淋巴細胞亞群檢測的臨床應(yīng)用-山西省人民醫(yī)院

淋巴細胞亞群檢測的臨床應(yīng)用檢驗科梁紅萍2012-52021/10/101主要內(nèi)容為何要檢測“淋巴細胞亞群”？何時檢測？如何解讀？如何應(yīng)用？（腫瘤、自身免疫、感染、兒科）案例分析標本要求2021/10/102為何要檢測“淋巴細胞亞群”？2021/10/103關(guān)鍵詞：免疫（拉丁文，免…)免疫基本功能:識別自己與非己---》動態(tài)平衡

免疫系統(tǒng)：由免疫器官、免疫細胞及免疫分子組成，遍布全身、相互制約的網(wǎng)絡(luò)免疫相關(guān)疾?。簯?yīng)答過高:變態(tài)反應(yīng)(過敏性疾病,四型)不平衡:應(yīng)答不足:感染、腫瘤、放射病、血液病、免疫缺損癥自身組織應(yīng)答：自身免疫疾病（SLE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）

2021/10/104免疫應(yīng)答類型：二種

1、固有性免疫應(yīng)答：識別多種病原體的共有成分（多糖），非特異性應(yīng)答。

機械性防御機制：皮膚、粘膜（口腔、呼吸道、消化道、泌尿）；

體液免疫機制：補體系統(tǒng)；急性相蛋白（CRP等）；吞噬細胞（單核-巨噬細胞、粒細胞）；NK（腫瘤、病毒感染細胞、異源）；ADCC。感染早期數(shù)分或96h內(nèi)執(zhí)行防衛(wèi)。

2、適應(yīng)性免疫應(yīng)答：識別特異的病原體，特異性應(yīng)答

T及B淋巴細胞，感染后4-5天對識別的病原體進行殺傷清除，發(fā)生在固有性免疫應(yīng)答之后。B淋巴細胞針對細胞外的細菌病原體，引發(fā)吞噬作用，介導(dǎo)體液免疫T淋巴細胞抵抗細胞內(nèi)復(fù)制的病原體（病毒、結(jié)核菌），介導(dǎo)細胞免疫2021/10/105T細胞與B細胞系統(tǒng)的特性(共性：產(chǎn)生記憶細胞）T細胞系統(tǒng)（cellmediatedmmunity,CMI)B細胞系統(tǒng)(humoralimmunity)-介導(dǎo)細胞免疫，自身分化效應(yīng)細胞-來源于胸腺-巨噬細胞處理后的抗原識別-分兩大類：細胞毒性T細胞（cytotoxicTcells,CTL)和調(diào)節(jié)T細胞（regulatoryTcells,Treg),Treg=輔助性T細胞Th+抑制性T細胞Ts-Th:識別特異性抗原,正反饋免疫調(diào)節(jié)；Th=Th1+Th2+Th0-Ts:負反饋免疫調(diào)節(jié)；-CTL：殺傷表達特異抗原的靶細胞，如病毒、結(jié)核菌等感染的靶細胞或腫瘤細胞-T細胞活化先天性免疫系統(tǒng)的防御機制，如巨噬細胞-Th1(IFN-α)-介導(dǎo)體液免疫，經(jīng)Ab執(zhí)行免疫功能-來源于骨髓-識別天然蛋白質(zhì)抗原-增殖時需要T輔助細胞Th的刺激-分化成漿細胞-合成抗原特異性抗體-發(fā)揮抗獨特型抗體的免疫調(diào)節(jié)-防御細胞外病原體(細菌)，以抗體介導(dǎo)，促使巨噬細胞和補體系統(tǒng)活化，ADCC-Th2(IL-4,IL-5)2021/10/106何時檢測“淋巴細胞亞群”？評價免疫功能（血常規(guī)、Ig、補體、淋巴細胞亞群）

術(shù)前；新生兒篩查（原發(fā)性免疫缺陷?。?；

體檢診斷免疫相關(guān)疾病（如HIV初篩有反應(yīng)時）免疫治療療效觀察出現(xiàn)免疫功能低下癥狀時檢測1、經(jīng)常感到疲勞；2、經(jīng)常感冒；3、傷口容易感染；4、腸胃功能下降；自身保護能力差；5、易受到傳染病的侵襲；6、精神萎靡；7、易昏睡8、愛做夢（惡夢）9、身心憔悴2021/10/107Sheeperythrocyterosetter(E-rosettes)forT-cells2021/10/108Surfaceimmunoglobulin(sIg)forB-cells2021/10/109Surfaceimmunoglobulin(sIg)forB-cells流式細胞儀檢測原理2021/10/10102021/10/1011流式細胞術(shù)的特點流式細胞術(shù)：利用流式細胞儀對處于快速流動的細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速的定量分析及分選的技術(shù)流式細胞術(shù)=細胞熒光化學(xué)技術(shù)+單克隆抗體技術(shù)+激光技術(shù)+流體力學(xué)+光電測量技術(shù)+計算機技術(shù)測量速度快：最快可在1秒種內(nèi)檢測上萬個細胞可進行多參數(shù)測量：可以對同一個細胞做有關(guān)物理、化學(xué)特性的多參數(shù)測量具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義：提供細胞群體的均值和分布情況高分辨率(CV<2%)、高靈敏度(熒光檢測靈敏度≤100MESF，前向角散射光檢測靈敏度(0.2～0.5um)既是細胞分析技術(shù)，又是精確的分選技術(shù)，分選純度可達99%以上2021/10/1012流式細胞術(shù)的應(yīng)用使得過去應(yīng)用E-玫瑰花結(jié)試驗或EAC-花環(huán)試驗檢測T或B淋巴細胞成為歷史應(yīng)用抗CD（clusterofdifferentiation,CD)單抗將免疫細胞區(qū)分得更細、更科學(xué)、更能描述免疫細胞的機能狀態(tài)由于流式細胞儀將靜態(tài)的、顯微鏡下肉眼觀察改為動態(tài)的、計算機信號處理，因此，在流式細胞儀上T細胞亞群統(tǒng)計方式已從傳統(tǒng)的熒光顯微鏡下計數(shù)200個細胞成為幾秒鐘內(nèi)計數(shù)上萬個，因此，結(jié)果更真實、更具有統(tǒng)計意義。2021/10/1013淋巴細胞亞群流式術(shù)的基本內(nèi)容熒光染料標記的單克隆抗體與淋巴細胞表面的抗原結(jié)合，結(jié)合多色熒光分析，即可以把各種不同功能的淋巴亞群區(qū)分開來，進而得到各亞群的相對比例。淋巴細胞為CD45陽性，顆粒度較低的一群細胞淋巴細胞主要分為T淋巴細胞（CD3+）、B淋巴細胞（CD19+）和NK細胞（CD16+56+）T淋巴細胞又分為Thelper/Tinducer（CD3+CD4+），(ThCD29+

/TiCD45RA+)、Tsuppressor/Tcytotoxic（CD3+CD8+）(TsCD28-/TcCD28+)2021/10/10142021/10/1015如何解讀“淋巴細胞亞群”報告2021/10/1016解讀原則：1、綜合判斷，

CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+：初步評估機體免疫狀態(tài)，快速便利2、結(jié)合血常規(guī)結(jié)果，同時關(guān)注百分比和絕對數(shù)3、當(dāng)CD4+/CD8+比例倒置時，一定要確認是CD4+細胞絕對數(shù)降低，還是CD8+細胞絕對數(shù)增加所致，兩種情況的臨床意義不同4、（CD3+%）+（CD19+%）+（CD16/56+%）=100%±5%，如相差過于懸殊，臨床具有一定提示意義。研究表明感染和血液腫瘤最易出現(xiàn)等式嚴重偏離2021/10/10175、NK細胞：

天然免疫系統(tǒng)的一個重要組成部分，約占外周血單核細胞的15-30%，可通過非MHC性限制性途徑識別并在多數(shù)情況下殺傷被病毒感染細胞。HIV感染時，與CD4+T細胞計數(shù)相關(guān)NK細胞的抗腫瘤免疫比T細胞的抗腫瘤免疫更重要

不明原因流產(chǎn)患者：NK細胞數(shù)量與早孕組相比明顯減少6、避免將細胞表面標志和功能間的聯(lián)系絕對化，原因：6.1CD4+T細胞又分為Th1和Th2,Th1主要介導(dǎo)細胞免疫和炎癥反應(yīng)，涉及抗病毒、抗胞內(nèi)寄生菌和移植物排斥；Th2主要參于B細胞增殖、抗體產(chǎn)生和超敏反應(yīng)性疾病。同時兩者互為抑制，它們在免疫調(diào)節(jié)中互相拮抗，起著十分微妙的作用6.2己有研究表明確實存在CD4+殺傷T細胞，因而不能說CD4+T細胞一定發(fā)揮上調(diào)作用

解讀原則：2021/10/10187、隨著現(xiàn)代免疫學(xué)的發(fā)展，對T細胞表面標志及其生物學(xué)作用的分子機制有了更深入的認識。鑒于T細胞功能亞群的傳統(tǒng)分類已不能反映真實情況，有必要淡化所謂輔助性T細胞/抑制性T細胞等的概念。實際上，無論是CD4+T細胞或CD8+T細胞，均包括可發(fā)揮正、負調(diào)節(jié)（即輔助或抑制）作用的功能亞群。8、與時俱進解讀原則：2021/10/1019臨床應(yīng)用2021/10/1020原發(fā)性免疫缺陷?。夯颊哐毫馨图毎庖弑硇涂沙霈F(xiàn)多種異常。如嚴重聯(lián)合免疫缺陷病（SCID）時，T淋巴細胞缺乏；X連鎖無丙種球蛋白血癥，B淋巴細胞數(shù)量缺乏或減少。HIV感染和AIDS：CD4+T淋巴細胞是HIV感染的主要細胞。CD4+T淋巴細胞計數(shù)用于評價HIV感染后免疫系統(tǒng)受損的程度。CD4+T細胞：下降

CD8+T細胞：HIV感染早期增高，發(fā)展為AIDS時下降

NK細胞：降低，特別是疾病晚期免疫缺陷病2021/10/1021

淋巴細胞數(shù)量減低，部分患者表現(xiàn)出與AIDS和部分晚期腫瘤患者相似的免疫功能狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)：

SARS患者淋巴細胞及其各亞群均受到破壞，以T細胞受損為主，而且CD4細胞比CD8細胞受損更為嚴重。治療后病情好轉(zhuǎn)或治愈后，T淋巴細胞數(shù)量可逐漸恢復(fù)正常。SARS2021/10/1022活動期SLE患者外周血CD16＋CD56＋細胞百分率明顯降低SLE、強直性脊柱炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血CD4＋細胞百分率顯著降低，CD8+細胞百分率顯著升高，CD4＋/CD8比值降低或倒置。治療后患者CD4＋細胞明顯增加，CD8+細胞顯著降低，CD4＋/CD8+比值顯著升高。SLE患者活動期和非活動期的淋巴細胞亞群結(jié)果有顯著差異強直性脊柱炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者活動期和非活動期的淋巴細胞亞群結(jié)果無顯著差異自身免疫疾病2021/10/1023

干細胞移植后免疫系統(tǒng)將重建，但是極為緩慢。NK細胞首先開始升高，隨后T、B淋巴細胞開始恢復(fù)。CD4+比CD8+重建更晚。倒置CD4+/CD8+兩年才能逆轉(zhuǎn)。造血干細胞移植后重建2021/10/1024排斥反應(yīng)和免疫抑制劑治療監(jiān)測。CD4/CD8低于0.2,則停止使用免疫抑制劑；若CD4/CD8過高，則提示容易發(fā)生排斥反應(yīng)器官移植后免疫監(jiān)測2021/10/1025惡性腫瘤治療前CD3+細胞數(shù)量、CD4+/CD8+細胞比值降低，化療或放療有效時則可逐漸恢復(fù)或達到正常水平。癌轉(zhuǎn)移時，CD3、CD4明顯減少，CD8明顯增多，CD4/CD8明顯減少腫瘤終末期CD4/CD8比值，可預(yù)測患者存活期實體腫瘤療效觀察2021/10/1026病毒性感染的重要標志1、艾滋病：免疫功能普遍低下是艾滋病患者最明顯的特征。CD4+細胞顯著低于正常對照組，而CD8+細胞正常，CD4+/CD8+比值下降。2、慢性乙肝患者：CD3、CD4、CD8均下降，CD4/CD8正常，表明患者T細胞輔助性、殺傷性功能下降，引起病毒清除困難，導(dǎo)致慢性遷延性肝損傷；3、慢活肝、肝硬化患者：CD3、CD4下降，CD8增高，CD4/CD8下降，患者免疫自穩(wěn)功能下降，從而引起自身免疫損傷，肝細胞持續(xù)性、大量損傷；4、傳染性單核細胞增多癥、巨細胞病毒感染、流行性出血熱、麻疹急性期、水痘、猩紅熱和一些上呼吸道感染患者均可表現(xiàn)CD4下降、CD8升高能及CD4/CD8比值下降。2021/10/1027牛皮癬牛皮癬患者血液中T淋巴細胞各亞群的數(shù)量常無明顯的差別但患者皮膚病變的部位浸潤淋巴細胞卻以輔助/誘導(dǎo)性T細胞（TH）占優(yōu)勢2021/10/1028案例分析

2021/10/10291、邢某，男，左上肺癌

2010年1月15日入院檢測：

CD3CD4CD8BNK51%20%26%12%21%

2010年3月22日出院檢測：

CD3CD4CD8BNK55%27%24%11%18%2021/10/10301、邢某，男，左上肺癌

2010年1月15日入院檢測：

CD3CD4CD8BNK51%20%26%12%21%

2010年3月22日出院檢測：

CD3CD4CD8BNK55%27%24%11%18%2021/10/10312、曹某，男，胃癌

2010年3月24日入院檢測：

CD3CD4CD8BNK43%30%15%4%29%

2010年4月23日治療后檢測：

CD3CD4CD8BNK53%35%21%4%31%2021/10/10323、唐某，男，慢淋

2010年8月25日入院檢測：

CD3CD4CD8BNK17%6%9%79%4%

2010年9月21日治療后檢測：

CD3CD4CD8BNK53%17%34%36%9%2010年10月25日治療后監(jiān)測：

CD3CD4CD8BNK80%14%60%13%10%2021/10/1033淋巴細胞亞群的新指標2021/10/1034需要進一步細分的淋巴細胞亞群Thelper/Tinducer（CD3+CD4+），(ThCD29+

/TiCD45RA+)Tsuppressor/Tcytotoxic（CD3+CD8+）(TsCD28-/TcCD28+)2021/10/1035根據(jù)T淋巴細胞分泌細胞因子的不同還可將CD4+、CD8+分為：CD4+：Th1:CD4+IFNr+Th2:CD4+IL+Th0:CD4+IFNr+IL+CD8+：Tc1:CD8+IFNr+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD4+IFNr+IL4+2021/10/1036調(diào)節(jié)性T細胞（regulatoryT,Treg):淋巴細胞亞群中的新成員。是一群具有負調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)的淋巴細胞。通常起著維持自身耐受和避免免疫反應(yīng)過渡損傷機體的重要作用也參與腫瘤細胞逃避機體免疫監(jiān)視和慢性感染。誘導(dǎo)產(chǎn)生的細胞：

1、TR1細胞：以分泌IL-10為特征，負調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。2、TH3細胞：最早在口腔耐受性動物模型中發(fā)現(xiàn)，以分泌轉(zhuǎn)化生長因子beta（TGF-beta）作為其功能性細胞激素。研究顯示可能與