鎮(zhèn)痛藥理研究

鎮(zhèn)痛藥理研究鎮(zhèn)痛藥理研究第1頁(yè)疼痛生理、病理和藥學(xué)當(dāng)代疼痛學(xué)之所以能夠發(fā)展，最主要是得益于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功效可塑性改變概念引入，從分子到腦功效全方面地揭示病理痛信息跨突觸、跨膜和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制奠定了理論基礎(chǔ)，為臨床尋找高效、低毒、全安鎮(zhèn)痛藥提供了導(dǎo)向。鎮(zhèn)痛藥理研究第2頁(yè)鎮(zhèn)痛發(fā)展簡(jiǎn)史回顧(一)中醫(yī)對(duì)痛認(rèn)識(shí)痛為臨床常見癥狀，是疾病發(fā)展到一定時(shí)期表現(xiàn)，又是人體神經(jīng)抗御外邪自護(hù)自調(diào)一個(gè)反應(yīng)，身體某一部受損，最終表現(xiàn)疼痛。中醫(yī)理論認(rèn)為,“不通則痛”和“不榮則痛”則是一切疼痛發(fā)生病理基礎(chǔ)。鎮(zhèn)痛藥理研究第3頁(yè)中醫(yī)理論認(rèn)為：“諸病皆因于氣”。即一切痛產(chǎn)生都因?yàn)闅鈾C(jī)被干擾《素問·舉痛論》云：“經(jīng)脈流行不止，環(huán)周不休。寒氣入經(jīng)則稽遲，泣而不行，客于脈外則血少，客于脈中則氣不通，故卒然而痛”。鎮(zhèn)痛藥理研究第4頁(yè)不通則痛”詳細(xì)病因病機(jī)又可與下面原因相關(guān)。①寒邪凝滯，陽(yáng)氣不達(dá)，氣血不暢，經(jīng)氣閉阻則可致疼痛發(fā)生。

《內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為“寒邪入經(jīng)二稽遲，泣而不行，客于脈中則氣不通，故卒然而痛…脈寒則縮卷，縮卷則絀急，則外引小絡(luò)，故卒然而痛….”，疼痛或緩或急，常有冷感，痛有定處，得溫痛減，或喜按，遇寒加劇鎮(zhèn)痛藥理研究第5頁(yè)②瘀血內(nèi)阻每致絡(luò)脈不通，不通則痛。津不生血反為滯愈加阻滯氣運(yùn)行與生成，形成腫脹而痛，氣血瘀滯，脈搏道失榮，真氣難通，瘀血妨礙滯，臟虛腹實(shí)，氣血運(yùn)行失常其常規(guī)，久病入絡(luò)，血液污穢，成毒敗血，損傷脈絡(luò)而痛。痛如針刺，痛有定處，拒按，夜間痛甚。鎮(zhèn)痛藥理研究第6頁(yè)③氣機(jī)郁滯而致疼痛。疼痛性質(zhì)多為脹痛，痛無定處，遇情志刺激加重。④熱毒內(nèi)蘊(yùn)，腑氣不通，六腑以通為用，以降為順，如腑氣通降失常，梗阻不通則產(chǎn)生疼痛，痛勢(shì)較劇，呈熱痛，得冷稍減。⑤痰濁阻滯臟腑經(jīng)絡(luò)或結(jié)聚四肢百骸，經(jīng)氣不利而致痛，疼痛多為鈍痛、隱痛、脹痛、木痛等。鎮(zhèn)痛藥理研究第7頁(yè)“不榮則痛”正氣不足，氣血津液虧虛，臟腑經(jīng)絡(luò)失養(yǎng)而致“不榮則痛”?！端貑枴づe痛論》：“寒氣客于五藏，厥逆上泄，陰氣竭，陽(yáng)氣未入，故卒然而痛”?！鹅`樞·陰陽(yáng)二十五人》：“血?dú)饨陨賱t喜轉(zhuǎn)筋，踵下痛”。鎮(zhèn)痛藥理研究第8頁(yè)《靈樞·五癃津液別》：“陰陽(yáng)不和，則使液溢而下流于陰，髓液皆減而下，下過分則虛，虛故腰背痛而脛酸?！泵鞔_提出了虛可致痛觀點(diǎn)?！缎l(wèi)生寶鑒》:“清陽(yáng)之氣愈虧損，不能上榮….所以頭苦痛”。《質(zhì)疑錄》：“肝血不足則為筋攣….為目眩，為頭痛，為脅肋痛。為少腹痛，為疝痛諸證，凡此皆肝血不榮也”。普通而言，虛證常有寒化或熱化之趨勢(shì)，故除疼痛外，尚可兼有虛熱或虛寒對(duì)應(yīng)征象。“不榮則痛”表現(xiàn)為隱隱作痛，綿綿不休，疲勞即劇，時(shí)作時(shí)止。鎮(zhèn)痛藥理研究第9頁(yè)中醫(yī)理論認(rèn)為，心主神明。疼痛是一個(gè)感覺,一切疼痛又必須在“神”參加下才能產(chǎn)生。《素問·靈臺(tái)秘典論》云：“心者，君主之官，神明出焉?！薄鹅`樞·本神》云：“所以任物者謂之心”?！秲?nèi)經(jīng)》強(qiáng)調(diào)：“刺肉無傷脈，脈傷則內(nèi)動(dòng)心”。鎮(zhèn)痛藥理研究第10頁(yè)疼痛定義國(guó)際疼痛學(xué)會(huì)（InternationalAssociationfortheStudyofPain,IASP）“疼痛是與實(shí)際或潛在組織損傷相關(guān)聯(lián)不愉快感覺和情感體驗(yàn)，或用組織損傷這類詞匯所描述主訴癥狀”,“無交流能力決不能否定一個(gè)個(gè)體正有痛體驗(yàn)和需要適當(dāng)緩解疼痛治療可能性”。疼痛應(yīng)包含“痛知覺”（painperception），和“難受”(unpleasant)情感反應(yīng)。包含機(jī)體內(nèi)在主觀、個(gè)人、多維體驗(yàn),它包括心理、行為、情感、認(rèn)知和感覺等內(nèi)容。鎮(zhèn)痛藥理研究第11頁(yè)疼痛生物學(xué)息義疼痛是全部動(dòng)物共有感覺,并與人感覺相同。疼痛也是每個(gè)人一生中體驗(yàn)最早、最多主觀感覺,像一把峰刃雙面刀，是機(jī)體和內(nèi)臟受到傷害性刺激、侵害保護(hù)性警報(bào)信號(hào)。生理性疼痛是生存必需警報(bào)系統(tǒng)病理性疼痛是妨礙生存一個(gè)疾病,它提醒患者需要醫(yī)療幫助，去看醫(yī)生，取得治療,早期治療有利于急性疾病和組織損傷保持穩(wěn)態(tài),開啟復(fù)雜體液反應(yīng),防止病改變過分或過分延長(zhǎng)，降低患者死亡率,從而使大家躲避危險(xiǎn)、確保人體健康。所以,疼痛是作為保護(hù)人和生物體正常生存必不可少防御系統(tǒng),是生命不可缺乏一個(gè)特殊保護(hù)性機(jī)制(功效),含有主動(dòng)生物學(xué)作用。鎮(zhèn)痛藥理研究第12頁(yè)鎮(zhèn)痛目標(biāo)意義嚴(yán)重疼痛能引發(fā)休克或引發(fā)人體各個(gè)系統(tǒng)功效失調(diào)、免疫功效低下而誘發(fā)各種并發(fā)癥,甚者引發(fā)終生致痛性殘疾或危及病人生命。及時(shí)施用鎮(zhèn)痛法能有效地緩解、減輕、控制和治療疼痛,預(yù)防猛烈疼痛誘發(fā)機(jī)體休克等癥狀發(fā)生所造成對(duì)機(jī)體嚴(yán)重傷害,有效地保護(hù)機(jī)體、促使疾病康復(fù)。鎮(zhèn)痛藥理研究第13頁(yè)與疼痛相關(guān)術(shù)語(yǔ)1.感覺閾受試者首次感覺到有刺感、溫?zé)岣凶钚〈碳ち俊?.痛閾（painthreshold）受試者首次能夠識(shí)別引發(fā)痛覺最小刺激量。在人心理物理或動(dòng)物試驗(yàn)研究中，為了檢測(cè)痛閾或傷害性反應(yīng)閾值，以能識(shí)別50%刺激為痛刺激強(qiáng)度定為閾值或?qū)⒛芤l(fā)傷害性反應(yīng)50%刺激強(qiáng)度定為傷害性反應(yīng)閾值。3.痛耐受水平（paintolerancelevel）是指受試者能夠忍受痛最高水平，與痛閾一樣，也可用刺激強(qiáng)度測(cè)量，但不代表刺激強(qiáng)度。4.鎮(zhèn)痛或無痛（analgesia）是指在機(jī)體正?；虿±砬闆r下，痛刺激不能夠引發(fā)痛及痛反應(yīng)。鎮(zhèn)痛藥理研究第14頁(yè)5.麻醉性鎮(zhèn)痛藥指藥品經(jīng)過阻斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)痛覺沖動(dòng)突觸傳遞鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)痛藥。6.解熱鎮(zhèn)痛藥:指藥品經(jīng)過阻斷外周痛覺感受器產(chǎn)生痛覺沖動(dòng)而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用藥品。7.內(nèi)臟痛

(visceralpain)是由內(nèi)臟器官障礙所引發(fā),它包含因?yàn)樽枞蚰[瘤所致擴(kuò)張、缺血、炎癥及腸系膜牽拉等,能引發(fā)聯(lián)合癥狀,如發(fā)燒、惡心、不適和疼痛。內(nèi)臟痛覺是因感覺傳入神經(jīng)刺激內(nèi)臟器官活動(dòng)結(jié)果。臨床上極為普遍癥狀，常伴有情緒反應(yīng)和防御反應(yīng)。鎮(zhèn)痛藥理研究第15頁(yè)8..燒灼痛（causalgia）特指在外周神經(jīng)創(chuàng)傷性損傷后發(fā)生一個(gè)連續(xù)燒灼樣自發(fā)痛、痛敏和異常痛敏等癥狀，并伴有萎縮、血管運(yùn)動(dòng)和汗腺分泌功效障礙等植物神經(jīng)功效紊亂癥狀。9.牽涉性痛（referredpain）是內(nèi)臟關(guān)聯(lián)痛主要特征之一，以胸腹盆腔內(nèi)臟器官病變?yōu)樵蚨l(fā)生內(nèi)臟痛經(jīng)常在遠(yuǎn)離痛因部位某軀體部位而被感知，這種非痛因部位軀體痛被稱之為牽涉痛。牽涉痛只發(fā)生在接收傳導(dǎo)內(nèi)臟痛沖動(dòng)傳入纖維所進(jìn)入脊髓后根所支配軀體部位。鎮(zhèn)痛藥理研究第16頁(yè)10.纖維肌痛(FM)指非骨關(guān)節(jié)廣泛平滑肌痛，并有觸痛點(diǎn)。美國(guó)風(fēng)濕學(xué)會(huì)擬訂診療關(guān)鍵點(diǎn)為：身體兩側(cè)廣泛痛(腰或腰以上中軸線骨骼肌痛)超出3個(gè)月，T雙側(cè)觸痛，可能伴有頭痛、抑郁、焦慮、刺激性排便、自主神經(jīng)功效紊亂、神經(jīng)內(nèi)分泌改變等。11.復(fù)合性局部疼痛癥候群(CRPS型)，舊稱反射性交感神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)不良實(shí)為創(chuàng)傷后疼痛癥候群，表現(xiàn)為連續(xù)痛，有時(shí)有刺蜇痛,亦有書將其分為：炎癥性疼痛、神經(jīng)性疼痛、血源性疼痛、代謝性疼痛、免疫源性疼痛、心理性疼痛。其中炎癥性疼痛是慢性痛中最常見原因之一，可表現(xiàn)為長(zhǎng)久酸痛，隱痛或定時(shí)及不定時(shí)發(fā)作痛，有時(shí)可有明確定位疼痛，有時(shí)則缺乏。鎮(zhèn)痛藥理研究第17頁(yè)12.炎癥炎癥是“各種內(nèi)源性、外源性刺激引發(fā)細(xì)胞損傷,同時(shí)引發(fā)伴有血管反應(yīng)結(jié)締組織復(fù)合性反應(yīng)”。依據(jù)炎癥連續(xù)時(shí)間,分為急性炎癥和慢性炎癥。前者通常病程為數(shù)天，以滲出液反應(yīng)（蛋白成份多細(xì)胞外液浸潤(rùn)）和中性粒細(xì)胞反應(yīng)主。后者細(xì)胞成份以淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，伴有組織壞死或組織修復(fù)步驟之一纖維化反應(yīng),病程趨亍復(fù)雜。其主要是以“病情經(jīng)過”來定義,疾病表現(xiàn)趨于多樣化。13.炎癥疼痛:組織炎癥或造型引發(fā)炎癥模型均可引發(fā)痛閾敏化,產(chǎn)生疼痛,引發(fā)炎性疼痛。與疼痛有著親密相關(guān),炎性疼痛,是因?yàn)檠装Y引發(fā)組織腫脹、炎性滲出物壓迫神經(jīng)纖維末梢和強(qiáng)致痛性致炎性介質(zhì)釋放直接作用于神經(jīng)末梢。如緩激肽、5-HT、前列腺素等能敏化傷害性感受器而誘發(fā)痛過敏(1),大鼠后肢足跖中部皮下注射角叉菜膠造成炎癥痛過敏(2),鏈脲佐菌素誘發(fā)大鼠糖尿病性神經(jīng)痛模型,其行為傷害性痛閾值顯著降低,表明糖尿病大鼠處于痛過敏狀態(tài)。鎮(zhèn)痛藥理研究第18頁(yè)14.痛敏(或痛覺過敏)hyperalgesia(或hyperesthesia）是指在組織或神經(jīng)損傷后，正常情況下,一定閾上痛刺激強(qiáng)度在損傷部位或損傷以外部位引發(fā)更強(qiáng)疼痛?；?qū)π源碳ぎa(chǎn)生過強(qiáng)疼痛反應(yīng)。痛敏分為原發(fā)性痛敏（primaryhyperalgesia）和繼發(fā)性痛敏（secondaryhyperalgesia）痛敏只是感覺強(qiáng)度上量變，但無感覺模式上質(zhì)變。痛敏可能是外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)或功效改變結(jié)果。鎮(zhèn)痛藥理研究第19頁(yè)15.痛覺超敏或稱痛性感覺異常（allodynia）是指在組織或神經(jīng)損傷后，正常情況下不引發(fā)痛刺激，或指在非傷害性刺激作用下產(chǎn)生痛覺。如觸刺激、輕壓刺激、非傷害性冷或熱刺激，能在損傷或損傷以外部位引發(fā)痛。異常痛敏與痛敏不一樣，它在刺激-感覺模式上發(fā)生了“質(zhì)變”，已失去了感覺模式特異性。痛敏只是感覺強(qiáng)度上量變，但無感覺模式上質(zhì)變。鎮(zhèn)痛藥理研究第20頁(yè)16.中樞性疼痛(centralpain,CP)是指因?yàn)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)本身傷病所造成自發(fā)痛和對(duì)于外加刺激過分疼痛反應(yīng),包含一個(gè)不愉快觸物感痛(dysaesthesia)。17.自發(fā)痛(spontancouspain)指在沒有可見刺激條件下產(chǎn)生痛覺。18.神經(jīng)痛（neuralgia）是指疼痛沿著單根或多根外周神經(jīng)分布或放散。而神經(jīng)痛使用較廣泛。鎮(zhèn)痛藥理研究第21頁(yè)19.神經(jīng)痛常由創(chuàng)傷或疾病所致神經(jīng)根、神經(jīng)節(jié)、祌經(jīng)叢、祌經(jīng)干或其分支原發(fā)或繼發(fā)性損害引發(fā)異常疼痛。多見于頸肩腰腿痛等病證。是一個(gè)臨床常見慢性痛?；蚴侵柑弁囱刂鴨胃蚨喔庵苌窠?jīng)分布或放散。神經(jīng)痛使用較廣泛。20.神經(jīng)炎（neuritis）是指外周單根或多根神經(jīng)炎癥。只有在確定炎癥時(shí)才使用神經(jīng)炎。是指疼痛沿著單根或多根外周神經(jīng)分布或放散；只有在確定炎癥時(shí)才使用神經(jīng)炎。而神經(jīng)痛使用較廣泛。21.神經(jīng)源性痛（neurogenicpain）是指由中樞或外周神經(jīng)原發(fā)性損傷、功效障礙或一過性激惹而引發(fā)疼痛。鎮(zhèn)痛藥理研究第22頁(yè)22.傷害性痛（nociceptivepain）是在機(jī)體組織損傷或向機(jī)體施加含有造成組織損傷潛在性傷害性刺激時(shí)所發(fā)生一個(gè)疼痛。有生理性傷害性疼痛（physiologicalpain）、非生理性或稱病理性疼痛（pathologicalpain）。分為軀體性疼痛（somaticpain）和內(nèi)臟性疼痛（visceralpain）。軀體性疼痛有皮膚、黏膜部位表淺痛（superficialpain）和骨骼肌、骨骼及關(guān)節(jié)等部位深部痛（deeppain）。鎮(zhèn)痛藥理研究第23頁(yè)22.神經(jīng)源性疼痛（neurogenicpain）是因?yàn)橹袠谢蛲庵苌窠?jīng)原發(fā)性損傷、功效障礙或一過性激惹而引發(fā)疼痛(綜合癥),包含自發(fā)痛和誘發(fā)痛。23.神經(jīng)病理性痛（neuropathicpain）又稱神經(jīng)性疼痛系指中樞或外周神經(jīng)組織本身受損傷或炎性病變引發(fā)疼痛感覺系統(tǒng)功效異常所引發(fā)伴隨性疼痛和神經(jīng)系統(tǒng)激惹一過性異常興奮所產(chǎn)生連續(xù)性慢性疼痛，疼痛常在損傷后一段時(shí)間發(fā)生，伴有感覺異常?；蚍褐赣缮窠?jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損傷或功效障礙所引發(fā)疼痛。鎮(zhèn)痛藥理研究第24頁(yè)24.精神源性痛（painofpsychologicalorigin）是在機(jī)體無任何病理性異常時(shí)所表現(xiàn)一個(gè)疼痛。它包含由精神妄想（delusion）或幻想（hallucination）、癔?。╤ysteria）、轉(zhuǎn)換（conversion，指由情緒轉(zhuǎn)換為軀體癥狀過程）、疑病癥（hypochondriasis）或抑郁癥（depression）等精神性疾患所引發(fā)疼痛。25.周圍神經(jīng)病理性疼痛(多發(fā)性神經(jīng)病痛)因小神經(jīng)纖維受累所致，見于糖尿病、血管炎、AIDS、尿毒癥、毒物和藥品中毒，以及淀粉樣變性。26.交感祌經(jīng)依賴性疼痛(SMP)和交感祌經(jīng)非依賴性疼痛(SIP)前者指假如交感神經(jīng)阻斷后疼痛減輕,而后者指若始疼痛不減輕。27.脊髓刺激(spinalcordstimulation,SCS)指經(jīng)過放置硬膜外隙電極,提供電刺激作用于脊髓后根。鎮(zhèn)痛藥理研究第25頁(yè)鎮(zhèn)痛藥常見給藥路徑應(yīng)采取擬推薦臨床應(yīng)用給藥路徑。給藥路徑普通采取二種,其中一個(gè)應(yīng)與臨床相同。如確有困難可采取其它給藥路徑,但應(yīng)說明困難原和選取其它給藥路徑理由。溶解性好藥品,可注射給藥,但要排除非特異性反應(yīng)。粗制劑或溶解性差藥品,可使用單一給藥路徑。注射給藥或離體試驗(yàn)時(shí)應(yīng)考慮到樣品中雜質(zhì)、不溶解始質(zhì)、無機(jī)離子及PH濃度等原因?qū)υ囼?yàn)干擾。鎮(zhèn)痛藥理研究第26頁(yè)鎮(zhèn)痛常見給藥路徑動(dòng)物試驗(yàn)常見肌內(nèi)給藥、腹腔內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、口服給藥、皮下給藥、皮膚給藥、粘膜給藥、腦室給藥、腦內(nèi)神經(jīng)核團(tuán)給藥、腦脊腔內(nèi)給藥、鞘內(nèi)注射給藥、蛛網(wǎng)膜下腔注射給藥、經(jīng)皮給藥、經(jīng)粘膜給藥等以評(píng)價(jià)其藥效及其作用機(jī)制、毒性。鎮(zhèn)痛藥理研究第27頁(yè)(一)小鼠側(cè)腦室注射給藥小鼠。剪去小鼠頭部毛,消毒皮膚,在頭頂部注射部位剪去直徑約0.8cm皮膚。將小鼠頭腹位固定,用微量注射器,于小鼠頭部?jī)啥B線與矢狀縫交點(diǎn)左右前外各2mm進(jìn)針,深度約2min,約10s內(nèi)注射完,停針1min出針,用膠尼封口。一次注射量<10μl。給藥10minip1%醋酸溶液,觀察統(tǒng)計(jì)15min小鼠扭體次數(shù),計(jì)算小鼠扭體抑制%,求出

icvID50。試驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)測(cè),注射1%伊文氏藍(lán)注入腦室注即刻處死小鼠,剖檢觀察伊文氏藍(lán)是否進(jìn)入腦室,以確定注射部住,以后按照此坐標(biāo)定位給藥。鎮(zhèn)痛藥理研究第28頁(yè)(二)大鼠側(cè)腦室注射給藥大鼠乙醚麻醉后,固定于腦立體定位儀上。剪去頭部毛,切開皮膚,暴露顱骨。剝離附著在顱骨組織,用脫脂酒精棉球擦干顱骨,在矢狀縫外2mm,冠狀縫后2mm兩平行線交點(diǎn),用鉆頭打一個(gè)小孔,用固定于立體定位儀微量注射器垂直植入孔內(nèi)4mm,每次注入不超出20ul/只,注射畢,停針20秒出針,用速凝牙托粉封口,15分進(jìn)行測(cè)痛。屢次給藥,可植入導(dǎo)管,用螺絲或速凝牙托粉澆注固定,術(shù)后4～5天進(jìn)行試驗(yàn)。取合格大鼠,隨機(jī)分組。鎮(zhèn)痛藥理研究第29頁(yè)(三)家兔側(cè)腦室注射給藥成年家兔,雌雄不拘。剪去手術(shù)野毛,碘酒、酒精消毒,于局部麻醉下,在冠狀縫離中線4mm處鉆孔,然后將一特制家兔腦室套管(塑料)插入腦室,使套管尖端位于側(cè)腦室,并固定于顱骨上。鎮(zhèn)痛藥理研究第30頁(yè)(四)腦內(nèi)神經(jīng)核團(tuán)給藥(五)鞘內(nèi)注射給藥(六)蛛網(wǎng)膜下腔注射給藥(七)經(jīng)皮給藥(八)經(jīng)粘膜給藥鎮(zhèn)痛藥理研究第31頁(yè)一、小鼠扭體試驗(yàn)(writhingtest)【原理】把一定容量和濃度化學(xué)刺激物質(zhì)(醋酸溶液等)或鹽水注入小鼠腹腔內(nèi),因?yàn)榇碳づK層和壁層腹膜,引發(fā)深、大面積而持久疼痛刺激，引發(fā)深部廣泛腹膜炎造成腹壁肌肉擔(dān)心、炎性疼痛,致使小鼠出現(xiàn)經(jīng)典腹部肌肉收縮，同時(shí)伴有一側(cè)后肢外伸軀體伸縮行為。即腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后肢伸張、臂部高起,身體扭曲等特征性行為反應(yīng),稱之為扭體反應(yīng)(writhingresponse)(圖20-2-1)。鎮(zhèn)痛藥理研究第32頁(yè)潛伏期為3～5分鐘,以注射醋酸溶液后15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)頻率為高。

醋酸誘發(fā)廣泛腹膜炎造成腹壁肌肉擔(dān)心有軀體痛參加而造成。醋酸所引發(fā)傷害性反應(yīng),可能因?yàn)楦骨籔H值降低而直接刺激傷害性傳入神經(jīng)纖維和促進(jìn)炎癥遞質(zhì)合成引發(fā)炎癥和疼痛,共同起作用。鎮(zhèn)痛藥理研究第33頁(yè)隨機(jī)分為對(duì)照組、廣西血竭組、嗎啡組。每組20只。對(duì)照組、廣西血竭組灌胃給藥、天天一次,連讀5天,于末次給藥后60分,嗎啡組一次腹腔注射30分鐘后，腹腔注射1％醋酸溶液10ml／kg后,觀察統(tǒng)計(jì)注射醋酸溶液后20分內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)鼠數(shù)和扭體次數(shù)作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)。并計(jì)算其均值、抑制扭體反應(yīng)次數(shù)百分率(抑制%)

對(duì)照組扭體次數(shù)均值—藥品組扭體次數(shù)均值抑制%=------------------------------------------X100%對(duì)照組扭體次數(shù)均值

鎮(zhèn)痛藥理研究第34頁(yè)廣西血竭對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)影響

(x±s,n=20)組別劑量(g/kg)扭體動(dòng)物數(shù)(%)扭體次數(shù)對(duì)照組20(100%)42.60±11.4廣西血竭組

14.420(100%)26.40±14.5*嗎啡組0.0053(15%)0.20±0.02**對(duì)照組

20(100%)39.10±12.8廣西血竭組7.220(100%)26.40±14.5*嗎啡組0.0053(15%)0.20±0.02**鎮(zhèn)痛藥理研究第35頁(yè)注意事項(xiàng)1.扭體試驗(yàn)又稱為扭動(dòng)試驗(yàn)、腹部收縮試驗(yàn)?？蓱?yīng)用各種動(dòng)物，以小鼠和大鼠最正確。2.己證實(shí)各種物質(zhì)腹腔注射可誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)。但應(yīng)用最普遍是醋酸溶液3.Schmauss〔7〕提出了一個(gè)行為學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，將扭體行為分為0～3四個(gè)等級(jí),依據(jù)這個(gè)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)能夠把行為學(xué)量化。所以，這種模型也成為評(píng)定其它模型一個(gè)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。4.腹腔注射生理鹽水可誘發(fā)小鼠(4%)、大鼠扭體(6%)反應(yīng),應(yīng)注意。5.常見小鼠，亦用大鼠（費(fèi)用高）鎮(zhèn)痛藥理研究第36頁(yè)小鼠扭體反應(yīng)誘發(fā)劑種類誘發(fā)劑名稱濃度(%)用量(ml/只)醋酸溶液0.6～0.90.2(小鼠)0.5～2.5(大鼠)酒石酸銻鉀溶液0.050.2苯醌水溶液(飽和溶液)0.020.2緩激肽溶液0.001250.22-苯-1,4-苯甲酰苯醌(含有5%酒精水溶液)0.020.20.02%苯醌混懸于1%羧甲基纖維素溶液0.25PgE131.6ug烏頭堿、乙酰膽堿、高嶺土混懸液、酵母多糖溶液、五羥色胺、硫酸鎂等。鎮(zhèn)痛藥理研究第37頁(yè)5.醋酸濃度為1．1％時(shí)小鼠扭體最顯著，注射后3—5分鐘小鼠出現(xiàn)顯著扭體反應(yīng)。酸濃度為0．3％，不出現(xiàn)扭體反應(yīng)，醋酸濃度為

1．9％時(shí)，小鼠活動(dòng)降低。室溫在20～22℃扭體反應(yīng)最經(jīng)典,l6℃時(shí)小鼠扭體反應(yīng)不穩(wěn)定，28℃時(shí)小鼠活動(dòng)降低〔8〕。

6.誘發(fā)劑濃度及用量應(yīng)經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)確定。7.酒石酸銻鉀溶液務(wù)必于臨用時(shí)新配,放久效用減弱。8.對(duì)照組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),普通在控制在25～30次為宜。鎮(zhèn)痛藥理研究第38頁(yè)【評(píng)價(jià)】1.小鼠扭體法是篩選鎮(zhèn)痛藥常見方法之一,尢其是弱鎮(zhèn)痛藥一個(gè)常規(guī)篩選試驗(yàn)方法。適合于中樞和外周鎮(zhèn)痛藥篩選研究,尤其用于外周鎮(zhèn)痛藥評(píng)價(jià)。其試驗(yàn)作用強(qiáng)度和臨床鎮(zhèn)痛效果含有顯著相關(guān)性。2.觀察統(tǒng)計(jì)藥品抑制小鼠扭體鼠數(shù)或扭體次數(shù),以出現(xiàn)扭體鼠為陽(yáng)性,不出現(xiàn)扭體鼠為陰性,計(jì)算其ED50,評(píng)價(jià)藥效作用強(qiáng)度。所反應(yīng)藥效作用前者強(qiáng),后者弱。鎮(zhèn)痛藥理研究第39頁(yè)3.己被許多學(xué)者所采取一個(gè)操作簡(jiǎn)單、敏感、方便、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠試驗(yàn)方法。4..扭體反應(yīng)代表內(nèi)臟痛(擔(dān)心性病理性疼痛),亦是應(yīng)用最為廣泛內(nèi)臟痛模型之一。無刺激特異性。方法缺乏特異性,一些非鎮(zhèn)痛藥,如中樞抑制劑、阿托品、利多卡因等有抑制扭體反應(yīng),出現(xiàn)假陽(yáng)性(應(yīng)結(jié)合其它測(cè)痛方法),約有8％動(dòng)物不出現(xiàn)扭體反應(yīng)，而且不能在同一個(gè)動(dòng)物上觀察藥品時(shí)效作用。鎮(zhèn)痛藥理研究第40頁(yè)家兔K

離子皮下透入致痛試驗(yàn)(K+paintest)【原理】正常情況下，細(xì)胞膜內(nèi)外K+濃度相差極大。局部組織受損時(shí)，組織釋放K+

為一個(gè)致痛物質(zhì)。當(dāng)K+濃到達(dá)10～15mmol/L時(shí)即可致痛。因?yàn)檩斎腚娏鲝?qiáng)度與K＋透入及其引發(fā)疼痛反應(yīng)呈正比，給藥后電流強(qiáng)度改變直接反應(yīng)受試藥品鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱。當(dāng)在一定強(qiáng)度直流電場(chǎng)作用下，飽和氯化鉀溶液能夠經(jīng)不一樣部位皮膚透入動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生傷害性刺激，引發(fā)動(dòng)物疼痛反應(yīng)，以家兔縮腿，搖頭，掙扎、揚(yáng)爪等反應(yīng)作為痛閾指標(biāo),觀察受試藥品對(duì)家兔痛閾影響。當(dāng)給藥后,家兔上述反應(yīng)消失或減弱。表明受試藥含有鎮(zhèn)痛效應(yīng)。鎮(zhèn)痛藥理研究第41頁(yè)方法

選取體重1.5～2.0千克家兔，雌雄不拘家兔置于固定器中。除去左耳尖部位毛。將浸泡飽和氯化鉀溶液棉球置于耳尖部，把K＋-4型測(cè)痛儀刺激電極置于棉球上并固定好，保持濕潤(rùn)狀態(tài)。無關(guān)電極為針狀電極，插入后腿，并用生理鹽水濕潤(rùn)紗布蓋上。以引發(fā)家兔搖頭或全身掙扎反應(yīng)作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)從通電開始至引發(fā)家兔痛反應(yīng)電流強(qiáng)度（mA數(shù)）作為痛閾值。給藥前測(cè)定痛閾二次，取其mA數(shù)均值作為基礎(chǔ)痛閾值。給藥后60分測(cè)痛，每10分鐘測(cè)痛一次，觀察2小時(shí),計(jì)算給藥后痛閾值提升百分率，與對(duì)照比較,檢驗(yàn)組間電流強(qiáng)度顯著性差異。必要時(shí)可測(cè)定其ED50值。鎮(zhèn)痛藥理研究第42頁(yè)大鼠法:測(cè)痛儀輸出電極(正極)于尾部下1／3處用乳膠管固定,無關(guān)電極用鹽水紗布固定于尾根部，以甩尾(嘶叫、全身掙扎等)反應(yīng)作為疼痛反應(yīng)指標(biāo),統(tǒng)計(jì)甩尾電流強(qiáng)度(mA)作為嘶叫和運(yùn)動(dòng)痛閾，并計(jì)算出鎮(zhèn)痛指數(shù)。因?yàn)殚撾娏髟黾臃磻?yīng)鎮(zhèn)痛藥效應(yīng)強(qiáng)度和有效時(shí)程,與對(duì)照組比較,閾電流增加2倍以上可認(rèn)為藥有鎮(zhèn)痛作用,或計(jì)算其ED50值。若痛閾測(cè)定用固定電流強(qiáng)度,統(tǒng)計(jì)動(dòng)物痛反應(yīng)時(shí)間作為痛閾值,計(jì)算PMAP,以給藥后痛閾值超出基礎(chǔ)痛閾一倍為100%鎮(zhèn)痛。鎮(zhèn)痛藥理研究第43頁(yè)猴試驗(yàn)以縮腿、掙扎為疼痛反應(yīng)指標(biāo)價(jià)昂貴,不宜用于藥品篩選鎮(zhèn)痛藥理研究第44頁(yè)【評(píng)價(jià)】本方法采取K+-4型測(cè)痛儀測(cè)痛,輸入電流強(qiáng)度與K＋透入及其引發(fā)痛反應(yīng)呈正比,閾電流增減反應(yīng)藥品鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱,并能夠同時(shí)觀察其作用時(shí)程。操作方便，靈活、反應(yīng)指標(biāo)明確,直觀統(tǒng)計(jì)，能準(zhǔn)確測(cè)定痛閾值,結(jié)果重現(xiàn)性好,為常見測(cè)痛方法之一。廣泛用于研究鎮(zhèn)痛藥效價(jià)強(qiáng)度和作用時(shí)程。為了深入了解藥品作用方式并找到更適于人治療量,在一個(gè)新化合物試用于臨床前還需要用猴進(jìn)行試驗(yàn)。鎮(zhèn)痛藥理研究第45頁(yè)【注意事項(xiàng)】1.試驗(yàn)必須在12hL/12hD光周期恒溫(22～26oC)、恒濕、平靜光控試驗(yàn)室進(jìn)行,試驗(yàn)前7天將動(dòng)物置于光控室喂養(yǎng)。2.每次試驗(yàn)必須在同一時(shí)間進(jìn)行。3.安放電極耳尖部位必須脫毛,電極必須固定牢，并經(jīng)常見生理鹽水保持濕潤(rùn)狀態(tài)。4.輸入電壓必須穩(wěn)定。5.為了防止損傷，要求最強(qiáng)電流為1．0mA為限。鎮(zhèn)痛藥理研究第46頁(yè)小鼠光輻射熱甩尾法

(tail-flicktest)【原理】小鼠光輻射熱甩尾法也叫光熱甩尾或光照甩尾。是將一束光照射到動(dòng)物尾根1/3處,使鼠尾局部升溫,產(chǎn)生熱刺激,當(dāng)其尾部受到傷害性刺激超出動(dòng)物忍耐痛閾時(shí),動(dòng)物出現(xiàn)顯著甩尾躲避反應(yīng),是一個(gè)脊髓屈曲反射。光輻射熱甩尾是急性傷害性知覺疼痛測(cè)痛方法,反應(yīng)體表痛,疼痛連續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短不。以動(dòng)物甩尾作為痛反應(yīng)指標(biāo),統(tǒng)計(jì)動(dòng)物自光照射開始到甩尾反應(yīng)時(shí)間(潛伏期)作為疼痛閾值。依據(jù)動(dòng)物痛閾值高低改變來判斷藥品鎮(zhèn)痛效應(yīng)。鎮(zhèn)痛藥理研究第47頁(yè)方法小鼠,雌雄兼用,體重18-22g。試驗(yàn)前12小時(shí)禁食,不禁水。把小鼠裝入小鼠固定筒內(nèi)。尾部暴露于外，試驗(yàn)前先用75%乙醇檫凈鼠尾，用黑墨汁涂于尾根部下1/3處作為光刺激點(diǎn)標(biāo)識(shí)。測(cè)痛時(shí)，使小鼠尾光刺激點(diǎn)與YLS-12A鼠尾光照測(cè)痛儀聚光燈燈孔重合,待動(dòng)物平靜后進(jìn)行測(cè)痛，以鼠尾受熱刺激出現(xiàn)甩尾作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)。統(tǒng)計(jì)小鼠從開始光照射到甩尾反應(yīng)潛伏期（TFL,s）作為痛閾值。預(yù)選基礎(chǔ)痛閾5～7秒小鼠供試驗(yàn)用。鎮(zhèn)痛藥理研究第48頁(yè)取合格小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、OT-05B組(26μg、18μg/kg)、嗎啡組(陽(yáng)性藥組,5mg/kg))。每組10只。各組給藥前連續(xù)測(cè)痛2次，取其均值作為給藥前基礎(chǔ)痛閾值。各組肌肉注射給藥后45分測(cè)痛,計(jì)算其均值及痛閾提升百分率,痛閾提升率%。給藥后TFL一基礎(chǔ)TFL痛閾提升率%=-------------------------------X100%

基礎(chǔ)TFL,與對(duì)照組比較,檢驗(yàn)其組間顯著性差異。鎮(zhèn)痛藥理研究第49頁(yè).對(duì)小鼠輻射熱甩尾痛閾值影響組別劑量(X/kg)動(dòng)物數(shù)藥前痛閾值(s)藥后痛閾值(s)痛閾提升%對(duì)照116.8±0.87.1±0.6OT-05B18μg127.3±0.97.9±1.48.2嗎啡5mg137.1±0.613.9±1.5**95.8對(duì)照147.0±0.67.2±0.8Te-05B26μg136.6±1.08.3±1.0*22.7鎮(zhèn)痛藥理研究第50頁(yè)【評(píng)價(jià)】1.熱刺激引發(fā)疼痛與生長(zhǎng)抑素相關(guān)。光輻射熱甩尾法試驗(yàn),是防御性反射，主要在脊髓水平進(jìn)行整合。是一個(gè)脊髓屈曲反射,反應(yīng)體表痛。能夠測(cè)定輕度麻醉動(dòng)物而不受動(dòng)物運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性影響。在試驗(yàn)觀察中,動(dòng)物跑反應(yīng)是大腦控制復(fù)雜現(xiàn)象。甩尾法比熱板法含有優(yōu)越性。但必須引發(fā)注意,本法純粹是一個(gè)脊髓反射,骨骼肌松弛藥可能呈陽(yáng)性結(jié)果。2.適合用于篩選麻醉性鎮(zhèn)痛藥,但對(duì)弱鎮(zhèn)痛藥,如阿斯匹林則出現(xiàn)陰性結(jié)果。鎮(zhèn)痛藥理研究第51頁(yè)3.光輻射熱甩尾法試驗(yàn),終點(diǎn)指標(biāo)直觀、明確,統(tǒng)計(jì)潛伏期準(zhǔn)確。設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,故常見。

4.甩尾反射法只能檢測(cè)簡(jiǎn)單傷害性反射，而不能對(duì)動(dòng)物意識(shí)性或目標(biāo)性反應(yīng)進(jìn)行客觀檢測(cè)。甩尾試驗(yàn)最終行為反應(yīng)也較為復(fù)雜（如舔其后爪）。5.使用動(dòng)物有小鼠、大鼠、,免或豚鼠。常見小鼠或大鼠,以甩尾潛伏期為痛反應(yīng)指標(biāo)。小鼠易得,經(jīng)濟(jì)、便于操作。大鼠每組不少于5只。免照射鼻部或嘴角,以引發(fā)甩頭潛伏期為痛反應(yīng)指標(biāo),每次照射不超出30秒。當(dāng)給藥后痛閾值提升大于基礎(chǔ)痛閾值200%,停頓照射,以200%作為最大值。豚鼠照射背部皮膚,以皮膚或肌肉抽搐顫動(dòng)為痛反指標(biāo)。鎮(zhèn)痛藥理研究第52頁(yè)【注意事項(xiàng)】

1.試驗(yàn)必須在標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)試驗(yàn)動(dòng)物室進(jìn)行,確保試驗(yàn)環(huán)境條件恒定性。確保試驗(yàn)結(jié)果可靠性、重現(xiàn)性。2.試驗(yàn)程序化,分組應(yīng)注意體重、組間痛閾值均勻性、試驗(yàn)時(shí)間一致性(防止時(shí)辰差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響)。鎮(zhèn)痛藥理研究第53頁(yè)3.控制刺激強(qiáng)度(光輻射熱),刺激強(qiáng)度應(yīng)經(jīng)過預(yù)測(cè),強(qiáng)度適當(dāng),用藥前基礎(chǔ)痛閾值非常主要,刺激時(shí)間不宜大長(zhǎng),測(cè)定次數(shù)不宜大多,防止?fàn)C傷尾巴,影響試驗(yàn)結(jié)果。4.為了確保光照射點(diǎn)一致性,應(yīng)用黑墨汁涂于尾端1/3處作為光刺激點(diǎn)標(biāo)識(shí)。同時(shí)增加吸熱度。測(cè)痛時(shí)，必須使小鼠光刺激點(diǎn)與光熱測(cè)痛儀聚光燈燈孔重合,并待動(dòng)物平靜后進(jìn)行。5.鼠尾表面積大,易散熱,尾溫度可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,室溫對(duì)甩尾潛伏期有顯著影響,輕易造成假陽(yáng)性或假陰性,室溫普通為20～22oC。鎮(zhèn)痛藥理研究第54頁(yè)冷板誘發(fā)痛覺超敏【原理】利用4℃金屬冷板作為刺激，誘發(fā)病理性痛模型動(dòng)物出現(xiàn)以抬爪為主要表現(xiàn)痛覺超敏（allodynia）現(xiàn)象，給藥后抬爪次數(shù)改變可直接反應(yīng)受試藥品鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱。鎮(zhèn)痛藥理研究第55頁(yè).L5/L6脊神經(jīng)結(jié)扎模型小鼠建立：選取8周齡雄性C57BL/6小鼠，在烏來糖（1200mg/kg,腹腔注射）麻醉下手術(shù)分離并結(jié)扎小鼠右側(cè)L5和L6脊神經(jīng)制備坐骨神經(jīng)病理性痛模型小鼠。恢復(fù)兩周后進(jìn)行模型篩選，凡是4℃金屬冷板刺激引發(fā)小鼠5分鐘抬足次數(shù)大于10次可視為動(dòng)物模型合格，可用于深入試驗(yàn)鎮(zhèn)痛藥理研究第56頁(yè)試驗(yàn)分組：將制備好坐骨神經(jīng)痛模型小鼠隨機(jī)分為鹽水對(duì)照組，1.0×106U/kg干擾素-α注射組，2.5×106U/kg干擾素-α注射組和5.0×106U/kg干擾素-α注射組。鎮(zhèn)痛藥理研究第57頁(yè)模型小鼠疼痛行為學(xué)測(cè)定：將小鼠放在表面溫度為4±1℃金屬冷板上，并罩在一個(gè)有機(jī)玻璃方盒或玻璃燒杯下，穩(wěn)定5分鐘，待小鼠探究活動(dòng)基礎(chǔ)消失后，利用手控計(jì)數(shù)器單盲法統(tǒng)計(jì)小鼠損傷側(cè)腳掌5分鐘內(nèi)抬足次數(shù)作為基礎(chǔ)痛閾，動(dòng)物因活動(dòng)或體位改變所引發(fā)抬足不計(jì)入內(nèi)。然后將生理鹽水或干擾素-α一次腹腔注射給藥后15分鐘開始測(cè)痛，每隔15分鐘測(cè)痛一次，觀察90分鐘。鎮(zhèn)痛藥理研究第58頁(yè)【評(píng)價(jià)】本方法將試驗(yàn)動(dòng)物放在能夠自由活動(dòng)環(huán)境下進(jìn)行研究，最大程度地降低了人為原因給動(dòng)物造成壓力，且操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)指標(biāo)明確，能夠準(zhǔn)確地反應(yīng)動(dòng)物痛覺行為。為常見測(cè)痛方法之一，廣泛用于研究痛覺行為異常、針刺鎮(zhèn)痛以及藥品對(duì)炎性痛和神經(jīng)病理性痛鎮(zhèn)痛作用。鎮(zhèn)痛藥理研究第59頁(yè)該方法也可經(jīng)過測(cè)量動(dòng)物腳掌在空中停留時(shí)間作為痛覺超敏指標(biāo)，空中停留時(shí)間越短說明動(dòng)物痛閾越高，空中停留時(shí)間越長(zhǎng)說明動(dòng)物痛閾越低。比較給藥前后動(dòng)物腳掌在空中停留時(shí)間改變可判定藥品鎮(zhèn)痛作用。另外，也可利用0--4℃冷水代替冷板進(jìn)行測(cè)定。在直徑20cm玻璃容器中放入，深度約2cm左右0--4℃冷水，將大鼠放入容器中，5分鐘后統(tǒng)計(jì)大鼠在冷水中抬足次數(shù)，統(tǒng)計(jì)時(shí)間為5分鐘。鎮(zhèn)痛藥理研究第60頁(yè)【注意事項(xiàng)】①試驗(yàn)必須在恒溫(22～26℃)、恒濕、平靜隔音試驗(yàn)室進(jìn)行。②每次試驗(yàn)在8:00-18:00進(jìn)行，且最好保持在天天同一時(shí)間段進(jìn)行。③試驗(yàn)前3天開始對(duì)測(cè)試動(dòng)物進(jìn)行冷板刺激，天天1次，每次10分鐘，使動(dòng)物適應(yīng)測(cè)試平臺(tái)并誘發(fā)穩(wěn)定痛覺超敏。鎮(zhèn)痛藥理研究第61頁(yè)④因?yàn)?℃是一個(gè)非傷害性刺激，極少引發(fā)正常大鼠抬足反應(yīng)，所以該方法普通不以正常動(dòng)物作為研究鎮(zhèn)痛藥品受試動(dòng)物。另外，一些神經(jīng)病理性痛動(dòng)物模型，如坐骨神經(jīng)個(gè)別結(jié)扎模型等，往往不表現(xiàn)冷誘發(fā)痛覺超敏現(xiàn)象，所以在利用這些模型研究鎮(zhèn)痛藥品作用時(shí)也不宜采取此方法。鎮(zhèn)痛藥理研究第62頁(yè)丙酮誘發(fā)痛覺超敏

【原理】利用丙酮揮發(fā)過程吸收熱量引發(fā)冷刺激，誘發(fā)動(dòng)物出現(xiàn)以縮足反應(yīng)為主要表現(xiàn)疼痛反應(yīng)，給藥后縮足反應(yīng)次數(shù)或潛伏期改變可直接反應(yīng)受試藥品鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱。鎮(zhèn)痛藥理研究第63頁(yè)方法1．L5/L6脊神經(jīng)結(jié)扎模型大鼠建立：依據(jù)Kim和Chung報(bào)道方法。2．試驗(yàn)分組：將制備好L5/L6脊神經(jīng)結(jié)扎痛模型大鼠隨機(jī)分為鹽水對(duì)照組，2.5mg/kg嗎啡注射組，5.0mg/kg嗎啡注射組和10mg/kg嗎啡注射組。鎮(zhèn)痛藥理研究第64頁(yè)3．模型大鼠疼痛行為學(xué)測(cè)定：將模型大鼠放在金屬網(wǎng)架上，并罩在一個(gè)有機(jī)玻璃方盒內(nèi)，適應(yīng)20分鐘后，利用連接有聚乙烯細(xì)管注射器向模型大鼠腳跟滴一滴丙酮溶液（約20微升），觀察模型大鼠是否出現(xiàn)縮足反應(yīng)。連續(xù)測(cè)量五次（時(shí)間間隔為2分鐘），假如模型大鼠出現(xiàn)縮足反應(yīng)次數(shù)超出三次，則認(rèn)為該動(dòng)物出現(xiàn)了顯著冷誘發(fā)痛覺超敏，以縮足反應(yīng)次數(shù)作為基礎(chǔ)閾值。然后將嗎啡一次皮下注射給藥后30分鐘開始測(cè)痛，每30分鐘測(cè)痛一次，觀察4小時(shí)。鎮(zhèn)痛藥理研究第65頁(yè)【評(píng)價(jià)】本方法采取丙酮誘發(fā)縮足反應(yīng)測(cè)痛，反應(yīng)指標(biāo)明確，可直觀統(tǒng)計(jì)，為常見測(cè)痛方法之一，廣泛用于研究各種鎮(zhèn)痛藥品效價(jià)強(qiáng)度和作用時(shí)程，以及藥品對(duì)炎性痛、癌性痛和神經(jīng)病理性痛鎮(zhèn)痛作用研究。因?yàn)樵摲椒總€(gè)時(shí)間點(diǎn)普通需屢次重復(fù)測(cè)量，操作起來相對(duì)較復(fù)雜。另外，該方法也可經(jīng)過統(tǒng)計(jì)動(dòng)物出現(xiàn)縮足反應(yīng)潛伏期作為痛覺超敏指標(biāo)，測(cè)定5次取其平均值。鎮(zhèn)痛藥理研究第66頁(yè)【注意事項(xiàng)】①試驗(yàn)應(yīng)在室溫(20±1)℃、恒濕、平靜隔音試驗(yàn)室進(jìn)行。②每次試驗(yàn)在8:00-18:00進(jìn)行，且最好保持在天天同一時(shí)間段進(jìn)行。③向動(dòng)物腳掌滴加丙酮時(shí)注意不能觸到動(dòng)物腳掌，以免人為引發(fā)縮足反應(yīng)。④假如同時(shí)進(jìn)行雙側(cè)腳掌痛閾測(cè)定，應(yīng)首先測(cè)定損傷對(duì)側(cè)腳掌。鎮(zhèn)痛藥理研究第67頁(yè)冷誘發(fā)甩尾反射【原理】利用冷水浸尾誘發(fā)動(dòng)物出現(xiàn)以甩尾反射為主要表現(xiàn)疼痛反應(yīng)，給藥后痛閾改變可直接反應(yīng)受試藥品鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)弱。鎮(zhèn)痛藥理研究第68頁(yè)模型大鼠疼痛行為學(xué)測(cè)定首先將各組模型大鼠尾巴浸入0℃冰水中（5cm），統(tǒng)計(jì)大鼠出現(xiàn)甩尾反射潛伏期，重復(fù)測(cè)定3次（時(shí)間間隔為15秒鐘），取其平均值作為基礎(chǔ)痛閾。將藥品一次鞘內(nèi)注射給藥后55分鐘測(cè)定其甩尾反射潛伏期。鎮(zhèn)痛藥理研究第69頁(yè)【評(píng)價(jià)】本方法采取0℃冰水誘發(fā)甩尾反射進(jìn)行測(cè)痛，操作簡(jiǎn)便，無須特殊設(shè)備，反應(yīng)指標(biāo)明確，結(jié)果重現(xiàn)性好，為常見測(cè)痛方法之一，廣泛用于針刺鎮(zhèn)痛以及阿片類鎮(zhèn)痛藥品效價(jià)強(qiáng)度和作用時(shí)程研究。鎮(zhèn)痛藥理研究第70頁(yè)【注意事項(xiàng)】①試驗(yàn)必須在恒溫(22～26℃)、恒濕、平靜隔音試驗(yàn)室進(jìn)行。②每次試驗(yàn)在8:00-18:00進(jìn)行，且最好保持在天天同一時(shí)間段進(jìn)行。③試驗(yàn)前3天開始對(duì)測(cè)試動(dòng)物進(jìn)行冷水浸尾刺激，天天1次，使動(dòng)物適應(yīng)測(cè)試環(huán)境。④動(dòng)物固定最好采取特制動(dòng)物固定器，這么能夠確保每次測(cè)試過程動(dòng)物固定強(qiáng)度一致，降低因手抓力量不一樣所造成結(jié)果差異。⑤每次試驗(yàn)最少重復(fù)三次，取其平均值。鎮(zhèn)痛藥理研究第71頁(yè)電刺激小鼠甩尾法【原理】應(yīng)用恒定電壓或電流參數(shù)經(jīng)皮膚或電極刺激鼠尾出現(xiàn)疼痛反應(yīng),是因?yàn)榕d奮C纖維產(chǎn)生傳入放電引發(fā)疼痛反應(yīng)。以小鼠受刺激后出現(xiàn)甩尾、嘶叫作為痛反應(yīng)指標(biāo),統(tǒng)計(jì)其電壓或電流參數(shù)作為疼痛閾值,依據(jù)給藥前后痛閾改變?cè)u(píng)價(jià)藥品效應(yīng)。鎮(zhèn)痛藥理研究第72頁(yè)分別將小鼠放入小鼠固定器中，每次刺激前均用75％酒精擦洗鼠尾后，再用生理鹽水棉球涂擦小鼠尾根刺激區(qū)以增加皮膚導(dǎo)電性。試驗(yàn)時(shí)將刺激電極(BL一410生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng))放置于小鼠尾根部，進(jìn)行刺激：以程控方式輸出電刺激，刺激電壓依據(jù)預(yù)試驗(yàn)從20V起，間隔2s以步幅

1v遞增刺激電壓強(qiáng)度，至小鼠開始出現(xiàn)掙扎、甩尾或抖尾、撕叫等痛反應(yīng)，此時(shí)電壓值為該鼠痛閾值。鎮(zhèn)痛藥理研究第73頁(yè)先統(tǒng)計(jì)給藥前小鼠出現(xiàn)痛反應(yīng)電壓作為基礎(chǔ)痛閾，隨即各組小鼠分別灌胃給藥1小時(shí)h后，將小鼠放入小鼠同定器中，按同法統(tǒng)計(jì)小鼠出現(xiàn)痛反應(yīng)刺激閾值電壓,電刺激電壓為35V為限，電壓超出35V者均記為35V。按下式計(jì)算痛閾提升百分率。

藥后痛閾均值

-藥前痛閾均值痛閾提升百分率(%)=------------------------------×100%

藥前痛閾均值鎮(zhèn)痛藥理研究第74頁(yè)芎附正天軟膠囊對(duì)電刺激小鼠痛反應(yīng)電壓閾值影響(x±s,n=10)

組別劑量(g/kg給藥前電壓(V)給藥后電壓(V)痛閾提升率(%)溶媒對(duì)照組PEG-400

24.7±1.9526.0±2.875.3阿斯林腸溶片0.1523.2±1.8727.2±2.3917.2芎附正天軟膠囊1.025.5±1.6529.1±3.41*14.1芎附正天軟膠囊0.525.8±2.6629.5±3.63*14.3芎附正天軟膠囊0.2524.9±1.6027.4±2.4110.0

[L1]鎮(zhèn)痛藥理研究第75頁(yè)【評(píng)價(jià)】電刺激鼠尾-嘶叫法是對(duì)組織施加短暫可逃避傷害性刺激，造成一個(gè)時(shí)相性急性疼痛，稱為急性試驗(yàn)痛。反應(yīng)體表痛。疼痛連續(xù)時(shí)間也長(zhǎng)短不一。普通認(rèn)為動(dòng)物嘶叫整合中樞包括高位腦干(如中腦)，能反應(yīng)強(qiáng)、弱、鎮(zhèn)痛藥品效應(yīng),但機(jī)體組織阻抗不易控制,敏感性不高,反應(yīng)與動(dòng)物種族、品系、年紀(jì)、性別及基礎(chǔ)閾值等原因相關(guān)。因?yàn)楸痉ㄓ蟹瓷湫栽?臨床無鎮(zhèn)痛作用藥品可能呈陽(yáng)性反應(yīng)。不如機(jī)械刺激試驗(yàn)方法嚴(yán)謹(jǐn)。設(shè)備簡(jiǎn)單,痛反應(yīng)指標(biāo)明確,直觀統(tǒng)計(jì),方法可靠、重現(xiàn)性好。鎮(zhèn)痛藥理研究第76頁(yè)【注意事項(xiàng)】1.電刺激鼠尾致痛法個(gè)體差異較大,應(yīng)預(yù)選合格小鼠供試驗(yàn)。于鼠尾刺激部位涂上薄層導(dǎo)電膠,以增加導(dǎo)電性能。2.電(方波)刺激是生理藥理最常見試驗(yàn)方法之一,而刺激儀功效強(qiáng)弱、方波設(shè)定范圍寬窄、波形好壞、使用方便是否往往是試驗(yàn)成敗關(guān)鍵。3.刺激參數(shù)文件報(bào)道不一。,必須經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定最正確刺激參數(shù)。鎮(zhèn)痛藥理研究第77頁(yè)角叉菜膠誘發(fā)大鼠炎痛模型【原理】外周傷害性信息傳人可造成痛及痛過敏。大鼠右后掌足跖部皮下注射后角叉菜膠后，動(dòng)物出現(xiàn)早期痛反應(yīng)和隨即痛覺過敏,表現(xiàn)為局部快速腫脹，動(dòng)物出現(xiàn)重復(fù)抬腿，舔足、搖動(dòng)后掌，后掌抬離盒底等自發(fā)痛行為。伴隨炎癥介質(zhì)釋放，加強(qiáng)炎癥,也增加對(duì)疼痛敏感性，降低痛閾值，產(chǎn)生痛敏，對(duì)熱刺激耐受性下降等。表明射角叉菜膠后，動(dòng)物出現(xiàn)了炎性痛與痛過敏。伴隨這些行為改變及注射局部炎癥反應(yīng)，從3小時(shí)開始可連續(xù)到24小時(shí)。局部炎癥反應(yīng)于24小時(shí)達(dá)高峰，之后自發(fā)痛行為自行消失。由此誘發(fā)大鼠炎痛模型，用于鎮(zhèn)痛藥研究。鎮(zhèn)痛藥理研究第78頁(yè)【評(píng)價(jià)】注射角叉菜膠已用于制備各種組織炎癥模型。角叉菜膠皮下注射后3-24小時(shí)，大鼠處于一個(gè)穩(wěn)定痛敏狀態(tài)，便于觀察藥效及作用時(shí)程。致炎大鼠分早期時(shí)相（2-6小時(shí)）和晚期時(shí)相（15-24小時(shí)）都表現(xiàn)為痛覺過敏。早期時(shí)相是因?yàn)橹車舾幸l(fā)，而晚期時(shí)相是中樞敏感引發(fā)。早期時(shí)相和晚期時(shí)相比較明確，是研究炎癥痛雙時(shí)相常見模型。己用于鎮(zhèn)痛藥作用效應(yīng)、中樞和外周鎮(zhèn)痛藥評(píng)價(jià)研究。鎮(zhèn)痛藥理研究第79頁(yè)【注意事項(xiàng)】1.角叉菜膠穩(wěn)定性強(qiáng)，在中性和堿性溶液中也很穩(wěn)定，即使加熱也不水解，但酸性溶液中比較輕易發(fā)生酸水解作用,尤其是Ph4以下時(shí)。2.為了取得穩(wěn)定、可靠測(cè)定結(jié)果,試驗(yàn)室溫在20～25℃，環(huán)境平靜,防止光線干擾。調(diào)整輻射熱強(qiáng)度,使之恒定于一定水平,基礎(chǔ)痛閾在8～15秒，超出20秒終止照射,以防止損傷后腳掌皮膚組織。每次輻射熱照射部位應(yīng)保持一致(預(yù)先標(biāo)定光斑落點(diǎn)范圍)。間隔時(shí)間要相對(duì)恒定。鎮(zhèn)痛藥理研究第80頁(yè)福爾馬林試驗(yàn)【原理】將福爾馬林注射于大鼠后爪皮下，可提供一個(gè)連續(xù)傷害性刺激，從而激發(fā)一個(gè)顯著、彌散、長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)痛行為反應(yīng)，即回縮或震搖及舔咬注射足現(xiàn)象，可模擬人類損傷后疼痛一些特征。將福爾馬林溶液注射入大鼠一側(cè)足底皮下后產(chǎn)生兩個(gè)截然分開疼痛時(shí)相，馬上誘發(fā)出一連續(xù)0-5分鐘自發(fā)縮足反射期（第1相）、抬足和舔足行為反應(yīng)，然后是15-20分鐘靜止期（靜止相），隨即又出現(xiàn)20-40分鐘連續(xù)反應(yīng)期（第2相），傷害性反射行為連續(xù)1小時(shí)左右停頓。鎮(zhèn)痛藥理研究第81頁(yè)方法給藥后,用微量注射器于小鼠后足底皮下注射2%福爾馬林溶液6μl/只，馬上把小鼠放入離試驗(yàn)臺(tái)10cm高處玻璃板上平底大燒杯，在燒杯下置一傾斜30度左右大鏡子,從鏡面上觀察小鼠痛反應(yīng)，以小鼠注射福爾馬林后舔足反應(yīng)作為痛反應(yīng)指標(biāo)(為福爾馬林直接刺激神經(jīng)引發(fā)疼痛反應(yīng)）。統(tǒng)計(jì)0—5分小鼠累積舔