腦脊液顯微鏡檢查

第六章其他體液檢驗(yàn)第四節(jié)腦脊液顯微鏡檢查顯微鏡檢查（一）細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)1．簡要操作（1）直接計(jì)數(shù)法：腦脊液混勻→充池→低倍鏡計(jì)數(shù)→計(jì)算。因腦脊液中細(xì)胞數(shù)量少，因此，需計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。（2）稀釋計(jì)數(shù)法：渾濁或血性的腦脊液，可用生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液稀釋后再充池計(jì)數(shù)，計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)后再換算成每升腦脊液中的細(xì)胞總數(shù)。

顯微鏡檢查2．質(zhì)量保證（1）為避免腦脊液標(biāo)本凝固，應(yīng)盡快送檢、盡快檢驗(yàn)。遇高球蛋白標(biāo)本時(shí)，可用EDTA鹽抗凝。（2）腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)在標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)完成，以免放置過久，細(xì)胞變形、破壞或腦脊液凝固，導(dǎo)致計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確。（3）穿刺損傷導(dǎo)致的血性腦脊液，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)無意義。（4）計(jì)數(shù)時(shí)注意新型隱球菌與白細(xì)胞、紅細(xì)胞區(qū)別。新型隱球菌不溶于乙酸，加優(yōu)質(zhì)墨汁后可見不著色的莢膜。紅細(xì)胞加酸后溶解；白細(xì)胞加酸后細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)更加明顯。（5）細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)較多皺縮或腫脹的紅細(xì)胞，應(yīng)在報(bào)告中予以描述，以幫助臨床鑒別陳舊性或新鮮性出血。

顯微鏡檢查3．方法學(xué)評(píng)價(jià)

直接計(jì)數(shù)法操作簡便、省時(shí)，適用于細(xì)胞總數(shù)不多的腦脊液標(biāo)本。稀釋計(jì)數(shù)法適用于渾濁的腦脊液標(biāo)本，但操作相對(duì)煩瑣，存在稀釋誤差。4．參考區(qū)間

正常人腦脊液無紅細(xì)胞；僅有少量白細(xì)胞。5．臨床意義

見白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

顯微鏡檢查（二）白細(xì)胞計(jì)數(shù)1．簡要操作（1）直接計(jì)數(shù)法：適用于非血性的腦脊液標(biāo)本。用微量吸管吸取冰乙酸后再全部吹出，使微量吸管內(nèi)壁黏附少量冰乙酸，再吸入混勻的腦脊液標(biāo)本，數(shù)分鐘后混勻充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)計(jì)數(shù)。（2）稀釋計(jì)數(shù)法：適用于渾濁或血性的腦脊液標(biāo)本。用白細(xì)胞稀釋液稀釋腦脊液，充池計(jì)數(shù)白細(xì)胞。

顯微鏡檢查2．質(zhì)量保證（1）直接計(jì)數(shù)時(shí)吸管內(nèi)的冰乙酸要盡量除去，否則結(jié)果偏低。（2）為了排除因出血而帶來的白細(xì)胞數(shù)影響，可用下式進(jìn)行校正：WBC(校正)＝WBC(未校正)－

顯微鏡檢查3．方法學(xué)評(píng)價(jià)

直接計(jì)數(shù)法操作簡便、省時(shí)，但未考慮吸管內(nèi)壁黏附的冰乙酸體積。如黏附的冰乙酸量較大，可使結(jié)果偏低。如黏附的冰乙酸量太少，可能有一部分紅細(xì)胞不能破壞也影響結(jié)果準(zhǔn)確性。直接計(jì)數(shù)法適用于細(xì)胞總數(shù)不多的腦脊液標(biāo)本。稀釋計(jì)數(shù)法紅細(xì)胞破壞完全，結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，但操作相對(duì)繁雜。4．參考區(qū)間

①成人：（0～8）×106/L。②兒童：（0～15）×106/L；新生兒：（0～30）×106/L。5．臨床意義

見白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

顯微鏡檢查（三）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1．直接分類法

白細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后，在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核形態(tài)分別計(jì)數(shù)多個(gè)核細(xì)胞（粒細(xì)胞）和單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和間皮細(xì)胞），共計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞，并以百分?jǐn)?shù)表示多個(gè)核細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞所占的比例。2．染色分類法

取離心后的腦脊液沉淀物涂片，瑞氏或瑞-吉復(fù)合染色，分類方法與血液白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法相同。如有內(nèi)皮細(xì)胞，需要另作描述并報(bào)告。

顯微鏡檢查3．質(zhì)量保證（1）標(biāo)本：若標(biāo)本陳舊、細(xì)胞變形時(shí)，白細(xì)胞直接分類法誤差較大，應(yīng)改用涂片染色。（2）涂片固定時(shí)間不能太長，溫度不能過高，以免細(xì)胞皺縮難以分類；細(xì)胞涂片要均勻集中，以利于觀察。（3）染色分類法標(biāo)本離心時(shí)速度不宜太快、時(shí)間不宜過長，以減少細(xì)胞的破壞和變形。（4）染色分類時(shí)，如見內(nèi)皮細(xì)胞、室管膜細(xì)胞應(yīng)計(jì)入分類百分比中；若見腫瘤細(xì)胞，則另行描述報(bào)告。（5）若白細(xì)胞總數(shù)少于100個(gè)，則直接寫出單個(gè)核細(xì)胞和多個(gè)核細(xì)胞各自的具體數(shù)字。

顯微鏡檢查4．方法學(xué)評(píng)價(jià)

直接分類法簡便、快速，但較難觀察清楚細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，準(zhǔn)確性較差。尤其是陳舊性標(biāo)本，細(xì)胞形態(tài)改變大，僅憑高倍鏡分類困難，誤差較大。染色分類法細(xì)胞識(shí)別率高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞），為首選方法；但操作較復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。近年來出現(xiàn)使用高檔血液分析儀或體液細(xì)胞分析儀對(duì)腦脊液標(biāo)本進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)。雖然該類儀器精密度高，快速、可自動(dòng)化，但影響因素較多，對(duì)異常細(xì)胞無法識(shí)別，如儀器出現(xiàn)報(bào)警信息，必須用顯微鏡計(jì)數(shù)法進(jìn)行復(fù)核。

顯微鏡檢查5．參考區(qū)間（1）直接分類法：多為淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞（7∶3），偶見內(nèi)皮細(xì)胞。（2）染色分類法：①成人：淋巴細(xì)胞40%～80%，單核細(xì)胞15%～45%，中性粒細(xì)胞0～6%。②新生兒：淋巴細(xì)胞5%～35%，單核細(xì)胞50%～90%，中性粒細(xì)胞0～8%。

顯微鏡檢查6．臨床意義

中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變時(shí)腦脊液細(xì)胞數(shù)可增多，其增多的程度及細(xì)胞種類與病變的性質(zhì)有關(guān)（表6-2）。中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結(jié)核性或真菌性腦膜炎時(shí)，細(xì)胞輕到中度增加，常以淋巴細(xì)胞為主；細(xì)菌感染所致化膿性腦膜炎時(shí)，細(xì)胞數(shù)顯著增加，以中性粒細(xì)胞為主；腦寄生蟲病時(shí)，可見嗜酸性粒細(xì)胞增多；腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時(shí)，腦脊液內(nèi)可見大量紅細(xì)胞。

顯微鏡檢查

疾病細(xì)胞數(shù)量細(xì)胞種類化膿性腦膜炎↑↑↑中性粒細(xì)胞為主結(jié)核性腦膜炎↑↑早期以中性粒細(xì)胞為主，中期中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞并存，后期以淋巴細(xì)胞為主病毒性腦膜炎↑淋巴細(xì)胞為主真菌性腦膜炎↑淋巴細(xì)胞為主腫瘤性疾病↑或↑↑紅細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞寄生蟲性疾病↑或↑↑嗜酸性粒細(xì)胞腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血↑↑或↑↑↑紅細(xì)胞為主表6-2中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變時(shí)腦脊液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的變化結(jié)核性腦膜炎增殖期化膿性腦膜炎增殖期（三）病原生物學(xué)檢查腦脊液病原生物學(xué)檢查的內(nèi)容一般包括細(xì)菌檢查、真菌檢查和寄生蟲檢查，常用的檢查方法見表6-3。

檢查內(nèi)容檢查方法評(píng)價(jià)細(xì)菌檢查顯微鏡檢查法將腦脊液離心后取沉淀物涂片進(jìn)行革蘭染色、抗酸染色，可初步判斷細(xì)菌染色情況和形態(tài)特點(diǎn)。該法簡單、快速，可以及時(shí)獲得初步診斷，但陽性率較低細(xì)菌培養(yǎng)法排除污染因素，若培養(yǎng)出細(xì)菌可確診細(xì)菌感染，并能確定細(xì)菌的種類以及進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。缺點(diǎn)是耗時(shí)長，不能及時(shí)診斷ELISA法可以檢查細(xì)菌的抗原和抗體，如檢測腦脊液中抗結(jié)核分枝桿菌抗體水平，對(duì)結(jié)核性腦膜炎的診斷及鑒別診斷有較高價(jià)值真菌檢查顯微鏡檢查法將腦脊液離心后取沉淀物涂片進(jìn)行墨汁染色，如發(fā)現(xiàn)新型隱球菌，可診斷新型隱球菌性腦膜炎真菌培養(yǎng)法排除污染因素，若培養(yǎng)出真菌可確診，并能確定真菌的種類以及進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。缺點(diǎn)是耗時(shí)長，不能及時(shí)診斷寄生蟲檢