作業(yè)指導(dǎo)書(shū)醫(yī)療器械無(wú)菌檢測(cè)操作指引,直接接種法,薄膜過(guò)濾法

制定XXX確認(rèn):日期制定XXX確認(rèn):日期:2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號(hào)XXX1of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引適用范圍ScopeBI的無(wú)菌檢測(cè)及評(píng)估.參考文件NormativereferenceISO11737-2,Sterilizationofmedicaldevices—Microbiologicalmethods—Part2:Testsofsterilityperformedinthedefinition,validationandmaintenanceofasterilizationprocessISO13485Medicaldevices—Qualitymanagementsystems—Requirementsforregulatorypurposes2023XIH無(wú)菌檢查法COP09定義Definitions無(wú)菌sterile:無(wú)存活的微生物.開(kāi)發(fā),確認(rèn)或重確認(rèn)的一部份,確定產(chǎn)品上是否存在活微生物的技術(shù)操作.生物指示劑biologicalindicator(BI):對(duì)特定滅菌過(guò)程具有確定抗力的染菌測(cè)試系統(tǒng).樣品份額sampleitemportion(SIP):從產(chǎn)品上取的用于測(cè)試的規(guī)定局部.職責(zé)Responsibility試驗(yàn)員:具備微生物方面學(xué)問(wèn),生疏測(cè)試操作,負(fù)責(zé)產(chǎn)品的測(cè)試及報(bào)告.試驗(yàn)工程師:生疏測(cè)試,指導(dǎo)試驗(yàn)員測(cè)試,檢查測(cè)試報(bào)告.質(zhì)量主管/經(jīng)理:負(fù)責(zé)審批測(cè)試報(bào)告.檢測(cè)程序Testprocedure測(cè)試預(yù)備檢測(cè)設(shè)備干凈工作臺(tái)超聲清洗機(jī)細(xì)菌過(guò)濾器生化培育箱高壓蒸汽滅菌鍋XXXXXX文件編號(hào)XXX2of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引檢測(cè)用品,沖洗液:0.1%蛋白胨水溶液,0.9%NaCl,PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液;養(yǎng)分肉湯或胰蛋白胨大豆肉湯,胰蛋白胨大豆瓊脂培育基;剪刀,鑷子,微孔濾膜(0.45m);酒精燈,75%酒精,培育皿,培育缸/管,試管;依據(jù)檢測(cè)需要,按規(guī)定要求配制好培育基,稀釋液和沖洗液;將配制好的培育基,稀釋液和沖洗液分裝到三角瓶中密封并用白紙包住封口,微孔濾膜用水潤(rùn)濕放入培育皿中,剪刀,鑷子,培育皿,培育缸/管,試管,細(xì)菌過(guò)濾器不銹鋼杯用分別用白紙包好,12130min;超聲清洗機(jī)和細(xì)菌過(guò)濾器用75%酒精擦洗干凈;試驗(yàn)前兩小時(shí)翻開(kāi)干凈工作臺(tái),無(wú)菌室,30min,在開(kāi)啟紫外燈時(shí)人員必需遠(yuǎn)離,以免灼傷眼睛和皮膚造成人身?yè)p害;全部檢測(cè)用品,樣品由傳遞窗遞入無(wú)菌室.測(cè)試樣品份額(SIP)的選擇:假設(shè)驗(yàn)證生物負(fù)載在產(chǎn)品上是均勻分布的,SIP可以是該產(chǎn)品的任何部份,否則樣品應(yīng)包含能代表所制產(chǎn)品的每種相應(yīng)材質(zhì)而隨機(jī)選取的產(chǎn)品部位.假設(shè)生物負(fù)載分布,可以從認(rèn)為對(duì)滅菌工藝最有挑戰(zhàn)性的產(chǎn)品部份選取SIP.可在長(zhǎng)度,質(zhì)量,SIP:SIPSIP的類型質(zhì)量產(chǎn)品類型植入類(無(wú)滲透吸取型)粉塵類衣服類植入類(可滲透吸取型)管道類(管徑全都)液體類樣品測(cè)試前包裝應(yīng)完整,應(yīng)先用75%酒精對(duì)包裝外表進(jìn)展清潔再傳入傳遞窗;在無(wú)菌測(cè)試前,應(yīng)先驗(yàn)證測(cè)試方法的適用性,以證明所承受的方法適合于樣品的無(wú)菌檢測(cè),檢測(cè)方法參照《抑細(xì)菌抑真菌試驗(yàn)》;方法驗(yàn)證試驗(yàn)可與樣品的無(wú)菌檢測(cè)同時(shí)進(jìn)展,或外發(fā)至具有微生物檢驗(yàn)資質(zhì)的試驗(yàn)室進(jìn)展;陽(yáng)性比照:應(yīng)依據(jù)樣品的特性選擇陽(yáng)性比照菌:XXXXXX文件編號(hào)XXX3of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的樣品,以金黃色葡萄球菌為比照菌;抗革蘭陰性菌為主的樣品,以大腸埃希菌為比照菌;抗壓氧菌的樣品,以生孢梭菌為比照菌;抗真菌的樣品,以白色念珠菌為比照菌;陽(yáng)性比照試驗(yàn)的菌液制備方法同《抑細(xì)菌抑真菌試驗(yàn)》;加菌量小于100cfu,樣品用量同樣品的無(wú)菌測(cè)試每份培育基接種的樣品量;48～72小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好.陰性比照:樣品的無(wú)菌測(cè)試時(shí),應(yīng)取相應(yīng)培育基,稀釋液,沖洗液同法操作,作為陰性比照.陰性比照不得有菌生長(zhǎng).無(wú)菌測(cè)試有以下兩種方法:直接接種法:將樣品直接接種到培育基中或?qū)⒖缮L(zhǎng)培育基參與到樣品里進(jìn)展培育,觀看是否有菌生長(zhǎng);薄膜過(guò)濾法:將微生物從樣品上移除分別后,再接種到培育基中進(jìn)展培育,觀看是否有菌生長(zhǎng);直接接種法醫(yī)療器械的無(wú)菌檢測(cè)方法應(yīng)首選直接接種法;SIP接種于含有足以浸沒(méi)樣品的適量培育基的無(wú)菌容器中直接培育;培育基的用量應(yīng)能浸沒(méi)整個(gè)樣品或SIP;假設(shè)樣品無(wú)法直接放入容器中,可在滅菌前對(duì)產(chǎn)品進(jìn)展拆分單獨(dú)包裝,或在測(cè)試培育前進(jìn)展拆分;樣品放入培育基后可適當(dāng)?shù)臄嚢?假設(shè)樣品具有抑菌作用,可參與適量的無(wú)菌中和劑或外表活性劑,或加大每個(gè)容器的培育基用量.薄膜過(guò)濾法由于某些醫(yī)療器械的特性如具有抑細(xì)菌抑真菌的作用,而不能選用直接接種法時(shí),可選擇薄膜過(guò)濾法;在選用薄膜過(guò)濾法時(shí)應(yīng)留意洗提技術(shù),洗提力氣和操作過(guò)程中的污染對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響;無(wú)菌測(cè)試樣品的洗提技術(shù)應(yīng)與該樣品的生物負(fù)載測(cè)試技術(shù)全都,檢測(cè)方法可參照《產(chǎn)品生物負(fù)載檢測(cè)》;XXXXXX文件編號(hào)XXX4of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引操作步驟:將樣品包裝去除,用無(wú)菌鑷子將樣品放入超聲清洗機(jī)中,如樣品過(guò)大而無(wú)法放入可將樣品進(jìn)展適當(dāng)拆分;將樣品浸入含有適量洗脫液的超聲清洗機(jī)中,參與適量的稀釋液和外表活性劑,以洗脫液浸沒(méi)樣品外表為準(zhǔn);翻開(kāi)超聲清洗機(jī),5min,超聲清洗頻率不應(yīng)過(guò)高,以免造成微生物死亡;清洗完畢后將樣品取出,洗脫液在細(xì)菌過(guò)濾器上進(jìn)展過(guò)濾,應(yīng)留意濾膜在使用前后的完整性;洗脫液經(jīng)薄膜過(guò)濾后,PH7.0氣化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜每100ml;過(guò)濾完成取出濾膜,2等份,置于含培育基的容器中,其中一份作陽(yáng)性比照用.培育及觀看:將上述含培育基的容器按規(guī)定溫度培育,培育期間應(yīng)逐日觀看并記錄是否有菌生長(zhǎng);

培育基養(yǎng)分肉湯/養(yǎng)分肉湯/

培育溫度30～35℃30～35℃

培育時(shí)間14天7天如在參與樣品后或在培育過(guò)程中,培育基消滅渾濁,714天后,不能從外觀上推斷有無(wú)微生物生長(zhǎng),可取該培育液適量轉(zhuǎn)種至同各穎培育基中,細(xì)菌培育2天,3天,觀看接種的同種穎培育基是否再消滅渾濁,或取培育液涂片,染色,鏡檢,推斷是否有菌.結(jié)果推斷陽(yáng)性比照管應(yīng)生長(zhǎng)良好,陰性比照管不得有菌生長(zhǎng),否則試驗(yàn)無(wú)效;假設(shè)樣品管均澄清,或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng),判樣品符合規(guī)定;假設(shè)樣品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng),判樣品不符合規(guī)定,除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效,即生長(zhǎng)的微生物非樣品所含;當(dāng)符合以下至少一個(gè)條件時(shí),方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效:無(wú)菌測(cè)試所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌測(cè)試的要求;回憶無(wú)菌測(cè)試過(guò)程,覺(jué)察有可能引起微生物污染的因素;XXXXXX文件編號(hào)XXX5of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引樣品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后,確證是因無(wú)菌測(cè)試中所使用的物品或無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的.測(cè)試假設(shè)經(jīng)確認(rèn)無(wú)效,應(yīng)重試.重試時(shí),重取同量樣品,依法檢查,假設(shè)無(wú)菌生長(zhǎng),判樣品符合規(guī)定;假設(shè)有菌生長(zhǎng),判樣品不符合規(guī)定.檢測(cè)報(bào)告編號(hào)規(guī)章:SterilityTestingReportForSterileProductsTL-YY-XXYY:年份XX:流水號(hào)BiologicalIndicatorSterilitytestReportBI_S_YY-XXXYY:年份XXX:滅菌批流水號(hào)文件保存期限:10年.附錄SterilityTestingReportForSterileProductsBiologicalIndicatorSterilitytestReport制定:XXX確認(rèn):日期制定:XXX確認(rèn):日期2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號(hào)XXX6of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引7.1SterilityTestingReportForSterileProductsXXXXXX文件編號(hào)XXX7of8工作指引名稱:無(wú)菌檢測(cè)方法操作指引附錄7.2BiologicalIndicatorSterilitytestReportXXXXXX文件編號(hào)XXX8of8工作指