微生物的分離培養(yǎng)

微生物的分離培養(yǎng)微生物的分離培養(yǎng)第1頁一、目標(biāo)要求掌握微生物三種分離方法：稀釋平板法；平板涂抹法；平板劃線法觀察細(xì)菌、放線菌和真菌菌落形態(tài)、顏色、大小比較和識別四大類微生物菌落形態(tài)微生物的分離培養(yǎng)第2頁二、試驗材料樣品：神農(nóng)架土壤培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌）高氏一號培養(yǎng)基（加酚液培養(yǎng)放線菌）查氏培養(yǎng)基（加鏈霉素液培養(yǎng)霉菌）試劑和儀器：無菌水、無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌三角玻棒、接種環(huán)、酒精燈、火柴、標(biāo)簽紙、水浴鍋

2人一小組：6個培養(yǎng)皿，3支裝有9ml無菌水試管，6根1ml無菌吸管，1根無菌三角玻璃涂棒微生物的分離培養(yǎng)第3頁三、試驗原理土壤是微生物生活最適宜環(huán)境、它含有微生物所需要為一切營養(yǎng)物質(zhì)和微生物進(jìn)行生長繁殖及生存各種條件．所以土壤中微生物數(shù)量和種類都很多。它們參加土壤氮、碳、硫、磷等元素循環(huán)作用。另外，土壤中微生物活動對土壤形成、土壤肥力和作物生產(chǎn)都有非常主要作用。所以，從土壤中微生物數(shù)量和組成情況，對發(fā)掘土壤微生物資源和對土壤微生物實施定向控制無疑是十分必要。微生物的分離培養(yǎng)第4頁

四、實驗過程1、微生物分離2、細(xì)菌、放線菌和真菌菌落特征觀察3、四大類微生物菌落形態(tài)比較和識別微生物的分離培養(yǎng)第5頁1、微生物分離方法（1）用稀釋平板法從土壤中分離真菌。（使用查氏培養(yǎng)基）（2）用平板涂抹法分離土壤中放線菌。（使用高氏一號培養(yǎng)基）（3）用平板劃線法分離土壤中細(xì)菌。（使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）微生物的分離培養(yǎng)第6頁土壤稀釋液制備1.稱取土壤10g，用研缽研碎放入90mL無菌水三角瓶中（加入玻璃珠），振蕩10min，即為稀釋10－1土壤懸液。2.另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上10－2、10－3、10－4。取已稀釋成10－1土壤液，振蕩后靜止0.5min，用無菌吸管吸收1mL土壤懸液加入10－2無菌水試管中，并在試管內(nèi)輕輕吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續(xù)稀釋至10－3、10－4土壤稀釋液。

微生物的分離培養(yǎng)第7頁圖－1土壤稀釋液制備和稀釋液取樣微生物的分離培養(yǎng)第8頁1.每組取培養(yǎng)皿2只，即每個同學(xué)做1只。先在無菌培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。2.另取一吸管，以無菌操作法吸收10－3或10－4土壤稀釋液0.2mL，加在無菌培養(yǎng)皿一邊，在皿另一邊加入2滴10％酚。此時兩液嚴(yán)防相混。3.取已熔化在水浴鍋中保溫45－500C左右查氏培養(yǎng)基，分別倒入上述培養(yǎng)皿中（見圖－2），輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液、10％酚、培養(yǎng)基充分混勻鋪平，放在平坦桌面上，凝固后，倒置于280C恒溫培養(yǎng)。（1）稀釋平板法（使用查氏培養(yǎng)基）微生物的分離培養(yǎng)第9頁微生物的分離培養(yǎng)第10頁（2）平板涂抹法（使用高氏一號培養(yǎng)基）1.每組取無菌培養(yǎng)皿2只（每個同學(xué)做1只）。在皿底貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。2.以無菌操作法先在培養(yǎng)皿中加入重鉻酸鉀溶液溶液2滴，取已熔化高氏一號培養(yǎng)基，分別倒入培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與重鉻酸鉀溶液充分混勻，鋪平，制成平板。3.凝固后，另取一支吸管吸收10－3或10－4土壤稀釋液0.2mL放在平板上。4.用無菌三角玻棒將稀釋液在平板表面涂抹均勻。倒置于280C條件下培養(yǎng)。微生物的分離培養(yǎng)第11頁微生物的分離培養(yǎng)第12頁（3）平板劃線法（使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）

1.每組取無菌培養(yǎng)皿2只，在皿底貼上標(biāo)簽，注明事項。取已熔化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，倒入平皿，制成平板。

2.凝固后，用接種環(huán)取對應(yīng)菌液一環(huán)（10－3或10－4）在平板上劃線。連續(xù)劃線法：將挑取有樣品接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面作連續(xù)劃線。

3.劃線完成，蓋上皿蓋，倒置于370C溫室培養(yǎng)。微生物的分離培養(yǎng)第13頁微生物的分離培養(yǎng)第14頁2、試驗結(jié)果觀察與統(tǒng)計（1）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌)24h和48h各觀察一次，統(tǒng)計菌落形態(tài)、顏色、大??；

（2)查氏培養(yǎng)基（培養(yǎng)真菌）48h觀察真菌菌落形態(tài)以及計數(shù)菌落。并計算出每g土壤中真菌數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液稀釋倍數(shù)即得；（3）高氏一號培養(yǎng)基（培養(yǎng)放線菌）100～120h觀察菌落形態(tài)及計數(shù)菌落，并計算出每g土壤中放線菌數(shù)量（方法同上）。

微生物的分離培養(yǎng)第15頁3、四大類微生物菌落形態(tài)比較和識別區(qū)分和識別各大類微生物通常包含菌落形態(tài)（群體形態(tài)）和細(xì)胞形態(tài)（個體形態(tài)）兩方面觀察。菌落形態(tài)：菌落表面濕潤：細(xì)菌——薄而小，酵母菌——厚而大。菌落表面干燥：放線菌——密而小，霉菌——松而大。細(xì)胞形態(tài)：細(xì)菌——小而分散酵母菌——大而分散放線菌——絲狀細(xì)霉菌——絲狀粗微生物的分離培養(yǎng)第16頁圖4細(xì)菌菌落形態(tài)。（a）肉眼觀察細(xì)菌菌落形態(tài)多變性。菌落總體形狀和邊緣情況可由菌落上方俯視觀察。而菌落高度則由平板邊緣水平觀察。微生物的分離培養(yǎng)第17頁表－1微生物的分離培養(yǎng)第18頁五、試驗任務(wù)1、2個培養(yǎng)皿倒查氏培養(yǎng)基（稀釋平板法分離真菌）2、2個培養(yǎng)皿倒高氏培養(yǎng)基(三角玻棒涂布法分離放線菌）3、2個培養(yǎng)皿倒牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（劃線法分離細(xì)菌）課后任務(wù)：