主管檢驗(yàn)技師考試臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)講義細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)

第第1頁共6頁·細(xì)菌的培育與分別技術(shù)考點(diǎn)根本條件細(xì)菌的接種與分別技術(shù)細(xì)菌培育的方法細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌L【內(nèi)容講解】細(xì)菌培育是將細(xì)菌接種到培育基內(nèi)，并在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境內(nèi)，使細(xì)菌生長和生殖。分別培育是指從標(biāo)本中培育出細(xì)菌或者從混有多種細(xì)菌的標(biāo)本中將各個(gè)菌種分別同時(shí)培育出來。一、根本條件〔一〕細(xì)菌試驗(yàn)室〔二〕無菌試驗(yàn)室〔三〕根本設(shè)備和器具〔一〕細(xì)菌試驗(yàn)室標(biāo)本接種、培育、分別、鑒定及藥敏試驗(yàn)等工作都要在此完成。細(xì)菌室必需安裝嚴(yán)密的門窗，以防室內(nèi)環(huán)境受到外界的污染。且室內(nèi)禁用風(fēng)扇，避開細(xì)菌的播散。細(xì)菌室必需安裝供空氣消毒的紫外線燈，置于操作臺上面lm處，每天開頭工作前照耀20min。對其消毒效果要定期檢查，準(zhǔn)時(shí)更換失效的燈管。室內(nèi)應(yīng)備有消毒劑，用于試驗(yàn)中發(fā)生菌液灑濺時(shí)的準(zhǔn)時(shí)消毒處理。同時(shí)還應(yīng)備有供工作人員浸手用的盛有消毒劑的水盆、肥皂及自來水源等。室內(nèi)操作臺須每日用消毒劑擦洗，地面至少一周用消毒劑擦洗l次。對接收的標(biāo)本、無菌器具、用過的物品等應(yīng)明顯分開并放在指定位置。同時(shí)要對用過的物品準(zhǔn)時(shí)進(jìn)展滅菌處理。細(xì)菌室依據(jù)當(dāng)?shù)氐臍鉁靥攸c(diǎn)，安裝空調(diào)機(jī)，以適合細(xì)菌試驗(yàn)工作。同時(shí)室內(nèi)應(yīng)設(shè)置必要的消防設(shè)備?！捕碂o菌試驗(yàn)室無菌試驗(yàn)室是細(xì)菌試驗(yàn)室內(nèi)用于無菌操作的小室，其內(nèi)部裝飾、消毒條件要求更嚴(yán)格。無菌室應(yīng)完全封閉，人員出入應(yīng)有兩道門，其間應(yīng)隔有緩沖區(qū)。用前應(yīng)以紫外線消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，徹底消毒。在無菌室中一般僅限于分裝無菌的培育基及傳染性強(qiáng)的細(xì)菌的接種，不進(jìn)展有菌標(biāo)本的分別及其他操作。無菌室內(nèi)應(yīng)僅限操作人員進(jìn)入，而且進(jìn)入無菌室應(yīng)著隔離衣和專用鞋，操作時(shí)戴口罩，隨時(shí)保證室內(nèi)的無菌狀態(tài)。條件有限的試驗(yàn)室，可用超凈工作臺代替無菌試驗(yàn)室進(jìn)展相應(yīng)的操作。超凈工作臺應(yīng)選擇垂直氣流通風(fēng)方式。無菌室應(yīng)配備空調(diào)設(shè)備，保證不因室溫而影響工作?！踩掣驹O(shè)備和器具溫箱、C02培育箱、厭氧培育設(shè)備；顯微鏡；高壓蒸氣滅菌器、干烤箱；冰箱和冷藏柜；接種器具，包括接種環(huán)和接種針；pH二、細(xì)菌的接種與分別技術(shù)選擇好適宜的培育基，依據(jù)待檢標(biāo)本的來源、培育目的及所使用培育基的性狀，承受不同的接種方法。接種分別法 用途接種分別法 用途連續(xù)劃線分別法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。平板劃線分別法分區(qū)劃線分別法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。斜面接種法 要用于單個(gè)菌落的純培育、保存菌種或觀看細(xì)菌的某些特性。液體接種〔避開氣溶膠的產(chǎn)生多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。穿刺接種法傾注平板法涂布接種法此法主要用于半固體培育基、明膠及雙糖管的接種。測定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù)時(shí)常用此方法。常用于紙片法藥物敏感性測定，也可用于被檢標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。三、細(xì)菌培育的方法〔一〕需氧培育法〔二〕二氧化碳培育法〔三〕厭氧培育法〔一〕需氧培育法臨床細(xì)菌室最常用的培育方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培育。35℃18～24h。〔二〕二氧化碳培育法5%～l0%C0環(huán)境才能生長良好。2二氧化碳培育箱：是一臺特制的培育箱，既能調(diào)整CO的含量，又能調(diào)整所需的溫度。CO從鋼瓶通2 2過培育箱的CO運(yùn)送管進(jìn)入培育箱內(nèi)，調(diào)整好所需CO濃度自動把握器后，將接種好的培育基直接放入培育2 2箱中培育即可。適于大型試驗(yàn)室應(yīng)用。燭缸法：將已接種好的培育基置枯燥器內(nèi)，并放入點(diǎn)燃的蠟燭?？菰锲魃w的邊緣涂上凡士林，蓋上CO含量約占5%～1035℃溫箱內(nèi)培育。218～24h3～7d化學(xué)法：按每升容積參與碳酸氫鈉0.4g0.35ml〔三〕厭氧培育法適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培育。常用的厭氧培育法有：①皰肉培育基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。四、細(xì)菌的生長現(xiàn)象〔一〕細(xì)菌在固體培育基上的生長現(xiàn)象〔二〕細(xì)菌在液體培育基中的生長現(xiàn)象〔三〕細(xì)菌在半固體培育基中的生長現(xiàn)象〔一〕細(xì)菌在固體培育基上的生長現(xiàn)象觀看菌落血瓊脂上的溶血?dú)馕渡赜^看菌落菌落特征包括大小、外形、突起、邊緣、顏色、外表、透亮度和粘度等。依據(jù)細(xì)菌菌落外表特征不同，可將菌落分為三型：光滑型〔S〕菌落粗糙型〔R〕菌落粘液型〔M〕菌落血瓊脂上的溶血α溶血：又叫草綠色溶血，菌落四周血培育基變?yōu)榫G色環(huán)狀。β溶血：又稱完全溶血，菌落四周形成一個(gè)完全清楚透亮的環(huán)。γ 溶血：即不溶血，菌落四周的培育基沒有變化；紅細(xì)胞沒有溶解或無缺損。雙環(huán)：上層溶血環(huán)，內(nèi)層為β溶血，外層為α溶血。如產(chǎn)氣莢膜梭菌。氣味通過某些細(xì)菌在平皿培育基上代謝活動產(chǎn)生的氣味，有助于細(xì)菌的鑒定。如銅綠假單胞菌〔生姜?dú)馕丁?、變形桿菌〔巧克力燒焦氣味〕、厭氧梭菌〔腐敗的惡臭味〕、放線菌〔泥土味〕等?！捕臣?xì)菌在液體培育基中的生長現(xiàn)象渾濁生長：大多數(shù)細(xì)菌。沉淀生長：少數(shù)鏈狀排列的細(xì)菌如鏈球菌、炭疽芽胞桿菌。菌膜生長〔外表生長〕：專性需氧菌如枯草芽胞桿菌、結(jié)核分枝桿菌和銅綠假單胞菌?！踩臣?xì)菌在半固體培育基中的生長現(xiàn)象半固體培育基用于觀看細(xì)菌的動力。羽毛狀或云霧狀渾濁生長，為動力陽性。無鞭毛的細(xì)菌只沿穿刺線呈明顯的線狀生長，為動力試驗(yàn)陰性。Lβ-內(nèi)酰胺類和其他作用細(xì)胞壁抗生素的抵抗性。標(biāo)本采集應(yīng)盡量采集無雜菌污染的組織或體液標(biāo)本。胸水、腹水及尿液標(biāo)本，應(yīng)加20%蔗糖無菌溶液，以保持高滲；血液標(biāo)本應(yīng)接種高滲肉湯增菌培育。培育方法〔1〕L將標(biāo)本接種到1～7天，然后轉(zhuǎn)種L37℃2～7。典型菌落為“荷包蛋”樣，但從患者標(biāo)本中分別的L型菌落常不典型，多呈顆粒型菌落，涂片染色為多形性?！?〕檢驗(yàn)報(bào)告：①血平板無菌生長，LLL型平板中有LL③血平板及L型平板均有菌落生長。涂片有原菌及L型兩種形態(tài)特征，可報(bào)告細(xì)菌型及L型同時(shí)存在，并分別作藥敏試驗(yàn)以供臨床用藥參考。【例題】單個(gè)細(xì)菌在固體培育基上生長可形成A.菌絲B.菌落C.菌團(tuán)D.菌苔E.菌膜502389090101]【正確答案】B【例題】尿液標(biāo)本作L20%蔗糖的緣由是供給高養(yǎng)分使尿中蛋白質(zhì)變性C.稀釋尿液D.保持高滲環(huán)境E.中和尿液的酸度502389090102]【正確答案】D【例題】多用于含細(xì)菌量較多的標(biāo)本的接種方法是分區(qū)劃線分別法瓊脂斜面培育基接種法C.半固體培育基接種法D.液體培育基接種法E.傾注平板法502389090103]【正確答案】A【例題】關(guān)于平板劃線分別培育法，表達(dá)錯誤的選項(xiàng)是適用于臨床標(biāo)本的分別培育目的是使標(biāo)本中的細(xì)菌各自形成單一菌落C.常用劃線方式為平板分區(qū)劃線D.接種細(xì)菌越多越好E.接種時(shí)斜持平板〔45°〕502389090104]【正確答案】D【例題】以下細(xì)菌試驗(yàn)室一般留意事項(xiàng)，錯誤的選項(xiàng)是A.穿著專用白外套、帽B.操作中不應(yīng)談話C.養(yǎng)成在室內(nèi)手不觸及口、面、發(fā)的習(xí)慣D.除接等緊急狀況下，離室前必需消毒液洗手E.室內(nèi)不準(zhǔn)跑動，以免引起風(fēng)