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熒光抗體的制備免疫學(xué)檢驗(yàn)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)1、制備(1)攪拌法(標(biāo)記體積大、蛋白含量高的Ab)
1)杯中加入待標(biāo)記純化IgG抗體溶液;2)打開磁力攪拌器,輕輕攪拌,以不起沫為準(zhǔn);3)10-15min內(nèi)逐滴加入一定量FITC溶液;4)置于4℃攪拌6-12小時(shí)。—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)1、制備(1)攪拌法優(yōu)點(diǎn):速度快、FITC用量少。缺點(diǎn):非特異性熒光染色。動(dòng)畫:熒光抗體制備(攪拌法)—*—
提問熒光抗體的制備
假如正常情況下一個(gè)抗體上標(biāo)一個(gè)FITC,現(xiàn)在攪拌下一個(gè)抗體上標(biāo)了4個(gè)FITC,在試驗(yàn)時(shí)會(huì)影響結(jié)果嗎?—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)1、制備(2)透析法(標(biāo)記體積小、蛋白含量低的抗體)
1)在透析袋中裝入碳酸鹽緩沖液稀釋后的1%IgG溶液;2)配置10倍體積于1%蛋白液的0.1mg/ml的FTIC,置于燒杯中;3)將透析袋置于燒杯中,F(xiàn)ITC可進(jìn)入透析袋,標(biāo)記抗體;(Ab大分子,不能出透析袋)4)置于4℃,24小時(shí)。(結(jié)合緩慢、溫和,非特異熒光染色少)—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)1、制備(2)透析法優(yōu)點(diǎn):標(biāo)記均勻。缺點(diǎn):FITC用量大。動(dòng)畫:熒光抗體制備(透析法)—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)2、純化1)去除游離熒光素及降解產(chǎn)物→透析、凝膠過(guò)濾2)去除未結(jié)合和結(jié)合過(guò)度的熒光素Ab→陰離子交換層析法3)去除交叉反應(yīng)或非期望抗體→動(dòng)物肝粉吸收或固相抗原吸收—*—
熒光抗體的制備熒光抗體的制備(以將FITC共價(jià)標(biāo)記在抗體上為例)3、鑒定Ab效價(jià)、F/P結(jié)合率等4、保存加入0.1%NaN3或0.01%硫柳汞防腐,避免反
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