(dāng)?shù)刈⑸淇股乜梢餋PK增高。CPK數(shù)值降低時(shí)，無(wú)臨床意義肌酸磷酸激酶（CPK）測(cè)定常用的測(cè)定方法有金氏比色法和賴氏比色法正常參考值：犬

23～56IU/L；貓

26～43IU/L谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測(cè)定臨床意義

血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高，見于急性肝炎、肝硬變、心肌炎及骨骼肌損傷

血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性降低，見于維生素吡哆醇缺乏和大面積肝壞死降低

GPT又稱丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），測(cè)定方法常用金氏比色法和賴氏比色法正常參考值:犬

21～66IU/L；貓

6～64IU/L谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT/ALT）測(cè)定臨床意義

犬許多組織、器官中含有谷丙轉(zhuǎn)氨酶，其中以肝臟中含量最高

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，見于犬傳染性肝炎、貓傳染性腹膜炎、馬傳染性貧血、肝膿腫和膽管組塞、甲狀腺機(jī)能降低、心臟功能不足、嚴(yán)重貧血和休克等

常用的測(cè)定方法為醋酸纖維薄膜電泳法正常參考值:犬

45～233IU/L；貓

63～273IU/L乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)定臨床意義：

LDH存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎臟等組織、器官。肌肉損傷、肝臟疾病、貧血或急性白血病時(shí)，血液中LDH會(huì)升高謝謝！獸醫(yī)臨床診療技術(shù)模塊2實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)分析技術(shù)項(xiàng)目1血液學(xué)檢查任務(wù)1血液樣品采集與抗凝血液樣品采集1.保定2.消毒3.采樣禽類：翅根靜脈、心臟豬：耳靜脈、前腔靜脈牛羊：頸靜脈犬貓：前臂頭靜脈、后肢隱小靜脈血液全血血漿血清血液學(xué)檢查血細(xì)胞計(jì)數(shù)分類與形態(tài)檢查血漿生理和病理檢驗(yàn)內(nèi)分泌激素生化與免疫學(xué)檢查血液的抗凝草酸鹽是常用的抗凝劑，每1.5-2.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常規(guī)檢驗(yàn)。因?qū)t細(xì)胞大小有影響，故不能用紅細(xì)胞壓積測(cè)定，如測(cè)定紅細(xì)胞壓積時(shí)，可用雙草酸鹽抗凝劑或乙二胺四乙酸二鈉。雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g草酸銨1.2g蒸餾水加至100ml溶解后吸取0.5ml，加入供采血試管或小瓶中，置干燥箱內(nèi)（溫度不超過(guò)80℃）烘干備用，可供5ml全血抗凝。血液檢驗(yàn)乙二胺四乙酸（EDTA

）鹽可適用于一般的血液學(xué)檢查，特別是血小板計(jì)數(shù)，但因?yàn)橛绊懷“寰奂桶准?xì)胞吞噬功能，不適合于血象及血小板功能檢查。（EDTA－Na2－H2O）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。（EDTA－K2－2H2O）1%溶液0.1ml可使5ml血液不凝固。全血細(xì)胞分析及血細(xì)胞比容測(cè)定。3.8%枸櫞酸鈉溶液每1ml可使4ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能檢查。因其毒性小又可作為血液保養(yǎng)液。但不適用于血液化學(xué)檢驗(yàn)。由于抗凝劑溶解緩慢，故只能配成溶液，不能用粉劑。血液檢驗(yàn)肝素肝素價(jià)格最貴，其優(yōu)點(diǎn)是抗凝作用強(qiáng)，不影響血細(xì)胞的體積，不致溶血等，可用于多種血液生物化學(xué)分析和紅細(xì)胞壓積測(cè)定。但過(guò)量的肝素可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少，故不適用于白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)，也不適用于血涂片檢查，因其在瑞氏染色時(shí)會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色背景，更不能用于血液學(xué)一般檢查。肝素是生理性抗凝劑,廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有的組織和細(xì)胞周圍，肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖?？鼓龣C(jī)制較為復(fù)雜，主要是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。通常用肝素粉劑配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶?jī)?nèi)，放于37～50℃中烘干后貯于冰箱內(nèi)保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝劑應(yīng)及時(shí)使用，放置過(guò)久易失效。

如分離血清，應(yīng)將全血采集在試管中（不加抗凝劑），在室溫下或25-37℃溫水中斜置，血清析出后即可分離。血漿應(yīng)在抗凝血采集后離心分離。血液采集后應(yīng)盡快送檢和檢測(cè)。不能立即送檢的血樣，血片應(yīng)固定，抗凝血、血漿和血清應(yīng)冷藏。送檢血樣應(yīng)編號(hào)，并避免劇烈振搖。血液學(xué)檢查項(xiàng)目與血樣保存的期限見下表

血樣的處理檢查項(xiàng)目保存時(shí)間（h）檢查項(xiàng)目保存時(shí)間（h）白細(xì)胞計(jì)數(shù)2-3血紅蛋白含量48紅細(xì)胞計(jì)數(shù)24紅細(xì)胞壓積容量24血小板計(jì)數(shù)1紅細(xì)胞沉降速率2-3網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)2-3白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1-2注意:懷疑傳染病時(shí)，采血應(yīng)防止到處流散，檢后殘余血液及所用器皿應(yīng)進(jìn)行消毒處理。紅細(xì)胞背景知識(shí)

紅細(xì)胞也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞，同時(shí)也是脊椎動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)血液運(yùn)送氧氣的最主要的媒介。在所有的脊椎動(dòng)物及若干無(wú)脊椎動(dòng)物，其血紅素包含在特定的細(xì)胞中來(lái)進(jìn)行其機(jī)能活動(dòng)，這種血球稱為紅細(xì)胞。其它的血細(xì)胞，如白血球，則是免疫細(xì)胞。紅細(xì)胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結(jié)合，因此紅細(xì)胞能通過(guò)血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運(yùn)送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過(guò)紅細(xì)胞運(yùn)到肺部并被排出體外。血紅蛋白更易和一氧化碳相合，當(dāng)空氣中一氧化碳含量增高時(shí)，可引起一氧化碳中毒。紅細(xì)胞和血紅蛋白的數(shù)量減少到一定程度時(shí)，稱為貧血。紅細(xì)胞大量被破壞可引起溶血性黃疸。紅細(xì)胞描述：多，小而圓，中央著色較淺，無(wú)核。禽類稱為凝血細(xì)胞，一般為卵圓形，有細(xì)胞核，比哺乳動(dòng)物的大得多，數(shù)量少。血液涂片的制備和細(xì)胞染色１、涂片的制作

選取一張邊緣平滑的載玻片作為推片(最好此載玻片稍窄或磨去兩角),用左手的拇指與中指夾持一張載玻片，取被檢血液一滴(最好是未加抗凝劑的新鮮血)置載玻片的一端，然后右手持推片傾斜30-40°角，由血滴的前方向后接觸血滴，待血液擴(kuò)散成線狀后，立即以均等的速度輕而平穩(wěn)地向前推進(jìn)，即形成血膜。涂片時(shí)，血滴越大，角度越大，推片速度越快，則血膜越厚，反之則血膜越薄。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的血片宜稍厚，進(jìn)行紅細(xì)胞形態(tài)及血原蟲檢查的血片宜稍薄。一張良好的血片，要求厚薄適宜，血液分布均勻，對(duì)光觀察呈霓虹色，邊緣整齊，能明顯分出頭，體，尾三部分，兩側(cè)留有空隙(以寫明畜別，編號(hào)、日期)。血膜分布不勻，主要是由于推片不齊，用力不勻，玻片不潔所致。推好的血片可在空氣中揮動(dòng)，使其迅速干燥，以防細(xì)胞皺縮變形，并盡快固定染色。為了觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識(shí)別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須進(jìn)行染色。原理染色是染料透入被染物并留存其內(nèi)部的一種過(guò)程，此過(guò)程既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)染料的親和力也不一樣。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染成紫藍(lán)色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。２、細(xì)胞染色瑞氏染色法姬姆薩氏染色法瑞－姬氏復(fù)合染色法（１）瑞氏染色法●瑞氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料亞甲藍(lán)●瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。將染色粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此繼續(xù)操作，直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日，每日震搖一次，過(guò)濾后即可應(yīng)用。新配的染液偏堿性，放置后可呈酸性。保存時(shí)間愈久，染色能力愈佳?！裢科渭尤旧骸茫薄瞞in——加磷酸鹽緩沖液混合均勻——３～5min——水沖洗——自然干燥——鏡檢(所得血片呈櫻紅色者為佳)（２）姬姆薩氏染色法●姬姆薩氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料天青●姬姆薩氏染液：姬姆薩氏染粉0.5g，中性甘油33ml，中性甲醇33ml。將染色粉置于研缽中，加少量甘油，充分研磨；加入所余甘油，在50～60℃水溶液中保溫1～2h，并用玻棒攪拌，使染粉溶解；最后加入甲醇，混合后裝入棕色瓶中，保存7日后過(guò)濾即成原液染色時(shí)取原液0.5～1ml，加pH6.8磷酸鹽緩沖液10ml，即成應(yīng)用液?！裢科状脊潭ǎ场祄in——置于染色液中染３０～６０min－水洗——吸干——鏡檢(玫瑰紫為佳)●對(duì)細(xì)胞核與寄生蟲效果好（３）瑞－姬氏復(fù)合染色法●瑞－姬氏復(fù)合染液：瑞氏染粉5.0g，姬姆薩氏染粉0.5g，甲醇500ml。將兩種染粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，傾入棕色瓶中，用剩余甲醇再研磨，最后一并裝入瓶中保存7日后過(guò)濾即成?！裢科渭尤疽骸?.5～１min后加等量緩沖液——５～１０min——吸干——鏡檢。磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀0.3g加磷酸氫二鈉0.2g再加蒸餾水至1000ml,配制成磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH,如無(wú)緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。謝謝！獸醫(yī)臨床診療技術(shù)模塊2實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)分析技術(shù)項(xiàng)目1血液學(xué)檢查紅細(xì)胞沉降率的測(cè)定紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定紅細(xì)胞滲透脆性的測(cè)定血液凝固時(shí)間測(cè)定血紅蛋白(Hb)含量測(cè)定血細(xì)胞檢驗(yàn)血小板計(jì)數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)內(nèi)容任務(wù)2血細(xì)胞相關(guān)性檢查定義:血液加入抗凝劑后，一定時(shí)間內(nèi)紅細(xì)胞向下沉降的毫米數(shù)，叫做紅細(xì)胞沉降速度，簡(jiǎn)稱血沉（ESP）。紅細(xì)胞沉降率測(cè)定血液檢驗(yàn)魏氏法先向10ml刻度試管中加入3.8%枸櫞酸1ml，再自靜脈采血4ml，顛倒混合數(shù)次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝劑至刻度0處，擦去管外血液，在室溫條件下，垂直放于血沉管架上，經(jīng)15、30、45、60min，分別觀察并記錄細(xì)胞沉降數(shù)值?！椒?/p>

1魏氏血沉管長(zhǎng)30cm，內(nèi)徑2.5mm管上有0~200的刻度，每一刻度的距離為1mm，其溶積為1ml。血液檢驗(yàn)“六五”型血沉管法于血沉管中加入抗凝劑（草酸鈉0.015~0.02g，枸櫞酸鈉粉末0.04~0.05g）,自頸靜脈直接采血至刻度“0”處，立即充分混合，于室溫垂直立于試管架上，鏡15、30、45、60min各觀察一次，并記錄紅細(xì)胞沉降的數(shù)值?！椒?/p>

2“六五”型血沉管法內(nèi)徑0.9cm，全長(zhǎng)17~20cm，管上有100個(gè)刻度容積為10ml。血液檢驗(yàn)各種動(dòng)物的正常血沉值動(dòng)物種類15min30min45min60min測(cè)定方法馬驢黃牛水牛奶牛山羊豬31329.80.33497530.80.785396.7650.752055110.70.891.61.20.630六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法六五型法①測(cè)定血沉?xí)r必須用新配制的抗凝血；②血液與抗凝劑混合要充分，柱面上不應(yīng)有氣泡，它可使血沉變慢；③用魏氏法測(cè)定時(shí)，事先應(yīng)檢查血沉架是否好用，以防漏液；④測(cè)定時(shí)室溫以20℃左右為宜，溫度過(guò)低可以減慢血沉。血沉值沒(méi)有獨(dú)立的診斷意義。血沉加快，見于馬傳染性貧血、梨形蟲病、結(jié)核、鼻疽、豬瘟、化膿性炎癥、風(fēng)濕癥等。血沉減慢，見于大出汗、多尿、劇烈腹瀉、馬流行性腦脊髓炎、破傷風(fēng)、牛瓣胃阻塞、腹痛癥等。臨床意義定義:是指壓緊的紅細(xì)胞在全血中所占的百分率,是鑒別貧血的一項(xiàng)不可缺少的指標(biāo),簡(jiǎn)稱比容。紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定管（溫氏測(cè)定管）長(zhǎng)約11cm,內(nèi)徑約2.5mm，管壁刻有0-10cm刻度，分度刻度1mm。用毛細(xì)玻璃吸管或長(zhǎng)針頭吸滿抗凝全血，將血液自上而下擠入溫氏測(cè)定管內(nèi)，至刻度10處；3000rpm離心30-40min。讀取紅細(xì)胞柱層的刻度數(shù)，即為紅細(xì)胞壓積容量數(shù)值，數(shù)值用百分率表示?！椒?、壓積升高2、壓積降低各種貧血生理性升高病理性升高各種脫水每超出高限一個(gè)小格（１mm)一天的補(bǔ)液量＝８００－１０００毫升定義:是指紅細(xì)胞在低滲氯化鈉溶液中的抵抗力，故又稱為紅細(xì)胞抵抗。紅細(xì)胞滲透脆性的測(cè)定取10ml刻度試管22支，分別標(biāo)明管號(hào)，每管分別加入個(gè)濃度低滲氯化鈉溶液5ml，再加入10%紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液2滴，混勻。室溫下放置10-15min，離心5min并觀察結(jié)果?？鼓?份，先用生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌1次，然后做成10%紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液備用。配制1%NaCl溶液，以0.02%為濃度梯度配制從0.76%-0.34%共22份濃度的低滲溶液。分別裝入100ml細(xì)口瓶中備用，每6-8周更換一次。溶液變?yōu)闇\桃紅色，管底有大量紅細(xì)胞沉淀，即開始溶血，此管的鹽水濃度代表紅細(xì)胞的最小抵抗；溶液呈深紅色，管底無(wú)紅細(xì)胞沉淀，即完全溶血，此管的鹽水濃度代表紅細(xì)胞最大抵抗。▲方法增高降低缺鐵性貧血免疫性溶血性貧血臨床意義定義:是指血液自血管流出直到完全凝固所需的時(shí)間，用以測(cè)定血液的凝固能力。血液凝固時(shí)間測(cè)定頸靜脈采血，見到出血后立即用秒表記錄時(shí)間。取血一滴，滴在玻片一端，隨即玻片稍稍傾斜，滴血一端向上。此時(shí)未凝固血液自上而下流動(dòng)，形成一條血線，放在室溫下的平皿內(nèi)，防止血液中水分蒸發(fā)，靜置2min，之后每隔30s用針尖跳動(dòng)血線一次，待針頭挑起纖維絲時(shí)，即停止秒表，記錄時(shí)間，即為血凝時(shí)間?！椒úＦê?jiǎn)單易行，但不及試管法準(zhǔn)確試管法采血前準(zhǔn)備刻度小試管3支，并預(yù)先放在25-37℃恒溫水浴箱內(nèi)。頸靜脈采血，剪刀出血立即開始計(jì)時(shí)。隨之將血液分別加入3支試管內(nèi)，每支試管各加1ml，再將試管放回水浴箱。放置3min后，先從第一管做起，每隔30s逐次傾斜試管一次，直到翻轉(zhuǎn)試管血液不能流出為止，并記錄時(shí)間。3支小試管的平均時(shí)間即為血凝時(shí)間。適用于出血性疾病的研究與診斷延長(zhǎng)縮短重度貧血血斑病肝臟病炭疽病偶見于纖維素性肺炎臨床意義血液檢驗(yàn)紅細(xì)胞遇酸溶解，游離出血紅蛋白，并被酸化為褐色的酸性血紅素，稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色柱比色，即可求得血紅蛋白的含量。血紅蛋白試紙測(cè)定法器材應(yīng)備有測(cè)定血紅蛋白試紙和4g%~15g%血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)比色板。測(cè)定時(shí)，取試紙一條，吸附被檢血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附標(biāo)準(zhǔn)色板的小孔下，肉眼與色板色澤進(jìn)行比較，選擇顏色相同或近似者，即得100ml血液所含血紅蛋白的克數(shù)。血紅蛋白測(cè)定沙利氏血紅蛋白測(cè)定法沙利氏血紅蛋白計(jì)由比色架、標(biāo)準(zhǔn)比色柱、血紅蛋白測(cè)定管及血紅蛋白吸管組成。測(cè)定管有兩個(gè)刻度標(biāo)志，一側(cè)的2~24刻度表示100ml血液中含有的血紅蛋白克數(shù)；另一側(cè)有20~160刻度，表示100ml血液中所含血紅蛋白的百分?jǐn)?shù)。在血紅蛋白稀釋管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度10%處。用血紅蛋白吸管吸取血液至20mm3刻度處，，拭凈管外附著血液，迅速將試管內(nèi)血液緩緩吹入血紅蛋白洗試管內(nèi)的鹽酸溶液中，再吸取上層鹽酸溶液反復(fù)吹洗數(shù)次，勿使產(chǎn)生氣泡。移去血紅蛋白吸管，用小玻璃棒攪拌或輕輕搖振，使血液與鹽酸溶液混合而呈褐色。將測(cè)定管插入比色架內(nèi)，靜置10min。慢慢分次沿測(cè)定管壁滴加蒸餾水，邊加邊混勻，邊比色，直至血紅蛋白測(cè)定管液體的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色柱一致為止，讀取測(cè)定管液體凹面最低處的刻度數(shù)，即為100ml血液內(nèi)所含血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)?！椒ㄑ簷z驗(yàn)動(dòng)物種類血紅蛋白值（克/100毫升）馬、騾11.0（9.0~13.0）牛10.0（9.0~11.0）水牛8.3（8.0~9.0）羊9.8（7.8~11.6）豬10.5（9.5~12.0）雞12.5（10.0~14.5）血紅蛋白增高見于各種原因引起的血液濃縮，如腹瀉、嘔吐、大汗、多尿及腸梗阻等。血紅蛋白減少見于各種貧血，如馬鼻疽、牛結(jié)核、牛羊肝片吸蟲病、仔豬蛔蟲等。臨床意義紅細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血細(xì)胞檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是將一定量的供檢全血經(jīng)一定倍數(shù)（200倍）稀釋后，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，數(shù)一定體積的紅細(xì)胞數(shù)，然后再推算出1mm3血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

（redbloodcellcount，RBC）沖液

計(jì)數(shù)方法

臨床上最常用的是改良紐巴（Neubauer）氏計(jì)數(shù)板，它是由一塊特制的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中間有橫溝將其分為三個(gè)狹窄的平臺(tái)，兩邊的平臺(tái)較中間的平臺(tái)高0.1mm。中央平臺(tái)又有一縱溝相隔，其上各刻有一個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室劃分為9個(gè)大方格，每一大方格面積為1.0mm2，深度為0.1mm；四角每一大方格劃分為16個(gè)中方格，為計(jì)數(shù)白細(xì)胞用。中央一大方格用雙線劃分為25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又劃分為16個(gè)小方格，共計(jì)400個(gè)小方格，此為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)之用。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

用5ml吸管吸取紅細(xì)胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至2020mm3刻度處（或吸血至刻度10處，紅細(xì)胞稀釋液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數(shù)次，以洗出沙利氏管內(nèi)粘附的血細(xì)胞，然后試管口加塞，顛倒混合數(shù)次，再用毛細(xì)吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計(jì)數(shù)室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計(jì)數(shù)室中。注意充液不可過(guò)多或過(guò)少，過(guò)多則溢出而流入兩側(cè)槽內(nèi)，過(guò)少則計(jì)數(shù)池中形成氣泡，致使無(wú)法計(jì)數(shù)。

計(jì)數(shù)時(shí)，先用低倍鏡，光線要稍暗些，找到計(jì)數(shù)室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在此中央大方格內(nèi)選擇四角與最中的五個(gè)中方格（或用對(duì)角線的方法數(shù)五個(gè)中方格），每個(gè)中方格有16個(gè)小方格，所以共計(jì)數(shù)80個(gè)小方格。計(jì)數(shù)時(shí)注意壓在左邊雙線上的紅細(xì)胞計(jì)在內(nèi)，壓在右邊雙線上的紅細(xì)胞則不計(jì)數(shù)在內(nèi)；同樣，壓在上線的計(jì)入，壓在下線的不計(jì)入，此所謂“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的計(jì)數(shù)法則。計(jì)算1mm3血液中紅細(xì)胞個(gè)數(shù)=X/80×400×200×10。X:5個(gè)中方格(即80個(gè)小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。400:一個(gè)大方格，即1mm2面積內(nèi)共有400個(gè)小方格。200:稀釋倍數(shù)。10:血蓋片與計(jì)數(shù)板的實(shí)際高度是1/10mm，乘10后則為1.0mm。上式簡(jiǎn)化后為:1mm3紅細(xì)胞數(shù)=X×10,000充液量不可過(guò)多或過(guò)少，過(guò)多可使血蓋片浮起，過(guò)少則計(jì)數(shù)室中形成小的空氣泡，使計(jì)數(shù)結(jié)果偏低甚至無(wú)法計(jì)數(shù)。顯微鏡臺(tái)應(yīng)保持水平，否則計(jì)數(shù)室內(nèi)的液體流向一側(cè)而計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。沙利氏吸血管或試管，每次用完后，先用清水吸吹數(shù)次，然后用蒸餾水、酒精、乙醚，按次序分別吸吹數(shù)次，干后備下次使用。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用蒸餾水沖洗后，用絨布輕輕擦干即可，切不可用粗布擦試，也不可用酒精、乙醚等溶液沖洗。注意事項(xiàng)血液檢驗(yàn)健康豬紅細(xì)胞數(shù)為5.5×1012/L；奶牛5.98×1012/L；奶山羊17.2×1012/L；健康犬紅細(xì)胞數(shù)為6.8×1012/L，變動(dòng)范圍為5.5-8.5×1012/L；健康貓紅細(xì)胞數(shù)為6.5-9.5×1012/L。紅細(xì)胞增多

可見于因各種原因引起的脫水，進(jìn)而使血液濃縮，表現(xiàn)為紅細(xì)胞相對(duì)增多，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的滲出期等。紅細(xì)胞減少

多見于各種類型貧血，如失血性貧血、營(yíng)養(yǎng)性貧血、溶血病等。此外，紅細(xì)胞生成不足或破壞增多，亦可導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)減少。臨床意義白細(xì)胞計(jì)數(shù)

whitebloodcellcount，WBC

一定量的血液用冰醋酸溶液稀釋后，可將紅細(xì)胞破壞，然后在細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)計(jì)數(shù)一定容積的白細(xì)胞數(shù)，一次推算出每立方毫米內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)。用1ml吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，反復(fù)吸吹數(shù)次，以洗凈管內(nèi)所粘附的白細(xì)胞，充分振蕩混合。再用毛細(xì)吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置1～2min，低倍鏡檢查。將計(jì)數(shù)室四角四個(gè)大方格內(nèi)的全部白細(xì)胞依次數(shù)完，注意壓在左線和上線的計(jì)入，壓在右線和下線的不計(jì)入。1mm3血液中白細(xì)胞數(shù)=x/4×20×10X：四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。x/4：一個(gè)大方格（面積為1mm2）內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計(jì)數(shù)板的實(shí)際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡(jiǎn)化后為1mm3血液中白細(xì)胞數(shù)=x×50計(jì)算血液檢驗(yàn)白細(xì)胞增多可見于多數(shù)細(xì)菌性感染和炎癥，如豬丹毒、豬肺疫、結(jié)核、馬鼻疽、馬腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病時(shí)以白細(xì)胞的顯著增多為特征。白細(xì)胞減少主要見于某些病毒性傳染病，如豬瘟、流感等；某些重度疾病的后期；長(zhǎng)期應(yīng)用某些藥物（如氯霉素等）；梨形蟲病等。臨床意義健康豬白細(xì)胞總數(shù)14.0±0.93×109/L；奶牛白細(xì)胞總數(shù)9.41±2.13×109/L；奶山羊白細(xì)胞總數(shù)13.2±1.88×109/L；健康犬白細(xì)胞總數(shù)為6.0-17.0×109/L。健康貓白細(xì)胞總數(shù)為9.0-24.0×109/L。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

differentialcountofwhitebloodcell，DC

外周血液中的白細(xì)胞主要有5種，即嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性白細(xì)胞、嗜堿性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，它們各有其特定的生理機(jī)能，在正常時(shí)這5種白細(xì)胞之間有一定的比例。但在病理情況下，白細(xì)胞總數(shù)的變化反映機(jī)體防御機(jī)能的一般狀態(tài)，各種白細(xì)胞之間百分比的變化，則反映機(jī)體防御機(jī)能的特殊狀態(tài)。由于白細(xì)胞總數(shù)的增減并不一定表示各類白細(xì)胞平均增多或減少，常常僅限于某一種或兩種白細(xì)胞數(shù)的變化，從而引起白細(xì)胞之間百分比的相對(duì)改變。因此，白細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)疾病的診斷具有一般意義，而白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)則具有具體意義，在分析臨床意義時(shí)，必須把二者結(jié)合起來(lái)。

鏡檢技術(shù)將被檢血液涂片，經(jīng)瑞氏染色或姬姆薩染色，水洗，干燥后鏡檢。先用低倍鏡全面觀察血片上細(xì)胞分布情況及染色質(zhì)量，然后選擇染色良好，細(xì)胞分布均勻的部分，用油鏡進(jìn)行分類。由于比重大的細(xì)胞(粒細(xì)胞，單核細(xì)胞等)多分布在血片的邊緣和尾部，比重小的細(xì)胞(如小淋巴細(xì)胞等)則多分布在血片的頭部和中間。為減少這種細(xì)胞分布的固有誤差并避免重復(fù)計(jì)數(shù)，血片必須按一定方向曲折移動(dòng)而分類計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，為避免重復(fù)和遺漏，可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計(jì)數(shù)法推移血片，記錄每一區(qū)的各種白細(xì)胞數(shù)。每張血片最少計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞(如果計(jì)數(shù)200-300個(gè)白細(xì)胞，當(dāng)然其百分率更為準(zhǔn)確)，連續(xù)觀察2～3張血片，求出各種白細(xì)胞的百分比。記錄時(shí)，可用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器，也可事先設(shè)計(jì)一表格，用畫“正”字的方法記錄，以便于統(tǒng)計(jì)百分?jǐn)?shù)。

各類白細(xì)胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認(rèn)各種白細(xì)胞時(shí)，必須掌握其主要特征，如細(xì)胞大小，核的形狀結(jié)構(gòu)及染色性，胞漿顏色、有無(wú)顆粒及顆粒特點(diǎn)等。在同一張血片上對(duì)照比較，互相鑒別。1．嗜中性白細(xì)胞。圓形，直徑約10—15μm。胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細(xì)小顆粒(染色不佳時(shí)則看不清楚)。核染成深紫色，其形狀多樣，核微呈腎形，染色稍淡的稱幼年核，呈帶形或S形，兩邊平行的稱桿狀核，分成2—3葉，在葉之間有細(xì)絲相連的稱分葉核。有時(shí)因核葉重疊看不到細(xì)絲，但核量較多，染色質(zhì)致密，也可認(rèn)為是分葉核。2．嗜酸性白細(xì)胞。大小，形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒(馬的這種嗜酸性顆粒明顯大于其它家畜)。核多數(shù)為兩葉。3．嗜堿性白細(xì)胞。大小、形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍(lán)色顆粒，常遮蓋在核上。核分葉不明顯。4．淋巴細(xì)胞。分大小兩種，小淋巴細(xì)胞圓形，直徑約7—10μm，核染成深紫色，圓形或腎形。胞漿很少，常僅呈一小片月牙狀，染成藍(lán)色。大淋巴細(xì)胞直徑約10—19μm，核圓形或腎形。胞漿相對(duì)較多，染成天藍(lán)色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時(shí)內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。5．單核細(xì)胞。是外周血液中最大的細(xì)胞，直徑約為12—24μm。核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則，呈腎形，多角形，折疊狀等。胞漿較多，染成淺灰藍(lán)色，有時(shí)內(nèi)含少量灰塵樣淡紅色小顆粒。血液檢驗(yàn)臨床意義白細(xì)胞增多嗜中性白細(xì)胞增多：見于急性炎癥及外傷感染、化膿性感染等。嗜酸性白細(xì)胞增多：見于某些寄生蟲病、過(guò)敏性疾病及濕疹等。淋巴細(xì)胞增多：見于結(jié)核、布氏桿菌病及犬瘟熱、流感等病毒病。單核細(xì)胞增多：見于敗血性疾病，某些焦蟲病及李氏桿菌等。白細(xì)胞減少嗜中性白細(xì)胞減少：見于病毒性傳染病、藥物中毒（如長(zhǎng)期服用