HE制片質(zhì)量控制-影響HE切片質(zhì)量的主要因素

病理檢驗(yàn)技術(shù)

常規(guī)組織病理技術(shù)HE制片質(zhì)量控制影響HE切片質(zhì)量的主要因素影響HE切片質(zhì)量的主要因素組織處理和包埋切片染色影響HE切片質(zhì)量的主要因素組織處理和包埋

1.固定要及時(shí)組織固定是制片的關(guān)鍵，組織固定的好壞，決定以后制片的各個(gè)環(huán)節(jié)。一般采用10%的甲醛液(實(shí)際含甲醛4%)，如能采用10%的中性緩沖甲醛液固定則更好。固定時(shí)所加10%甲醛的體積應(yīng)為組織體積的10～20倍。巨大組織須切成小片固定，大小約22mm×22mm，厚2～3mm的組織塊進(jìn)行脫水。

影響HE切片質(zhì)量的主要因素組織處理和包埋

2.脫水要徹底常用乙醇脫水，由低濃度逐級(jí)至高濃度，逐步置換組織內(nèi)的水分。

注：低濃度乙醇時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，至無(wú)水乙醇時(shí)則要掌握恰當(dāng)時(shí)間，一般是2～3小時(shí)，穿刺小組織僅需30～40分鐘，并采用Ⅱ級(jí)或Ⅲ級(jí)無(wú)水乙醇。

3.透明宜充分透明劑多采用二甲苯，透明時(shí)間依據(jù)組織的大小和厚薄，一般組織約需60～90分鐘，穿刺小組織15～25分鐘，并采用Ⅱ級(jí)或Ⅲ級(jí)二甲苯。組織呈透明狀。影響HE切片質(zhì)量的主要因素組織處理和包埋

4.浸蠟需足夠浸蠟常用純凈熔點(diǎn)稍低的石蠟，可采用Ⅱ級(jí)或Ⅲ級(jí)，以盡量清除二甲苯。開始一級(jí)用熔點(diǎn)較低石蠟，最后一級(jí)用熔點(diǎn)較高石蠟或包埋石蠟。浸蠟時(shí)間依據(jù)組織大小和厚薄而定，一般為2～3小時(shí)。注：浸蠟時(shí)恒溫箱或自動(dòng)脫水機(jī)蠟缸內(nèi)的溫度應(yīng)比所用石蠟熔點(diǎn)稍高些，以保持石蠟恰在熔化狀態(tài)；在浸蠟期間溫度一定要恒定。

影響HE切片質(zhì)量的主要因素組織處理和包埋5.包埋應(yīng)恰當(dāng)包埋時(shí)，包埋石蠟的溫度要比組織浸蠟高4～6℃，否則包埋冷凝后組織與石蠟易分離。包埋時(shí)把組織最大最平切面或所需的病灶切面向下置入包埋模具。對(duì)皮膚、胃腸管道和囊壁等層次清楚的組織，包埋后其切面應(yīng)包含有各層組織、對(duì)子宮刮出物的內(nèi)膜小組織，應(yīng)盡可能包埋在同一平面上以利全部切出。影響HE切片質(zhì)量的主要因素切片

1.切片要切出薄而平整的蠟帶,關(guān)鍵在切片刀。一次性刀片要鋒利度，否則應(yīng)適時(shí)更換新刀片。如用切片刀一定要研磨鋒利。其次，第一次切片時(shí)，要轉(zhuǎn)動(dòng)刀座上的弧形刻度盤，邊切邊選取最合適的切片刻度。此刻度即相當(dāng)于余隙角2°～4°，在此范圍內(nèi)，才能切出良好的蠟片。記住此切片刻度，以后如用同類型的一次性刀片或切片刀，就無(wú)須再調(diào)校。切片前要把切片機(jī)上有關(guān)的各螺旋擰緊。影響HE切片質(zhì)量的主要因素切片2.攤片要平整無(wú)皺折蠟片移置恒溫貼片盆內(nèi)展開，使整張蠟片平整無(wú)皺，蠟片光面向下。恒溫貼片盆的內(nèi)壁和底面應(yīng)黑色，其水溫應(yīng)根據(jù)所用包埋石蠟的熔點(diǎn)調(diào)節(jié)在40～46℃。攤片時(shí)水盆一定要清潔，避免造成組織污染。

3.貼片時(shí)要注意“定點(diǎn)”和“定向”要把組織蠟片撈至載玻片的適宜位置，即注意“定點(diǎn)”和“定向”。貼片后提起玻片時(shí),要把玻片一角接觸一下水面，以帶走多余的水分，否則玻片上留存的水分，可使已“定點(diǎn)”和“定向”的組織蠟片移位，偶或在組織蠟片上留下一個(gè)圓形的水跡。影響HE切片質(zhì)量的主要因素切片

4.把握烤片溫度和時(shí)間貼片完畢，立即置入電熱烤片箱內(nèi)烤片，烤片箱內(nèi)溫度應(yīng)調(diào)至60～65℃，烤片時(shí)間約30～60分鐘，也可置于電熱板上烤片，使組織蠟片上的蠟呈熔化的狀態(tài)，這樣蠟片可牢固地粘貼于載玻片或蓋玻片上。影響HE切片質(zhì)量的主要因素染色

1.切片脫蠟要于凈脫蠟不全的組織切片，染色后組織和細(xì)胞模糊不清，如霧中觀花。脫蠟劑用二甲苯，實(shí)行Ⅱ級(jí)脫蠟。一般脫蠟時(shí)間約10～20分鐘。

2.蘇木精染液要配好蘇木精染液配制關(guān)鍵在氧化。如氧化汞作為氧化劑的蘇木精染液，每次染色之前必須過濾或用紙把液面的氧化膜拖走，以免污染切片?，F(xiàn)在多用碘酸鈉作為氧化劑來配制蘇木精染液。不同蘇木精液的染色時(shí)間為5～20分鐘。日常使用的蘇木精液要定期過濾；根據(jù)每天染片量的多少，應(yīng)每周或隔周更換一次新液。影響HE切片質(zhì)量的主要因素染色3.鹽酸乙醇分化要適度分化是一個(gè)重要環(huán)節(jié)，分化時(shí)間一般為2～3秒，蘇木精液染色后若不分化或分化不足，組織著染過深胞核境界不清晰；若分化過度，胞核過淡不清楚。若用Mayer蘇木精液，通常都不需要分化。

4.分化后要充分水洗流水沖洗一般要15～30分鐘。目的：一方面蘇木精液染胞核，經(jīng)酸分化后胞核呈棕紅色，通過流水沖洗洗去切片上的酸，使蘇木精色淀重新形成胞核重顯藍(lán)色。另一方面分化后切片留有酸液，易使切片褪色。影響HE切片質(zhì)量的主要因素染色

5.伊紅染色要適宜伊紅水溶液的染色時(shí)間約2～5分鐘。伊紅是作為藍(lán)染胞核的對(duì)比染色，染色要適當(dāng)。每200ml伊紅液加1滴冰醋酸可起促染作用，如加酸太多，可使伊紅液沉淀而慢慢失效。6.切片脫水、透明要徹底

HE染色后，還要經(jīng)無(wú)水乙醇和二甲苯徹底脫水透明。切片脫水要經(jīng)過多次無(wú)水乙醇才轉(zhuǎn)入二甲苯透明。影響HE切片質(zhì)量的主要因素染色

7.封膠要中性,濃度要適中樹膠受熱或放置時(shí)間過長(zhǎng)，因氧化而變酸，用酸性的樹膠封片可使染片褪色。樹膠過濃，封片時(shí)易導(dǎo)致氣