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天然藥物化學課程項目五黃酮類成分提取分離任務(wù)4分離方法-柱色譜分離法柱色譜分離法（一）硅膠柱色譜（二）聚酰胺柱色譜（三）葡聚糖凝膠柱色譜（一）硅膠柱色譜（一）硅膠柱色譜主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及甲基化（或乙醚化）的黃酮及黃酮醇類。少數(shù)情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類等。分離黃酮苷元時，可用氯仿-甲醇混合溶劑作洗脫劑；分離黃酮苷時，可用氯仿-甲醇-水作洗脫劑。（二）聚酰胺柱色譜（二）聚酰胺柱色譜對分離黃酮類化合物來說，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基與聚酰胺分子中酰胺基之間形成氫鍵締合能力的大小。常用不同比例的水和醇混合溶劑作為洗脫劑。黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時，有下述規(guī)律：（1）苷元相同，洗脫先后順序一般是叁糖苷、雙糖苷、單糖苷、苷元。（二）聚酰胺柱色譜（2）黃酮母核上增加酚羥基，使其與聚酰胺分子結(jié)合的幾率增加，因此吸附力會增強，洗脫速度相應(yīng)減慢。（3）分子中酚羥基位置對吸附力也有影響。當酚羥基數(shù)目相同時，形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱。（4）分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附，故查耳酮比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。（5）不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮、二氫黃酮醇、黃酮、黃酮醇。（三）葡聚糖凝膠柱色譜（三）葡聚糖凝膠柱色譜對于黃酮類化合物的分離，主要用兩種型號的凝膠：Sephadex-G型及Sephadex-LH20型。用葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的苷和苷元，其分離機制是不同的。分離游離黃酮時，主要靠吸附作用，凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目。分離黃酮苷時，則分子篩的性質(zhì)起主導作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出色譜柱。（三）葡聚糖凝膠柱色譜葡聚糖凝膠柱色譜中常用的洗脫劑有：（1）堿性水溶液（如0.1mol／LNH4OH），含鹽水溶液（0.5mol/LNaCl等）。（2）醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例），叔丁醇-甲醇（3∶1）、乙醇等。（3）

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