微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第1頁營養(yǎng)(nutrition)：生物體從外部環(huán)境中攝取對其生命活動必須能量和物質，以滿足正常生長和繁殖需要一個最基礎生理功效。營養(yǎng)物(nutrient)：含有營養(yǎng)功效物質。

營養(yǎng)物提供生命活動結構物質、能量、代謝調整物質和良好生理環(huán)境。一些微生物可利用非物質形式能源光能。

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第2頁一、細胞化學組成

整個生物界大致相同，主要是C、H、O、N（占干重90－97%），C占約50%，另外為各種無機元素，由這些元素再組成化合物。其中C/N普通是5:1。

第一節(jié)

微生物六種營養(yǎng)要素微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第3頁元素大量元素：碳、氫、氧、氮、磷、硫其它元素：鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、錳、銅、鈷、鋅、鉬等存在方式有機物：蛋白質、糖、類脂、核酸、維生素、降解產(chǎn)物、代謝中間產(chǎn)物無機鹽灰分水—細胞濕重70%~90%微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第4頁元素細菌酵母菌霉菌碳5049.847.0氮157.55.2氫85.76.7氧2031.140.2磷31.51.2硫10.30.2

微生物細胞中幾個主要元素相對含量（%干重）

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第5頁普通生物能利用，微生物能利用；普通生物不能利用，微生物也能利用；對普通生物有害，微生物還能利用。微生物是雜食性：微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第6頁二、主要營養(yǎng)物及其功效

碳源（Carbonsource）氮源（Nitrogensource)能源（Energysource)生長因子（Growthfactor)無機鹽(Inorganicsalt)水(Water)六種營養(yǎng)要素

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第7頁

參加微生物細胞組成提供微生物機體進行各種生理活動所需能量形成微生物代謝產(chǎn)物起源功效:營養(yǎng)物質是微生物新陳代謝和一切生命活動物質基礎，失去這個基礎，生命也就停頓。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第8頁

異養(yǎng)微生物：必須利用有機碳源自養(yǎng)微生物：能利用無機碳源（一）碳源(carbonsource)

一切能滿足微生物生長繁殖所需碳元素營養(yǎng)物。碳源是需要量最大營養(yǎng)物，又稱大量營養(yǎng)物（macronutrients）

有機碳源：蛋白質，核酸，淀粉，葡萄糖等無機碳源：CO2,

Na2CO3

,CaCO3等異養(yǎng)微生物碳源同時也是能源微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第9頁糖類：葡萄糖，果糖，麥芽糖，蔗糖，淀粉，半乳糖，乳糖，甘露糖，纖維二糖，纖維素，半纖維素，甲殼素，木質素，等有機酸：乳酸，檸檬酸，延胡索酸，低級脂肪酸，高級脂肪酸，氨基酸，等醇類：乙醇，等脂類：脂肪，磷脂，等

烴類：天然氣，石油，石油餾分，石蠟油，等CO2碳酸鹽：NaHCO3,CaCO3,白堊，等其它：芳香族化合物，氰化物，蛋白質，肽，核酸微生物可利用碳源(化合物分類)微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第10頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第11頁能為微生物生命活動提供最初能量起源化學物質或輻射能。（三）能源(energysource)異養(yǎng)微生物碳源同時也是能源無機物：化能自養(yǎng)微生物能源能源譜化學物質輻射能：光能自養(yǎng)和光能異養(yǎng)微生物能源有機物：化能異養(yǎng)微生物能源（化能營養(yǎng)型）（光能營養(yǎng)型）微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第12頁單功效：輻射能雙功效：還原態(tài)無機養(yǎng)料，如NH4+既是硝酸鹽細菌能源，又是氮源三功效：N·C·H·O類營養(yǎng)物質常是異養(yǎng)微生物能源，碳源兼氮源

一個營養(yǎng)物含有一個以上營養(yǎng)要素功效微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第13頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第14頁培養(yǎng)基中生長因子起源：酵母膏、玉米漿、麥芽汁等。作用：輔酶或酶活化所需。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第15頁

維生素微生物種硫胺素(B1)Bacillusanthracis(炭疽芽孢桿菌)核黃素Clostridiumtetani(破傷風梭菌)煙酸Brucellaabortus(流產(chǎn)布魯氏桿菌)吡哆酸(B6)Lactobacillusspp.(各種乳酸桿菌)生物素Leuconostocmesenteroides(腸膜狀明串珠菌)泛酸Proteusmorganii(摩氏變形桿菌)葉酸Leuconostocdextranicum(葡聚糖明串珠菌)鈷胺酸(B12)Lactobacillusspp.維生素KBacteroidesmelaninogenicus(產(chǎn)黑素擬桿菌)

若干細菌所需要維生素

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第16頁

維生素轉移對象代謝功效硫胺素(B1)

乙醛基焦磷酸硫胺素是脫羧酶、轉醛酶、轉酮酶輔基，與a－酮酸氧化脫羧和酮基轉移相關吡哆醇(B6)

氨基磷酸吡哆醛是氨基酸消旋酶、轉氨酶與脫羧酶輔基，參加氨基酸消旋、脫羧和轉氨葉酸甲基即輔酶F(四氫葉酸)，參加一碳基轉移，與合成嘌呤、嘧啶、核甘酸、絲氨酸和甲硫氨酸相關維生素B12

羧基，甲基鈷酰胺輔酶，參加一碳基轉移，與甲硫氨酸和胸苷酸相關

維生素生理功效微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第17頁（五）無機鹽(inorganicsalts)所需濃度在10-3-10-4M元素為大量元素

所需濃度在10-6-10-8M元素為微量元素微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第18頁無機鹽生理功效無機鹽大量元素微量元素普通功效特殊功效細胞內普通分子成份(P、S、Ca、Mg、Fe等)生理調整物質滲透壓維持(Na+等)酶激活劑(Mg等)pH穩(wěn)定化能自養(yǎng)菌能源(S、Fe2+、NH4+、MO2-等)

無氧呼吸時氫受體(NO3-、SO42-等)酶激活劑(Cu2+、Mn2+、Zn2+等)特殊分子結組成份(Co、Mo等)MnSO4——過（超）氧化物歧化酶（SOD）輔因子Co——VitB12復合成份，肽酶輔因子Mo——固氮酶及同化型、異化型硝酸鹽還原酶成份微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第19頁生理作用：細胞組成成份生化反應溶劑維持各種生物大分子穩(wěn)定性，參加一些主要生化反應物質運輸媒體調整細胞溫度維持細胞滲透壓（六）水存在狀態(tài)：游離態(tài)（溶劑）和結合態(tài)（結構組成）微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第20頁

依碳源不一樣：異養(yǎng)型(heterotrophs):不能以CO2為主要或唯一碳源自養(yǎng)型(autotrophs):能以CO2為主要或唯一碳源第二節(jié)微生物營養(yǎng)類型依能源不一樣：光能營養(yǎng)型(phototrophs):光反應產(chǎn)能化能營養(yǎng)型(chemotrophs):物質氧化產(chǎn)能

依氫供體不一樣：有機營養(yǎng)型(heterotrophs):以有機物為供氫體無機營養(yǎng)型(autotrophs):以無機物為供氫體

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第21頁微生物營養(yǎng)類型

營養(yǎng)類型能源碳源實例光能無機營養(yǎng)型（光能自養(yǎng)型）光能CO2藍細菌紫硫細菌綠硫細菌藻類光能有機營養(yǎng)型（光能異養(yǎng)型）光能CO2

及簡單有機物紅螺細菌化能無機營養(yǎng)型（化能自養(yǎng)型）

無機物CO2硝化細菌硫化細菌鐵細菌氫細菌化能有機營養(yǎng)型（化能異養(yǎng)型）有機物有機物絕大多數(shù)微生物，原生動物氫供體無機物有機物

無機物有機物微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第22頁

寄生型(parasitism)——寄生于活生物體腐生型(saprophytism)——寄生于死亡生物有機體化能異養(yǎng)型微生物（依據(jù)它們利用有機物特征

）營養(yǎng)類型劃分不是絕正確，不一樣生活條件下，可相互轉變。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第23頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第24頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第25頁在營養(yǎng)物質運輸方面，細胞壁僅簡單地排阻分子量過大(>600Da)溶質進入,而含有磷脂雙分子層和嵌合蛋白分子細胞膜則是控制營養(yǎng)物質進入和排除主要屏障。

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第26頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第27頁依靠胞內外溶液濃度差，順濃度梯度運輸；不消耗代謝能，無特異性；運輸氧、二氧化碳、甘油、乙醇、一些氨基酸等小分子；

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第28頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第29頁利用膜內、膜外被運輸物質和載體蛋白親和力不一樣。特點：需要特異性載體蛋白順濃度梯度運輸不消耗能量運輸硫酸根、磷酸根、糖（真核）等載體蛋白(carrierprotein)，即透性酶（大多為誘導酶），有底物特異性，每種載體蛋白運輸對應物質。載體蛋白可加緊運輸速度，但不能逆濃度運輸。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第30頁促進擴散示意圖

胞外細胞膜胞內微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第31頁單純擴散促進擴散濃度梯度運輸速率單純擴散和促進擴散比較單純擴散隨濃度增加而線性增加，而促進擴散在一定濃度后出現(xiàn)平臺微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第32頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第33頁單純擴散、促進擴散、主動運輸：被運輸溶質分子不發(fā)生改變。

特點：是微生物吸收營養(yǎng)主要方式可逆濃度梯度運輸，耗能需載體蛋白，有特異性運輸有機離子、無機離子、氨基酸、乳糖等糖類

特異性載體蛋白需要能量來改變載體蛋白構象（親和力改變→蛋白構象改變→耗能）微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第34頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第35頁特點：屬主動運輸類型溶質分子發(fā)生化學修飾定向磷酸化需復雜運輸酶系參加運輸葡萄糖、果糖、甘露糖、嘌呤、核苷、脂肪酸等基團移位(grouptranslocation)每輸入一個葡萄糖分子，就要消耗一個ATP能量。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第36頁主要依賴磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和磷酸轉移酶系統(tǒng)(PTS)。PEP+HPrEI丙酮酸+P-HPrP-HPr+糖EII糖-P+HPr1.熱穩(wěn)定性載體蛋白(heatstablecarrierprotein,HPr)激活

2.糖磷酸化后運入膜內

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第37頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第38頁培養(yǎng)基(medium，culturemedium)：是一個人工配制、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用混合養(yǎng)料。第四節(jié)培養(yǎng)基微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第39頁（一）四個標準

1、目標明確（依據(jù)不一樣微生物營養(yǎng)需要配制不一樣培養(yǎng)基）

培養(yǎng)什么微生物、取得什么產(chǎn)物、用途二、選擇和配制培養(yǎng)基標準和方法2、營養(yǎng)協(xié)調

營養(yǎng)協(xié)調(注意營養(yǎng)物濃度和配比，尤其是碳氮比C/N比)微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第40頁C/N比:微生物培養(yǎng)基中所含碳源中碳原子與氮源中氮原子摩爾數(shù)之比。不是簡單某碳源重量與氮源重量之比。因為，不一樣種類碳源和氮源，其中含碳量和含氮量差異很大。普通培養(yǎng)基C/N比為100/0.5～2。以含氮量來看：NH3(82%)>CO(NH2)2(46%)>NH4NO3(35%)>(NH4)2CO3(29.2%)>(NH4)2SO4(21%)微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第41頁適宜營養(yǎng)物質選擇種類舉例說明單糖葡萄糖，麥芽糖，果糖，麥芽糖，半乳糖，木糖用作速效碳源，但會加速菌體呼吸，溶氧下降中間代謝物積累二糖蔗糖，乳糖用作速效碳源，但會加速菌體呼吸，溶氧下降中間代謝物積累多糖淀粉，玉米粉，纖維素遲效碳源。纖維素只有少數(shù)微生物能夠作為碳源。糖蜜甜菜糖蜜，甘蔗糖蜜是非常好碳源，成份復雜，在發(fā)酵工業(yè)中常見酵母發(fā)酵、抗生素和丙酮丁醇生產(chǎn)常見它為碳源。普通包含蔗糖35%，葡萄糖9%，果糖7%，8種其它糖類4%，其它還原物質3%，24種氨基酸占4.5%，有機酸5%，蠟質、甾醇和磷脂占0.4%，灰分12%，水20%。麥芽發(fā)芽大麥主要培養(yǎng)酵母用，工業(yè)上用麥芽汁發(fā)酵，制作啤酒。油脂棉籽油，玉米油，豆油，葵花籽油等。熱值高，液體培養(yǎng)時消耗氧氣多。在工業(yè)上經(jīng)常少許添加作為消泡劑使用。醇類甲醇，甘油甲醇被用來培養(yǎng)酵母。烴類CH4，C2H6，C4H10，C12~C20烷烴熱值高，液體培養(yǎng)時消耗氧氣多。溶解性不好，液體培養(yǎng)對攪拌要求高。有機酸乙酸，乳酸，檸檬酸等利用會造成pH上升微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第42頁表常見微生物氮源種類能夠利用微生物特點有機氮源：牛肉浸膏、酵母浸膏、花生餅粉、黃豆餅粉、棉子餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、魚粉、蠶蛹粉、麥麩、尿素等大個別微生物，如青霉，酵母，大腸桿菌。含有豐富氨基酸，是微生物優(yōu)良氮源。無機氮源：銨鹽、硝酸鹽、氨水等個別微生物（氨基酸異養(yǎng)型不能利用）硝酸鹽要還原后才能用，能夠同時調整pH。N2少數(shù)細菌（約50多個屬，100各種）生物固氮是地球上僅次于光合作用第二個主要生物化學反應。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第43頁表常見培養(yǎng)基中無機鹽及參考濃度（g/L）無機鹽提供元素參考濃度培養(yǎng)基名稱MgSO4Mg0.5察氏培養(yǎng)基KH2PO4/K2HPO4K，P0.12/1.0克氏培養(yǎng)基KClK0.5察氏培養(yǎng)基NaClNa5牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基CuSO4﹒5H2OCu0.016氧化硫酸桿菌培養(yǎng)液ZnSO4﹒7H2OZn0.22氧化硫酸桿菌培養(yǎng)液FeSO4Fe0.01察氏培養(yǎng)基CaCl2﹒2H2OCa0.25氧化硫酸桿菌培養(yǎng)液NaHCO3Na0.1藍細菌培養(yǎng)基MnCl2﹒4H2OMn0.05氧化硫酸桿菌培養(yǎng)液（NH4）6Mo7O24﹒4H2OMo0.01氧化硫酸桿菌培養(yǎng)液微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第44頁pH

滲透壓和水活度氧化還原電位3、物理化學條件適宜:微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第45頁

細菌:pH7.0~8.0

放線菌：pH7.0~8.5

酵母菌:pH3.8~6.0

霉菌：pH4.0~6.0pH：微生物有最正確生長pH微生物在生長過程中培養(yǎng)基pH值可能發(fā)生改變：在含糖基質上生長,會產(chǎn)酸而使pH下降，在分解蛋白質和氨基酸時,會產(chǎn)NH3而使pH上升，以(NH4)2SO4

作N源,會過剩SO42-,而使pH下降，分解利用陽離子化合物如：NaNO3,會過剩Na+而使

pH上升。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第46頁

維持培養(yǎng)基pH方法使用磷酸緩沖劑：

K2HPO4/KH2PO4采取“備用堿”：CaCO3

、CaHCO3采取弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽等采取液氨或鹽酸微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第47頁滲透壓(osmoticpressure):高濃度溶液向低濃度溶液滲透時，其溶質分子所產(chǎn)生壓力。

高滲溶液會造成微生物細胞發(fā)生質壁分離低滲溶液會造成微生物細胞吸水膨脹甚至破裂微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第48頁

水可利用性用水活度(wateractivity,aw)表示aw：在天然環(huán)境中，微生物可實際利用自由水或游離水含量。aw=P/Po

P:溶液蒸汽壓

Po:純水蒸汽壓水活度需等滲適宜。微生物適宜生長aw為0.6～0.998之間。在常溫常壓下，純水a(chǎn)w為1.00在同溫同壓，某溶液飽和蒸汽壓與純水飽和蒸汽壓之比。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第49頁溶液aw30%葡萄糖溶液0.9641%葡萄糖+20%甘油0.9551%葡萄糖+40%蔗糖0.964飽和氯化鈉溶液0.78飽和氯化鈣溶液0.30飽和氯化鎂溶液0.30飽和氨化鋰溶液0.11幾個溶液水活度值

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第50頁4、原料起源選擇（經(jīng)濟節(jié)約）

經(jīng)濟節(jié)約標準:以粗代精、以廢代好、以簡代繁原料起源要廣泛原料要易處理，處理成本要低原料處理后，廢物、廢液、廢氣要少微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第51頁滅菌處理高壓蒸汽滅菌：1.05kg/cm，1210C，15～30min高溫滅菌對營養(yǎng)物質破壞及pH改變微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第52頁（二）四種方法生態(tài)模擬查閱文件精心設計試驗比較微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第53頁培養(yǎng)基類型（一）依對培養(yǎng)基成份了解：

天然培養(yǎng)基(complexmedium,undefinedmedium)，指一些利用動、植物或微生物體或其提取物制成培養(yǎng)基，成份未知。如培養(yǎng)細菌所用肉湯蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)酵母菌麥芽汁培養(yǎng)基等。

優(yōu)點：取材方便、營養(yǎng)豐富、種類多樣、配制方便微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第54頁組合培養(yǎng)基(definedmedium)，或稱合成培養(yǎng)基

(syntheticmedium)是一類按微生物營養(yǎng)要求準確設計后用各種高純化學試劑配制、各成份（包含微量元素）量都確切知道培養(yǎng)基。如培養(yǎng)細菌所用葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基，培養(yǎng)放線菌淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏一號）。較昂貴，普通用于研究工作（代謝、遺傳分析）。優(yōu)點：組份準確、重復性好。

半組合培養(yǎng)基，又稱半合成培養(yǎng)基(Semi-definedmedium)是一類主要以化學試劑配制，同時又加有某種或一些天然成份培養(yǎng)基。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第55頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第56頁

固體培養(yǎng)基(solidmedium)，普通加有凝固劑，凝固劑含量普通為1～2％。作為凝固劑條件：不被微生物分解利用，生長溫度范圍內保持固體狀態(tài)，凝固點溫度對微生物無害，不因滅菌而破壞，透明度好、配制方便、價格低。常見為瓊脂與明膠。因為固體培養(yǎng)基能提供表面，形成單菌落，所以可用于：菌種分離、判定、保藏等。

液體培養(yǎng)基(liquidmedium)，培養(yǎng)基中沒有凝固劑。用途：大量培養(yǎng)微生物，碩士理代謝等。

半固體培養(yǎng)基(semi-solidmedium)，凝固劑含量普通約為0.5%,

用途：觀察細菌運動，測定噬菌體效價等。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第57頁培養(yǎng)基固化物瓊脂與明膠比較

化學成份營養(yǎng)價值分解性融化溫度凝固溫度常見濃度透明度粘著力耐加壓滅菌瓊脂聚半乳糖硫酸酯無罕見～960C～400C1.5～2%高強強明膠蛋白質作氮源極易～250C～200C5～12%高強弱微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第58頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第59頁微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第60頁EMB(EosinMethyleneBlue)培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量混合酸，菌體帶H+,故可染上酸性染料伊紅，又因伊紅與美藍結合，使菌落呈深紫色。從菌落表面反光還可看到綠色金屬閃光。而產(chǎn)酸弱菌株菌落呈棕色。不發(fā)酵乳酸菌落無色透明。判別腸道細菌伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基是為了觀察某種糖被分解后是否產(chǎn)生酸一個培養(yǎng)基

微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第61頁伊紅美藍(EMB,EosinMethyleneBlue)培養(yǎng)基微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第62頁試驗室常見培養(yǎng)基舉例說明參考書：微生物培養(yǎng)基制造與應用，陳天壽主編，中國農業(yè)出版社，1995年6月第一版，996千字，55元。微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第63頁

營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋白胨）

作用：普通好氧性細菌分離培養(yǎng)配方：蛋白胨10g

牛肉浸膏3gNaCl5g

瓊脂15~20g

蒸餾水1000mlPH7.0~7.2

高壓蒸氣滅菌121℃，15~30min液體（普通）營養(yǎng)肉湯：不含瓊脂微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基ppt第64頁伊紅美藍（EMB）培養(yǎng)基作用：分離腸道細菌配方：蛋白胨10g

乳糖5g

蔗糖5gK2HPO42g

伊紅Y0.4g

美藍0.065g

瓊脂15~20g

蒸餾水1000ml