注射用辛芍(凍干粉針)安全性實驗研究

注射用辛芍（凍干粉針）安全性實驗研究【摘要】目的對注射用辛芍(凍干粉針)進行肌肉刺激性、血管刺激性、過敏性及溶血性實驗，為其臨床應(yīng)用提供安全性實驗依據(jù)。方法肌肉刺激性實驗，觀察3只家兔注射辛芍(凍干粉針)后48h的變化；血管刺激性實驗，觀察單次用藥和連續(xù)用藥5d注射用辛芍(凍干粉針)及生理鹽水，恢復(fù)4d后的注射局部血管和周圍組織反應(yīng)情況；在全身過敏實驗中，分辛芍組與陽性藥物組，對豚鼠第1次腹腔注射給藥后14d及21d，分別靜脈注射用辛芍(凍干粉針)及陽性藥，觀察注射后15min動物的過敏癥狀；大鼠被動皮膚過敏實驗，采用%伊文思蘭溶液分析法；體外溶血實驗，觀察該品在3h內(nèi)有無溶血和聚集現(xiàn)象。結(jié)果注射用辛芍(凍干粉針)對家兔股四頭肌、耳緣靜脈未見明顯刺激作用，對豚鼠主動全身過敏反應(yīng)及大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)均未見明顯過敏反應(yīng)；未見明顯體外溶血作用。結(jié)論注射用辛芍(凍干粉針)的安全性實驗結(jié)果提示其安全可靠。

【關(guān)鍵詞】注射用辛芍安全性實驗

注射用辛芍是由燈盞細(xì)辛和赤芍研制而成的中藥凍干粉針劑，具有活血化淤、通經(jīng)活絡(luò)之功效，用于中風(fēng)淤血阻絡(luò)證，證見半身不遂、口眼歪斜、苔薄白或薄白膩、脈沉細(xì)等，以及腦梗塞有上述見證者。燈盞細(xì)辛有效成分主要為野黃芩苷等黃酮苷類化合物［1］，赤芍有效成分主要為芍藥苷等苷類化合物［2］，多具水溶性，可制備成凍干粉針劑，該劑型能有效地提高藥物的穩(wěn)定性，保證制劑使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定可控。為評價注射用辛芍是否符合靜脈注射藥物的安全性標(biāo)準(zhǔn)，為其進入臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)，我們對注射用辛芍進行了安全性實驗。現(xiàn)報道如下。

1材料1藥物與試劑注射用辛芍(凍干粉針)，棕黃色粉末，200mg/瓶，由貴州百祥制藥有限責(zé)任公司提供，批號20040518，實驗時用%氯化鈉注射液配成50ml備用。卵蛋白，上海伯奧生物科技有限公司產(chǎn)品，批號20031201，臨用前用%氯化鈉注射液配成%濃度用于豚鼠腹腔注射。百日咳菌苗，衛(wèi)生部上海生物制品廠研究所產(chǎn)品，批號200303。伊文思藍，中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品，批號030213。硫化鈉，上海南匯區(qū)宣治化工廠產(chǎn)品，批號030212。％氯化鈉注射液，南京小營藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號2005013009。2動物家兔、SD大鼠、豚鼠等均由上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司提供，許可證號SCXK(滬)2003-0003。Beagle犬由南京新學(xué)人科技開發(fā)有限公司提供，許可證號SCXK2002－0028。

2方法

肌肉刺激性實驗［3］取健康家兔3只，于本實驗環(huán)境下飼養(yǎng)1周，以熟悉實驗室條件。每只分別于一側(cè)股四頭肌處以無菌操作方法注射辛芍溶液1ml；另側(cè)相應(yīng)部位同法注射等容積滅菌生理鹽水作為對照。正常供應(yīng)飼料和水。48h后放血處死家兔，解剖股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，按表1換算成相應(yīng)的反應(yīng)級分值，并取受試部位的肌肉，用10%甲醛溶液固定，進行病理檢查。

表1肌肉刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)

血管刺激性實驗［4］取健康家兔6只，分為兩組：①單次給藥組：右側(cè)耳緣靜脈以無菌操作方法單次注射濃度為mg/ml的注射用辛芍ml/kg，左側(cè)耳緣靜脈注射等體積生理鹽水注射液。②多次給藥組：右側(cè)耳緣靜脈以無菌操作方法單次注射濃度為mg/ml的注射用辛芍ml/kg，左側(cè)耳緣靜脈注射等體積生理鹽水注射液，1次/d，連續(xù)給藥5d。上述兩組均分別于末次給藥后96h，肉眼觀察注射部位有無紅腫、充血等刺激現(xiàn)象，按表2換算成相應(yīng)的反應(yīng)級分值，并取注射部位血管，用10%甲醛溶液固定，進行病理檢查。

表2血管刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

主動過敏反應(yīng)實驗［3，5］取健康雄性豚鼠12只，體重250～300g。分成辛芍組和陽性藥物組，按注射劑過敏實驗的要求，分別給每組豚鼠隔日腹腔注射辛芍和卵蛋白ml，共注射3次，然后每組內(nèi)分成兩批，分別在第1次給藥后14d和21d分別從頸靜脈給予辛芍和卵蛋白1ml，觀察豚鼠在靜脈注射后15min內(nèi)有無興奮不安、抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克甚至死亡等過敏癥狀，持續(xù)觀察3h。按表3分級，判定其反應(yīng)級數(shù)。

表3豚鼠過敏反應(yīng)級數(shù)

被動過敏反應(yīng)實驗［3，6］

大鼠含IgE的抗血清制備取3只健康雄性SD大鼠，按注射劑大鼠同種被動皮膚過敏實驗的要求，分別后肢肌肉注射辛芍ml/kg、%的卵蛋白溶液5ml/kg、生理鹽水5ml/kg，同時腹腔注射百日咳疫苗1ml/只。13d后眼眶取血，分離得血清備用。

大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng)實驗取24只健康雄性SD大鼠，于本實驗環(huán)境下飼養(yǎng)1周，并觀察自主活動及一般狀況。隨機分成辛芍組、陽性藥物組(卵蛋白組)和空白對照組。在背中線兩側(cè)距脊柱約cm處用8％的硫化鈉溶液脫毛，每側(cè)2點，間隔2cm。取上述含IgE的血清，用生理鹽水分別稀釋為1∶5，1∶10，1∶20，1∶40倍，按不同濃度次序，分別皮內(nèi)注射于各組大鼠去毛各點。48h后，辛芍組靜脈注射%伊文思藍溶液1ml，陽性藥組靜脈注射%伊文思藍溶液1ml，空白對照組靜脈注射%伊文思藍溶液1ml。30min后處死動物，檢查注射各點的藍色反應(yīng)斑。

溶血性實驗［7］取健康家兔1只，自心臟取血約20ml，置于預(yù)先放有玻璃珠的三角瓶中，攪拌去纖維蛋白，然后將血移入刻度離心管內(nèi)，加入生理鹽水5～l0ml，混勻后離心5min(2000～2500r／min)，去除上清液，再加生理鹽水混勻離心，反復(fù)洗3～4次，至上清液無色透明，將所得紅細(xì)胞按其容積用生理鹽水稀釋成2％的混懸液。取試管7支，編號排列于試管架上，按表4加入各種溶液，第6管不加注射用辛芍(凍干粉針)藥液作為空白對照管；第7管不加藥液，用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血的陽性對照組，將各管輕輕搖勻，在37℃恒溫箱中進行溫育，觀察24h有無溶血情況，記錄實驗結(jié)果。各管配比量見表4。

表4各管溶血實驗配比量

全溶血：溶液澄明紅色，管底無細(xì)胞殘留。部分溶血：溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留。無溶血：紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明。凝集：雖不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，振搖后不能分散。

3結(jié)果

肌肉刺激性實驗注射后不同時間觀察結(jié)果表明股四頭肌表面未見明顯充血，紅腫，家兔活動正常，未見明顯異常反應(yīng)。3只家兔48h后健康如常，解剖觀察股四頭肌，給藥部位均未見紅腫、充血等現(xiàn)象，評分0級。病理檢查表明：對照側(cè)和給藥側(cè)注射部位股四頭肌結(jié)構(gòu)清楚，肌纖維呈束狀，肌膜完整，間質(zhì)內(nèi)未見明顯炎細(xì)胞浸潤。實驗結(jié)果表明，注射用辛芍(凍干粉針)對家兔股四頭肌注射部位無明顯刺激性。

血管刺激性實驗單次給藥組和多次給藥組6只家兔耳緣靜脈注射部位均未見紅腫、充血等刺激現(xiàn)象。病理檢查表明,給藥組和對照組家兔耳緣靜脈注射部位血管結(jié)構(gòu)完整，管腔無明顯擴張、變性、壞死，靜脈壁及其周圍組織無明顯炎細(xì)胞浸潤，官腔內(nèi)無明顯血栓形成。實驗結(jié)果表明，注射用辛芍(凍干粉針)對家兔耳緣靜脈無明顯刺激性。

主動過敏反應(yīng)實驗注射用辛芍(凍干粉針)組豚鼠分別于第1次給藥后14d及21d，由足背靜脈注射注射用辛芍(凍干粉針)1ml，注射后豚鼠均未出現(xiàn)興奮不安、呼吸困難、抓鼻、顫抖、豎毛、痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡等過敏反應(yīng)，判定為0級，提示注射用辛芍(凍干粉針)未見全身主動過敏反應(yīng)；而陽性對照組豚鼠分別于第1次給藥后14d及21d，足背靜脈注射%卵蛋白1ml，注射后兩批豚鼠在5min內(nèi)均出現(xiàn)興奮不安、呼吸困難、抓鼻、顫抖、豎毛、痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡等過敏反應(yīng)，判定為4級。

被動過敏反應(yīng)實驗注射用辛芍(凍干粉針)組、空白對照組大鼠背部皮膚均未見明顯藍色反應(yīng)斑點。而陽性對照組8只大鼠背部1∶5，1∶10注射點均出現(xiàn)明顯藍色反應(yīng)斑。結(jié)果表明，注射用銀杏達莫辛芍(凍干粉針)無明顯同種被動皮膚致敏作用。

溶血性實驗第7管(陽性對照管)溶液呈現(xiàn)澄明紅色，其余6管均末見澄明紅色，紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明。結(jié)果見表5。結(jié)果表明注射用辛芍(凍干粉針)無溶血和凝集反應(yīng)。

表5不同時間點溶血實驗結(jié)果

“－”表示無溶血或凝集反應(yīng)，“＋”表示有溶血或凝集反應(yīng)

4討論

由于中藥制劑的活性成分及其代謝物、輔料、有關(guān)物質(zhì)及理化性質(zhì)(如pH值、滲透壓等)均有可能引起刺激性和／或過敏性和／或溶血性和／或熱原反應(yīng)的發(fā)生，而嚴(yán)重的毒性可以影響用藥的安全有效性，因此藥物在臨床應(yīng)用前應(yīng)該研究其制劑在給藥部位使用后引起的局部和／或全身毒性，以提示臨床應(yīng)用時可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、毒性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標(biāo)并為臨床解毒或解救措施提供參考，保障臨床用藥的安全有效。綜合考慮以上各實驗的結(jié)果，以便為藥物的臨床研究與應(yīng)用提供一定的藥物毒理學(xué)基礎(chǔ)。

本次實驗的受試藥物注射用辛芍(凍干粉針)對家兔肌肉注射、靜脈注射給藥后未見明顯肌肉、血管刺激性；豚鼠靜脈注射后未見明顯全身主動過敏反應(yīng)；也未見明顯大鼠同種被動皮膚過敏；對紅細(xì)胞未見明顯溶血和凝集作用。以上結(jié)果提示注射用辛芍(凍干粉針)安全性較好，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

【參考文獻】

［1］呂曙華，解軍波，呂歸寶．燈盞細(xì)辛的研究進展［J］．天津藥學(xué)，2003，15(2)：46．

［2］阮金蘭，趙鐘祥，曾慶忠，等．赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進展［J］．中國藥理學(xué)通報，2003，19(9)：965．

［3］中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則課題研究組．中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(第3稿)［S］．北京：中國食品藥品監(jiān)督管理局，2005：12．

［4］王北嬰．中藥新藥研制與申報［M］