無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目簡(jiǎn)介

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)簡(jiǎn)介

欽州市婦幼保健院檢驗(yàn)科胡天2015年9月22內(nèi)容提要sd_bao@常見(jiàn)染色體疾病概述染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目、院內(nèi)流程四一二三一，染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例）sd_bao@7世紀(jì)考古學(xué)家挖掘出典型唐氏綜合征體征顱骨。素描畫(huà)中見(jiàn)到具有唐氏綜合征樣面容的兒童。JohnLangdonDown醫(yī)生第一次對(duì)唐氏綜合征的典型體征進(jìn)行完整的描述并發(fā)表。Down’ssyndrome.法國(guó)遺傳學(xué)家(JeromeLeJeune)發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征是由人體的第21號(hào)染色體的三體變異造成的現(xiàn)象。16世紀(jì)1866年1959年21、18、13-三體綜合征是人類最常見(jiàn)的三種染色體疾病，患兒面容特殊，絕大多數(shù)為嚴(yán)重智力障礙及器官畸形，對(duì)家庭和社會(huì)造成巨大危害和負(fù)擔(dān)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胎兒染色體疾病尚無(wú)有效治療方法，最好的方法是在孕期通過(guò)產(chǎn)前篩查及診斷，發(fā)現(xiàn)異常并及時(shí)采取相應(yīng)措施染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn)21－三體照片a.同源染色體不分離;b.姐妹染色單體不分離

二，染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理減數(shù)分裂中染色體不分離第一次減數(shù)分裂第二次減數(shù)分裂三，現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段sd_bao@產(chǎn)前篩查母血清學(xué)篩查頸項(xiàng)透明膜厚度篩查產(chǎn)前診斷羊水穿刺絨毛取樣

臍靜脈穿刺7侵入性診斷方式風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算現(xiàn)有產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的缺陷性來(lái)源：Estimatedprenatalscreeningperformance1991-2006(2006dataareprovisional),EnglandandWales.sd_bao@產(chǎn)前篩查（S）100,000篩查結(jié)果陽(yáng)性（SP）7,000篩查結(jié)果陰性（SN）93,000唐氏綜合征胎兒400真陽(yáng)性（TSP）340假陰性（FSN）60非唐氏綜合征胎兒99,600假陽(yáng)性（FSP）6,660真陰性（TSN）92,9401992-2006傳統(tǒng)診斷方法（穿刺）導(dǎo)致的正常胎兒流失5619最緊迫任務(wù)：新方法的探索：提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性與檢出率、降低檢測(cè)過(guò)程中的假陽(yáng)性率和假陰性率。sd_bao@

四，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)生前提一：孕婦外周血中存在胎兒DNA

胎兒DNA來(lái)源和特點(diǎn)來(lái)源：1胎兒細(xì)胞通過(guò)胎盤(pán)滲透到母血中，被母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來(lái)；2胎兒細(xì)胞凋亡；3胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡基本特點(diǎn)：1含量有一定的變化規(guī)律。妊娠第4周開(kāi)始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加而增加，存在個(gè)體差異，平均濃度。2分娩后短時(shí)間內(nèi)消失，平均半衰期為16.3min(4-30min)，2h就無(wú)法檢出。再次妊娠不影響檢測(cè)結(jié)果。3DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī)技術(shù)很難檢測(cè)前提二：第二代高通量測(cè)序儀發(fā)明6億個(gè)DNA片段/次，全基因組測(cè)序只要10天/臺(tái)；90個(gè)DNA片段/次，全基因組測(cè)通要50年/臺(tái)。（2012年）無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)：母血漿DNA+高通量測(cè)序2023/5/22母體和胎兒ＤＮＡ的混合物13Uniquereads(單一序列讀取）:nomismatch,onelocation(Loetal,PNAS,2008)理論模型

母親Chr21：95×2=190母體外周血中Chr21=190+10=200以21-三體為例：100DNA單位/毫升血漿。其中，95個(gè)單位來(lái)源于母親，5個(gè)單位來(lái)源于胎兒通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序，獲得分布在每條染色體上的真實(shí)的核酸片段數(shù)量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較：正常胎兒或者

21-三體胎兒

正常胎兒

Chr21：5×2=10

母親Chr21：95×2=190

21-三體胎兒

Chr21：5×3=15母體外周血中Chr21=190+15=205醫(yī)院無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程sd喬_b帶ao撇@s葛in帖a.火co宮m準(zhǔn)確遮性高證于99秘%；早期變?cè)\斷，12孕周呆即可調(diào)檢測(cè)揀；減辜少妊禮娠晚善期引貧產(chǎn)對(duì)樣孕婦顫造成永的傷輛害；非侵性入性，減泛輕孕奸婦心圖理負(fù)稈擔(dān)，禽無(wú)流曬產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)以幣及產(chǎn)凍前診翻斷引同起的過(guò)并發(fā)龜癥；可以矩同時(shí)障檢測(cè)其它哄染色住體異瓦常所需在樣本韻量少，只柄需5毫升母體悲外周紗血。無(wú)創(chuàng)永產(chǎn)前態(tài)基因康檢測(cè)痰的優(yōu)勢(shì)牲：無(wú)創(chuàng)養(yǎng)產(chǎn)前父基因羊檢測(cè)浩的優(yōu)勢(shì)禾：保鴉險(xiǎn)保濾障檢測(cè)勺結(jié)果悲為高廁風(fēng)險(xiǎn)竿受檢斧者產(chǎn)前拳診斷仔所產(chǎn)另生的恢費(fèi)用{含：眾羊膜良腔穿亡刺術(shù)(或經(jīng)呈皮臍減靜脈蠅穿刺亂術(shù))和染悄色體該核型庭分析鼻和染拳色體采熒光銅原位虜雜交由（或FI志SH）}，保宮險(xiǎn)公亦司給巴予報(bào)可銷超諒過(guò)25胳00元。檢測(cè)它結(jié)果肝為低厘風(fēng)險(xiǎn)，若任受檢頌者嬰比兒出明生后忽一年曾內(nèi)經(jīng)態(tài)縣級(jí)治以上不檢測(cè)弄醫(yī)院隙?？瞥磲t(yī)生拍明確廁診斷湖患有遭“21據(jù)-三體每綜合念征”尖、“18忙-三體慘綜合棄征”厚、“13另-三體斑綜合啊征”焰，保鈴險(xiǎn)公潮司支俗付受播檢者擊保險(xiǎn)寇二十騙萬(wàn)元意整孕期紛各項(xiàng)殼檢測(cè)早信息驢圖10恢-1裝3.只5周早孕綿期篩漏查(檢六出率辯85否%)中孕梳期篩叫查(檢望出率什81憑%)15趁-2善0周16頂-2掠2周羊水噴穿刺（流攜產(chǎn)率0.由5-性1%）9-掉11周絨毛瞧取樣（流橫產(chǎn)率1-送5%）24瘦-2陣8周臍帶涉血取僅樣（流摔產(chǎn)率血1-3%）040周12哨-2模4周無(wú)創(chuàng)仍產(chǎn)前修基因瘋檢測(cè)（準(zhǔn)確墳率>交99夏%）適應(yīng)秋人群窗和適劫應(yīng)癥經(jīng)B超確椒認(rèn)為嫁單、腔活胎庭孕婦瓦；可檢椒測(cè)胎翅兒-1綿3三體核、18三體抄和21三體兵；孕12周以屯上均開(kāi)可進(jìn)饒行檢廣測(cè)。禁忌秋人群燃、禁僑忌癥懷多篇胞胎習(xí)的孕花婦；孕婦升本人查為染墳色體滲非整暢倍體限疾病雅患者臘；孕婦搶接受鐵過(guò)異蟲(chóng)體輸倚血、柱移植奧手術(shù)帥、干誰(shuí)細(xì)胞接治療支、接農(nóng)受過(guò)女配偶殊或親分屬淋遙巴細(xì)危胞免盡疫治壤療等沈；無(wú)法精確檢測(cè)農(nóng)胎兒孕染色侄體嵌庸合型臣、易徒位型爐、微粱缺失厘、微優(yōu)重復(fù)蚊、微障缺失布等結(jié)姜構(gòu)性穗異常報(bào)；院內(nèi)艱流程檢測(cè)憐前確挖認(rèn)事疊項(xiàng)：1.單活珠胎（榆超聲校確認(rèn)我）2.孕后截未接子受過(guò)臉異體帶的血排液制獨(dú)品；3.孕12周以迷后開(kāi)晴始檢青測(cè)產(chǎn)前戲診斷填中心/產(chǎn)科適就診,醫(yī)生近解釋綁該項(xiàng)喉目孕婦庸簽署軟知情我同意盞書(shū)/送檢怨單,領(lǐng)取朝保險(xiǎn)貝卡孕婦咳交費(fèi)雨后返限回產(chǎn)前叉診斷品護(hù)士濤站抽血故（附巾知情育同意/送檢資單）采血匯：ED鼠TA抗凝懂管采集外周肅血5m債l（輕滲微顛泥倒采驚血管4次）護(hù)士徐打印2張條滿形碼1張貼支于采錄血管及上，1張貼兆于申湊請(qǐng)單展的右母上角采血宗后護(hù)零士立察即交填給標(biāo)本應(yīng)處理博人員（附土申請(qǐng)郊單）密（產(chǎn)揉前診節(jié)斷中羅心3樓標(biāo)裳本接嚇收處（標(biāo)鮮本4℃保存攀，不差可室掛溫放宏置）；標(biāo)本絲式處理貫人員8小時(shí)比內(nèi)分離閣血漿牌，并芽填寫(xiě)歇樣本卸信息豪單全血?dú)Р杉槿⊙鲈袐D踐外周眾血5假mL，采子用ED牧TA抗凝甘；采血趕完畢趴后，莖輕微書(shū)顛倒裝采血精管4次，捐并及涂時(shí)將躲采血靜管放仗置于4℃冰箱典中，驚在4小時(shí)溜內(nèi)進(jìn)驗(yàn)行血旨漿分榜離工隔作。【注意偏事項(xiàng)】采血陷時(shí)孕顫婦無(wú)摟需空眨腹；采血銳管為5真mL養(yǎng)E掃DT宰A抗凝石管；顛倒定混勻瓜時(shí)動(dòng)減作不抱能太蠢劇烈寇，防腹止溶退血。血漿撲分離1、將什采血賓管4℃16稿00愁g離心10啞mi濱n，上跡清（嚷血漿涂）分扯裝到鑄置于鞋冰盒苦上且猾已編徐號(hào)的2.炮0m津l的EP管中利。【注意通事項(xiàng)】1）嚴(yán)劃格核核對(duì)樣顫本編侮號(hào)、醋確保余編號(hào)沉唯一敘；2）開(kāi)進(jìn)啟離守心管販時(shí)，穿不能濃碰到姻管內(nèi)驅(qū)蓋；3）吸柏取血由漿過(guò)弟程中細(xì)不要痰吸到械中間抱層的性白細(xì)躺胞；2、上拍述血幣漿4℃16姜00仍0g離心10揀m購(gòu)in，冰隙盒上俘將上卸清轉(zhuǎn)乘入已翻編號(hào)纖的2.仁0m兆l雨EP管中瓶，每撞個(gè)離跑心管詠轉(zhuǎn)入60嶼0u瞧l血漿專。同時(shí)時(shí)在茂每個(gè)2.獄0m買l離心對(duì)管上烈標(biāo)記防樣本胸編號(hào)散、血于漿體壟積、推分離平日期民?！咀⒁獍崾马?xiàng)】1）嚴(yán)團(tuán)格核決對(duì)樣旬本編設(shè)號(hào)、鴿確保憶樣本紐奉編號(hào)茅唯一倦；2）開(kāi)竊啟離瞞心管患管蓋嗚時(shí)，督不能勝碰到熊離心萌管內(nèi)攤蓋；3）將龍分離絞好的輸血漿南貼上議對(duì)應(yīng)噸的條旅碼并循用封難口膜熟密封釋，密晝封結(jié)歪束后藥立即尊將血未漿放慌入-2沈0℃或-8晴0℃冰箱乳中，宋避免藥反復(fù)兔凍融它。【注意劇事項(xiàng)】全血命須保孝證在8小時(shí)肝內(nèi)進(jìn)義行血冠漿分剪離；分離允后的靈血漿刊在-2疑0℃冰箱次中可圈保存3天，開(kāi)長(zhǎng)期斯保存帝需存彎放于-8抬0℃冰箱在。樣本運(yùn)儲(chǔ)存認(rèn)與運(yùn)勒輸1、全蒼血樣爺本在昂冰袋(4℃)條件免下運(yùn)候輸，銷且在4小時(shí)御內(nèi)送斥達(dá)樣納本接座收處斜，樣墨本接焦收后出要立詢即完蜜成血揚(yáng)漿分府離。2、血膜漿樣紡本在蛛干冰梅（-2時(shí)0℃）條叢件下俗運(yùn)輸添，并揚(yáng)確保脾樣本填送達(dá)飾時(shí)有享干冰磁剩余質(zhì)，到訴達(dá)后備及時(shí)換存放幸于-8莫0℃冰箱具中，臉禁止相將樣晃本在蹤蝶室溫外下放衡置?！咀⒁獗仁马?xiàng)】1）泡域沫箱留的規(guī)踢格：別壁厚6c曾m、外豈徑長(zhǎng)39晶cm、外肯徑寬32粗cm、外腸徑高35袍cm。2）干衡冰用釀量：10公斤/2屠-3天；15公斤/4萌-5天；菠根據(jù)晌運(yùn)送蛋時(shí)間梯的長(zhǎng)跟短，依相應(yīng)膀增加圓干冰壞用量釘。樣本數(shù)T21T18T13XOXXYXXXXYY樣本總數(shù)26619272891513753核型分析347619163108643假陽(yáng)性—1101000假陰性—0000000檢出率—100%100%100%100%100%100%100%假陽(yáng)性率—0.03%0.03%0.00%0.02%0.00%0.00%0.00%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值—99.48%98.44%100%88.89%100%100%100%假陰性率-0%0%0%0%0%0%0%陰性預(yù)測(cè)值—100%100%100%100%100%100%100%數(shù)據(jù)猶統(tǒng)計(jì)苗（截駛至20勵(lì)12年3月）全球10序0多家灣合作布醫(yī)院購(gòu)。完成費(fèi)核型訓(xùn)驗(yàn)證34魄76例，醬產(chǎn)后港隨訪爬驗(yàn)證54椒89例。病例惜分析葡：?jiǎn)斡壹冃?標(biāo)準(zhǔn)瓣型標(biāo)準(zhǔn)宏型T2傲1樣本華編號(hào)構(gòu)：PD偽P1蠻00脾03列76經(jīng)1孕婦盾年齡粒：31唐牽篩湊：1/憑51飲0（低粥風(fēng)險(xiǎn)極）無(wú)創(chuàng)尋檢測(cè)勒：T2嶺1核型鹿分析哄：47，XX，+2曾1T1唐3樣本他編號(hào)攤：PD門(mén)P1摔00鎮(zhèn)00路33帝21孕婦竿年齡尋：32無(wú)創(chuàng)跌檢測(cè)衣：T1頃3核型效分析興：47，XX，+1萄3病例開(kāi)分析孩：?jiǎn)瓮黾冃?標(biāo)準(zhǔn)牧型T1截8樣本可編號(hào)蘿：PD代P1壁00壤00圍21永90孕婦務(wù)年齡蛛：32無(wú)創(chuàng)按檢測(cè)怨：T1筋8核型肺分析佳：47，XY，+1外8T9PD研B1尖1A奮J0顛00抓26，41歲，生孕23捧w+訓(xùn)4周無(wú)創(chuàng)筒檢測(cè)吐：T9羊水度核型府：T9T1纏6PD白B1火1A基J0擋07門(mén)83，30歲，聲孕19周無(wú)創(chuàng)太檢測(cè)必：16號(hào)染舌色體緞偏多羊水FI傳SH：T1堤6病例草分析忍：其性它染什色非兼整倍搞體病例惹分析溫：T9嵌合吩體PD銅B1辣1A東G0秤01癢06，39歲，筒孕20周無(wú)創(chuàng)標(biāo)檢測(cè)鋪：兩股次測(cè)肌序結(jié)史果均噸