組培技術(shù)研發(fā)-數(shù)據(jù)調(diào)查與分析（園藝植物組織培養(yǎng)）

項(xiàng)目二數(shù)據(jù)調(diào)查與分析模塊四組培技術(shù)研發(fā)123CONTENTS組培苗觀察編制組培觀察表試驗(yàn)問題分析與處理項(xiàng)目二數(shù)據(jù)調(diào)查與分析三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)三、試驗(yàn)問題分析與處理（一）污染的原因及預(yù)防（二）褐變的原因及預(yù)防（三）玻璃化的原因及預(yù)防（四）其它

三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)（一）污染的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)含義：在組培過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。1.污染原因

細(xì)菌、真菌為病源菌。①外植體滅菌不徹底；②培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底；③操作人員未遵守操作規(guī)程；④環(huán)境不清潔。（一）污染的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)真菌性污染三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)真菌性污染三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)細(xì)菌性污染三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)細(xì)菌、真菌混合性污染三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)（1）防止材料帶菌：避免陰雨天在室外采集外植體；春秋采集；材料預(yù)培養(yǎng)；（2）嚴(yán)格外植體滅菌；

（3）接種用具滅菌徹底；

（4）嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程；

（5）保持培養(yǎng)室清潔；2.預(yù)防措施（一）污染的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)（二）褐變的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)1.褐變的原因（1）植物品種（基因型）（2）生理狀態(tài)

（3）培養(yǎng)基成分

（4）培養(yǎng)條件

（5）材料轉(zhuǎn)移時(shí)間（二）褐變的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)

生理狀態(tài)材料：幼齡期＜成年型組織：細(xì)嫩組織＜老熟組織注意：枝條取芽時(shí)期和部位！（春、冬季取材）三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)無機(jī)鹽濃度過高、CTK水平過高；外植體在最適宜的脫分化條件下，細(xì)胞大量增殖，抑制褐變。培養(yǎng)基成分三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)條件光照過強(qiáng)，溫度過高，培養(yǎng)時(shí)間過長，加速褐變。三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)2.防止措施（二）褐變的原因及預(yù)防（1）選擇適宜的外植體；（2）選擇合適的培養(yǎng)條件；

（3）連續(xù)培養(yǎng)；

（4）加抗氧化劑（VC、PVP、牛血清、牛蛋白）；

（5）加0.1－0.5%活性炭；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)（三）玻璃化的原因及預(yù)防

1.含義:離體培養(yǎng)物的嫩莖或葉呈半透明水漬狀，為生理失調(diào)癥。

三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)2.癥狀：

矮小腫脹，失綠，，莖葉表皮無蠟質(zhì)層，無功能性氣孔，葉、嫩梢呈水晶透明或半透明；葉色淺，葉片皺縮并縱向卷曲，脆弱易碎；組織發(fā)育不全或畸形；體內(nèi)含水量高，干物質(zhì)等含量低；試管苗生長緩慢，分化能力降低。

三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)3.原因：細(xì)胞過程中的環(huán)境變化引起。（1）激素濃度（尤其CTK）增加或CTK╱IAA高；（2）瓊脂濃度低；

（3）光照時(shí)間大于15h；

（4）溫度低；

（5）通風(fēng)條件不好；

（6）培養(yǎng)基離子種類及比例不適宜；（三）玻璃化的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)

4.預(yù)防措施

（1）適當(dāng)控制培養(yǎng)基中無機(jī)鹽成分，適當(dāng)提高蔗糖和瓊脂濃度，減少含氮化合物的用量，降低培養(yǎng)基的水勢(shì)。（2）適當(dāng)降低CTK和GA的濃度?？紤]加入適當(dāng)?shù)拿撀渌帷?/p>

（三）玻璃化的原因及預(yù)防三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)（三）玻璃化的原因及預(yù)防4.預(yù)防措施

（3）增加自然光照，控制光照時(shí)間；增加容器通氣，控制溫度。（4）加入其他物質(zhì)（如活性炭、多效唑、CCC）。三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)1.材料死亡2.黃化3.變異和畸形4.增殖率低下或過盛5.組培苗瘦弱或徒長6.不生根或生根率低7.過渡苗死亡率高（四）其它三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)1.材料死亡三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)1.材料死亡原因與預(yù)防外植體滅菌過度；污染；培養(yǎng)基不適宜或配制有問題；培養(yǎng)環(huán)境惡化；滅菌濃度和時(shí)間適宜；注意環(huán)境和個(gè)人衛(wèi)生，嚴(yán)格操作；選用合適培養(yǎng)基；改善培養(yǎng)環(huán)境，及時(shí)轉(zhuǎn)移和分瓶；加強(qiáng)組培苗的過渡管理；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)黃化三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)黃化三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)2.黃化培養(yǎng)基中Fe含量不足；礦物營養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶內(nèi)乙烯量高；激素配比不當(dāng)；糖用量不足，長期不轉(zhuǎn)移；培養(yǎng)溫度不適；光照不足；原因：三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)3.變異和畸形春蘭種子萌發(fā)形成的根狀莖三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)3.變異和畸形原因：激素濃度和選用的種類不當(dāng)；

環(huán)境惡化和不適。預(yù)防：降低CTK濃度，調(diào)整生長素與CTK的比例；改善環(huán)境條件。三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)4.增殖率低下或過盛原因：與品種特性有關(guān)；與激素濃度和配比有關(guān)。預(yù)防：確定一定范圍的激素比試驗(yàn)，根據(jù)長勢(shì)確定配方，并及時(shí)調(diào)整；交替使用兩種培養(yǎng)基；考慮品種的田間表現(xiàn)和特性，優(yōu)化培養(yǎng)環(huán)境。三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)5.組培苗瘦弱或徒長三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)5.組培苗瘦弱或徒長◆CTK過高，過多不定芽未及時(shí)轉(zhuǎn)移和分切；◆溫度過高；◆光照不足；◆培養(yǎng)基水分過多；◆通氣不良；原因：三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)5.組培苗瘦弱或徒長◆減少CTK用量；◆加速轉(zhuǎn)瓶，降低接種量；◆降低環(huán)境溫度；◆提高光強(qiáng)，延長光照時(shí)間；預(yù)防措施：◆適當(dāng)增加培養(yǎng)基硬度；◆用透氣膜做封口；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)6.不生根或生根率低原因：◆繁殖苗基質(zhì)受損；◆種類和品種間的差異；◆激素種類和濃度；◆環(huán)境條件；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)6.不生根或生根率低預(yù)防：◆切割苗基部時(shí)，刀要快，用力均勻，平整無損傷；◆對(duì)難生根品種，從激素種類和水平、環(huán)境條件綜合調(diào)控；◆生根苗基部盡是不帶愈傷組織；◆掌握種類操作要領(lǐng)和質(zhì)量要求；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)原因：7.過渡苗死亡率高◆環(huán)境條件不適；◆組培苗質(zhì)量差；◆管理不精細(xì)；三、試驗(yàn)問題分析與處理園藝植物組織培養(yǎng)預(yù)防：7.過渡苗死亡率高◆及時(shí)出瓶，盡快移栽；◆培育高質(zhì)量組培苗；◆改善環(huán)境條件；◆采取配套的管理措施，加強(qiáng)過渡苗的肥水管理和病蟲害防治；項(xiàng)目二數(shù)據(jù)調(diào)查與分析模塊四組培技術(shù)研發(fā)12CONTENTS組培苗觀察編制組培觀察表項(xiàng)目二數(shù)據(jù)調(diào)查與分析3試驗(yàn)問題分析與處理一、組培苗觀察（一）組培試驗(yàn)數(shù)據(jù)指標(biāo)及含義（二）組培觀察的內(nèi)容、方法與注意事項(xiàng)（三）觀察、記錄填寫要點(diǎn)

一、組培苗觀察園藝植物組織培養(yǎng)1.直接觀察和測(cè)量的數(shù)據(jù)（長勢(shì)、長相、葉色、不定芽高度、愈傷組織大小、生長狀況等。）2.需要計(jì)算的技術(shù)指標(biāo)

（出愈率、污染率、分化率、增殖率、生根率、成活率等。）（一）組培試驗(yàn)數(shù)據(jù)指標(biāo)及含義

園藝植物組織培養(yǎng)一、組培苗觀察表1

組培技術(shù)指標(biāo)指標(biāo)名稱含義計(jì)算公式出愈率反映無菌材料愈傷組織誘導(dǎo)的效果。形成愈傷組織的材料數(shù)∕培養(yǎng)材料總×100%污染率大致反映雜菌侵染程度和接種質(zhì)量。污染的材料數(shù)∕培養(yǎng)材料總數(shù)×100%分化率反映無菌材料的分化能力與再分化能力。分化的材料數(shù)∕培養(yǎng)材料總數(shù)×100%增殖率反映中間繁殖體的生長速度和增殖數(shù)量的變化。一個(gè)增殖周期擴(kuò)繁的中間繁殖體數(shù)∕一次增殖轉(zhuǎn)接材料總數(shù)×100%生根率大致反映無根芽苗根原基發(fā)生的快慢和生根效果。生根總數(shù)∕生根培養(yǎng)總苗數(shù)×100%成活率反映組培苗的適應(yīng)性與移栽效果，一定程度上說明組培與快繁成功率的高低。40天時(shí)成活植株總數(shù)∕移栽植株總數(shù)總數(shù)×100%園藝植物組織培養(yǎng)一、組培苗觀察（二）組培觀察的內(nèi)容、方法

1.觀察階段（初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、馴化移栽）2.觀察方法

（目視觀察、顯微鏡觀察、照相、計(jì)算等）園藝植物組織培養(yǎng)一、組培苗觀察觀察階段觀察的內(nèi)容要點(diǎn)觀察方法初代培養(yǎng)外植體變化；愈傷組織、胚狀體和芽萌動(dòng)時(shí)間與數(shù)量；出愈率；分化率；胚狀體或原球莖的誘導(dǎo)率和污染率、褐變率等異?，F(xiàn)象。目視觀察；照相；計(jì)算繼代培養(yǎng)中間繁殖體的長勢(shì)（生長量、健壯程度等）；長相（形態(tài)、結(jié)構(gòu)、質(zhì)地、大小、高度、顏色、位置等）；增值率和污染率、褐變率、玻璃化苗發(fā)生率、變異率等異?，F(xiàn)象。目視；照相；顯微觀察；計(jì)算生根培養(yǎng)根發(fā)生時(shí)間；長勢(shì)（生長量、根發(fā)達(dá)程度）；長相（根長、根數(shù)、根粗、根色、位置等）；生根率和污染率、畸形根發(fā)生率等異?，F(xiàn)象。目視；照相；顯微觀察；計(jì)算馴化移栽試管苗長勢(shì)（生長量、健壯程度）；長相（株高、根數(shù)、根長、根色、葉厚、葉色、葉數(shù)等）；馴化移栽成活率；壯苗指數(shù)；變異率等。目視；計(jì)算；試驗(yàn)表2

組培苗觀察的內(nèi)容與方法園藝植物組織培養(yǎng)一、組培苗觀察

及時(shí)認(rèn)真觀察記錄；數(shù)據(jù)調(diào)查準(zhǔn)確；記錄全面、客觀；及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題。1.觀察組培苗時(shí)，手不要握封口處，以防二次污染。2.定量觀察時(shí)，有些指標(biāo)需要按照公式準(zhǔn)確計(jì)算。3.細(xì)菌污染和真菌污染出現(xiàn)的時(shí)間和表現(xiàn)的癥狀是不同的。4.組培苗觀察的內(nèi)容和方法的選擇因培養(yǎng)階段不同而不同。（三）觀察、記錄填寫要