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細(xì)胞的芽孢染色法目的及要求第一頁,共6頁。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?/p>
學(xué)習(xí)并掌握細(xì)菌的芽胞染色法,初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征。第二頁,共6頁。二、實(shí)驗(yàn)原理芽胞又稱內(nèi)生孢子,能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽胞壁厚,透性低,不易著色,一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色(芽胞呈無色透明狀),而一旦染上色后又難以脫色。芽胞染色法根據(jù)芽胞特點(diǎn)設(shè)計(jì),除了用著色力強(qiáng)的染料外,還需要加熱,以促進(jìn)芽胞著色。當(dāng)染芽胞時(shí),菌體也會著色,然后水洗,芽胞染上的顏色難以滲出,而菌體會脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體復(fù)染,使菌體和芽胞呈現(xiàn)出不同的顏色,因而能更明顯地襯托出芽胞,便于觀察。第三頁,共6頁。三、實(shí)驗(yàn)器材1.菌種:枯草芽孢桿菌。2.染色劑:5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液3.儀器、材料:二甲苯、香柏油、蒸餾水、95%乙醇、顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙。第四頁,共6頁。四、實(shí)驗(yàn)方法(Schaeffer-Fulton氏染色法)1.制片:常規(guī)方法涂片、干燥、固定。2.染色:(1)涂片上滴加3-5滴5%孔雀綠水溶液。(2)用試管夾夾住載玻片一端,微火加熱,自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí),計(jì)時(shí)5min。加熱過程中切勿使染料蒸干,及時(shí)補(bǔ)加染液。待玻片冷卻后,用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(3)0.5%堿性番紅復(fù)染2min,水洗。(4)制片干燥后油鏡觀察。芽孢呈綠色
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