HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量

HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量

：黃曉丹,傅英,陳禧翎,羅建明

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HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量

le.清開靈膠囊由金銀花、板藍根、梔子、水牛角、膽酸等組成,具有清熱解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高熱等癥。梔子苷為梔子的主要有效成分之一,清開靈膠囊的質(zhì)量標準目前未收載梔子苷含量測定方法,為了更好掌握藥品質(zhì)量,我們采納高效液相色譜(HPLC)法測定該制劑中的梔子苷含量,試驗結果表明,該方法分別度高、重復性好,獲得了滿足的結果。

1儀器與試藥

Agilent1100型HPLC儀,Rev.B.02.01SR1色譜工作站,

GracesmartC18色譜柱(250mm×4.0mm,5μm)；超聲波處理儀MUS/1006。梔子苷對比品(中國藥品生物制品檢定所供應,批號110749-202413)；清開靈膠囊樣品(廣州白云山明興制藥有限公司,批號Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇為色譜純。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱為GracesmartC18(250mm×4.0mm,5μm),流淌相為乙腈-水(15∶85),檢測波長為238nm,流速為1.0mL/min,進樣量10μL。

2.2供試溶液的制備

2.2.1對比品溶液的制備

精密稱取梔子苷對比品15.1mg,置50mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,精密量取5mL,置100mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1mL含15.1μg的溶液,即得。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品10粒,除去膠囊殼,內(nèi)容物精密稱定,研細,取粉末0.25g,精

HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量

密稱定,置25mL量瓶中,加甲醇20mL,超聲處理(功率300W,頻率33kHz)30min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備

按處方組成,取除梔子外的其余藥味,按工藝要求制成不含梔子苷的清開靈膠囊,再按供試品溶液的制備方法操作,得陰性樣品溶液。

2.3空白試驗

按上述儀器和試驗條件,取Mk2901批供試品溶液、陰性樣品溶液、梔子苷對比品溶液分別注入液相色譜儀,測定。結果供試品色譜圖中,呈現(xiàn)與對比品保留時間相同的色譜峰,且基線平穩(wěn),分別度好,陰性樣品在此保留時間無色譜峰(見圖1)。

2.4線性關系

分別精密吸取濃度為0.302mg/mL對比品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL至10mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,分別吸取10μL注入液相色譜儀,測得峰面積。以峰面積為縱坐標,梔子苷對比品進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線,計算回歸方程：Y＝1351.973X－4.454,r＝0.9998,在0.0604～0.3020μg范圍內(nèi),對比品進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗

取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件重復進樣6次,測定峰面積,計算其RSD＝0.83%。結果表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8、12h測定峰面積,計算其RSD＝0.86%。結果表明樣品在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復性試驗

取本品內(nèi)容物(批號Mk2901)10g,混合勻稱,精密稱取樣品5份,每份0.25g。按供試品溶液制備方法制備,依上述測定條件測定,并計算含量,結果平均含量為1.602

HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量

4mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重復性好。

2.8加樣回收率試驗

精密量取重復性試驗項下的樣品0.1g各5份,分別精密加入濃度為302μg/mL的梔子苷對比品溶液0.5mL,按供試品溶液制備方法處理得供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算回收率,結果表明此色譜條件測定梔子苷含量回收率良好。見表1。表1加樣回