中藥制劑檢測(cè)技術(shù)第五章含量測(cè)定

第五章中藥制劑的含量測(cè)定

（ContentDetermination）概述一、含量測(cè)定的定義和意義

中藥制劑的含量測(cè)定是指用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法或儀器分析方法對(duì)制劑中某種（些）有效成分或有效部位進(jìn)行的定量分析。并以其測(cè)定結(jié)果是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來(lái)判斷藥品的優(yōu)劣，是控制和評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要方法。二、含量測(cè)定方法

中藥制劑含量測(cè)定的方法包括化學(xué)分析法和儀器分析法兩大類(lèi)。由于中藥制劑組成復(fù)雜，儀器分析法更為常用?！吨袊?guó)藥典》中藥制劑含量測(cè)定方法概況見(jiàn)下表。本章重點(diǎn)介紹浸出物測(cè)定法、揮發(fā)油測(cè)定法、分光光度法、TLCS、HPLC和GC等。方法總數(shù)修訂新增刪除HPLC339302820TLC3231212GC233190分光光度法18039滴定法13030重量法5011氮測(cè)定法5110揮發(fā)油測(cè)定法3001浸出物測(cè)定法13121總計(jì)4563732723儀器分析法化學(xué)分析法第一節(jié)浸出物測(cè)定法（DeterminationofExtractive）一、定義

浸出物測(cè)定法系根據(jù)制劑中化學(xué)成分的溶解性，選擇適當(dāng)?shù)娜軇┙?提取)樣品，并測(cè)定浸出物（提取物）的含量，以此來(lái)控制藥品的質(zhì)量。二、意義

這是一種較為粗略的定量分析方法。但對(duì)于有效成分不明確或無(wú)法建立確切的定量分析方法的中藥材及其制劑，尚具有一定的意義?！吨袊?guó)藥典》附錄收載了三種測(cè)定方法：水溶性浸出物測(cè)定法、醇溶性浸出物測(cè)定法和揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法。有的品種還采用了乙酸乙酯浸出物測(cè)定法?！吨袊?guó)藥典》收載的中成藥浸出物測(cè)定品種及其規(guī)定見(jiàn)表4-18。供試品需粉碎，使能通過(guò)二號(hào)篩，并混合均勻。類(lèi)別品名溶劑方法限度（%）醇溶性浸出物測(cè)定七厘散乙醇熱浸法≥60.0刺五加浸膏甲醇熱浸法≥60.0刺五加片甲醇熱浸法≥80mg/片兒康寧糖漿正丁醇

≥3.0獨(dú)一味膠囊正丁醇

≥8.0鼻竇炎口服液正丁醇

≥1.2揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定午時(shí)茶顆粒乙醚

≥0.35沉香化氣丸乙醚

≥0.40

乙醚

≥0.10九味羌活丸乙醚

≥0.30龜齡集乙醚

≥0.25水浸出物測(cè)定暑癥片

冷浸法≥25.0乙酸乙脂浸出物測(cè)定

三、水溶性浸出物測(cè)定法

本法系以水為溶劑，對(duì)制劑中水溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量(%)。本法包括冷浸法和熱浸法。后者適用于不含或少含淀粉、粘液質(zhì)等成分的樣品。1．冷浸法取供試品約4g，稱(chēng)定重量，置250~300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取濾液20ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱(chēng)定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（W/W%）。含量（W/W%）=×100%mi為水溶性浸出物重量（g） ms為干燥供試品的重量（g）=供試品重量×（1﹣含水量%)）2.熱浸法(中成藥較少用自學(xué))3.實(shí)例暑癥片的水溶性浸出物測(cè)定（P128）mi×10020×ms四、醇溶性浸出物測(cè)定法本法系以甲醇、乙醇或正丁醇為溶劑，提取藥品中相應(yīng)的醇溶性成分，并計(jì)算其含量（%）。正丁醇浸出物測(cè)定法主要用于含較多皂苷類(lèi)成分的制劑，更具專(zhuān)屬性。

1.甲醇、乙醇浸出物的測(cè)定

照水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定。

2.正丁醇浸出物的測(cè)定

按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法測(cè)定。一般說(shuō)來(lái)，水溶液制劑可直接用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干，置105℃干燥3小時(shí)，移置干燥皿中，冷卻30分鐘，迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算供試品中正丁醇浸出物的含量（W/V%）。固體制劑可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取數(shù)次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，稱(chēng)定浸出物重量，計(jì)算出制劑中正丁醇浸出物的含量（W/W%）。

3.注意事項(xiàng)（1）回流加熱乙醚須在水浴上進(jìn)行。（2）蒸發(fā)皿中揮去乙醚須在室溫下風(fēng)櫥中進(jìn)行。（3）加熱揮去浸出物中揮發(fā)性成分時(shí)，應(yīng)緩緩加熱至105℃4.實(shí)例（1）兒康寧糖漿正丁醇浸出物的測(cè)定（2）刺五加浸膏的甲醇浸出物測(cè)定五、揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法本法以乙醚為溶劑，對(duì)制劑中揮發(fā)性醚溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量（W/W%）。本法主要用于含揮發(fā)性成分較多的制劑，專(zhuān)屬性較強(qiáng)。

1.測(cè)定法

取供試品（過(guò)四號(hào)篩）2~5g，置五氧化二磷干燥器中，干燥12小時(shí)，精密稱(chēng)定重量（ms）,置索氏提取器中，加乙醚適量，除另有規(guī)定外，加熱回流提取8小時(shí)，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放置，揮去乙醚，殘?jiān)梦逖趸赘稍锲髦?，干?8小時(shí)，精密稱(chēng)定（m1），緩緩加熱至105℃，并于105℃干燥至恒重（m2）。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量（m1-m2）。計(jì)算，即得。含量（W/W%）=×100%msm1-m22.實(shí)例

九味羌活丸的揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定本品由羌活、防風(fēng)、蒼術(shù)、細(xì)辛、川芎、白芷、黃芩、甘草、地黃等九味中藥組成，其主要有效成分為揮發(fā)油，故測(cè)定其中揮發(fā)性醚浸出物的含量。第二節(jié)揮發(fā)油測(cè)定法（DeterminationofVolatileOil）一、意義

某些藥品中的主要有效成分為揮發(fā)油，故《中國(guó)藥典》收載了揮發(fā)油測(cè)定法，采用水蒸氣蒸餾法對(duì)藥品中揮發(fā)油總量進(jìn)行測(cè)定，以控制藥品質(zhì)量。例如，正骨水、牡荊油膠丸、保婦康栓和滿(mǎn)山紅油滴丸等中揮發(fā)油的測(cè)定。二、測(cè)定原理

首先利用揮發(fā)油的揮發(fā)性用水蒸氣蒸餾法將其提取完全；再利用其較強(qiáng)的親脂性與水不相溶而分層，即可讀取油的總量并求算出含量。三、揮發(fā)油測(cè)定裝置（圖）四、測(cè)定方法

供試品需粉碎后過(guò)二號(hào)至三號(hào)篩，混勻再測(cè)定。1.甲法

本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取供試品適量（約相當(dāng)于揮發(fā)油0.5ml～1.0ml），稱(chēng)重（準(zhǔn)至0.01g），置燒瓶中，加水300ml～500ml（或適量）與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿(mǎn)揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5小時(shí)，至測(cè)定器中油量不再增加，放置片刻，開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線(xiàn)上面5mm處為止。放置1小時(shí)以上，再開(kāi)啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線(xiàn)平齊，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算即得。2.乙法

本法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以上的揮發(fā)油。取水約300ml與玻璃珠數(shù)粒，置燒瓶中，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿(mǎn)刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后連接回流冷凝管。將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。然后照甲法自“取供試品適量”起，依法測(cè)定，自油層中減去二甲苯量，即為揮發(fā)油量，計(jì)算即得。五、含量計(jì)算

含量（V/W％）=×100%含量（V/W％）=×100%

含量（V/W％）=×100%揮發(fā)油體積（ml）樣品體積（ml）樣品重量（g）揮發(fā)油密度（g/ml）VOWSWSVO×DOVSVOVOWSDOVS第三節(jié)可見(jiàn)-紫外分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）

一、定義

根據(jù)被測(cè)物質(zhì)在可見(jiàn)-紫外光的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的方法稱(chēng)可見(jiàn)-紫外分光光度法。

紫外分光光度計(jì)工作原理紫外吸收光譜圖二、特點(diǎn)

本法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，常用于中成藥含測(cè)。但本法不具分離功能，常用于總成分的測(cè)定。三、定量分析的理論基礎(chǔ)

朗伯比爾定律

A=KCLA為吸收度K為吸收系數(shù)C為溶液濃度L為溶液厚度四、藥典收載了三種測(cè)定方法1.吸收系數(shù)法僅用于UV,不需對(duì)照品。2.對(duì)照品比較法主要用于Vis,需用對(duì)照品。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法主要用于Vis,需用對(duì)照品。（原計(jì)算分光光度法取消）第四節(jié)割薄層掃魂描法（Th對(duì)in壺Laye句rC蝕hrom取atog哪raph描yS科can蛙TLC咸S）一、定義薄層掃姑描法（析TLC無(wú)S）系待指用一途定波長(zhǎng)聲的光照艦射在薄枕層板上僅，對(duì)薄智層色譜殊中有紫倦外或可粒見(jiàn)吸收壞的斑點(diǎn)朝或經(jīng)照桑射能激歡發(fā)產(chǎn)生缸熒光的具斑點(diǎn)進(jìn)嘗行掃描壯，將掃汽描得到陶的圖譜失及積分鑒值用于孔藥品定聽(tīng)性定量至分析的傲方法。二、特點(diǎn)具有分肚離分析澇雙重功憑能。與略高效液考相色譜墻法比較吃，具有爬多通道軋效應(yīng)，漏可同時(shí)株平行分代離分析欄多個(gè)樣粥品；流口動(dòng)相用弄量少且書(shū)選擇范百?lài)鷮?、做更換方售便；固雕定相為思一次性賄使用，如對(duì)樣品扒的預(yù)處棍理要求巷不高等肥優(yōu)點(diǎn)。且目前隨德著制板流、點(diǎn)樣仿、展開(kāi)章等操作魯?shù)膬x器享化及儀閉器性能仁的改進(jìn)辛，該法桌檢測(cè)的貴靈敏度窩，結(jié)果器的精密鳳度與準(zhǔn)知確度均晝大大提限高，在奴中藥及嫩其制劑剩檢驗(yàn)中盲，已成都為重要狹的分析鞋方法。放《中國(guó)吃藥典》均中有3弟2個(gè)中臘成藥品閑種采用川該法進(jìn)糊行含量板測(cè)定。三、儀花器及其嫌工作原匹理1.薄用層掃描民儀中國(guó)藥典每采用雙波長(zhǎng)薄層掃描招儀。常用米的有島津暈CS-9命30型和任CAMA密G-Ⅱ型喬等。2.掃感描儀工暴作原理3.測(cè)定尺方式（1）吸音收法適用于侵有紫外檔（可見(jiàn)流）吸收細(xì)的成分繭，較常部用。該傅法又可境采用反葉射法或通透射法斧測(cè)定。蹲理論上暢講，透彼射法比顧反射法崇優(yōu)越，春但實(shí)際須工作中巨常用反步射法，末因?yàn)樽涎夤獠粷衬芡ㄟ^(guò)溜玻板。（2）掩熒光法適用于有弊熒光性質(zhì)厘的成分，車(chē)?yán)缧￠蘧諌A等。該涂法僅采用餃反射法測(cè)伶定，其靈牢敏度比吸構(gòu)收法高。4.測(cè)定許波長(zhǎng)（1）層單波長(zhǎng)一般用夜于熒光海測(cè)定法傘，即用稀某一波前長(zhǎng)的紫乒外光（售激發(fā)光倘）進(jìn)行沒(méi)掃描。牲對(duì)玻板虛和斑點(diǎn)災(zāi)的質(zhì)量矮要求較意高。（2）雙奸波長(zhǎng)主要用堅(jiān)于吸收已測(cè)定法客。該法蠅可消除藍(lán)背景干北擾，對(duì)爆玻板和沒(méi)斑點(diǎn)的圍質(zhì)量要似求不高熄，故較喪常用。踏測(cè)定時(shí)罵，樣品恩波長(zhǎng)（λs）佩和參比鏟波長(zhǎng)（廚λR）疼依次掃補(bǔ)描斑點(diǎn)紡，所測(cè)脖吸收度杠為ΔA=Aλs－AλR樣品波省長(zhǎng)（λs）恢：即被繡測(cè)成分遣的λm轟ax參比波長(zhǎng)匯（λR）驢：即被測(cè)弓成分的λ畝min或?yàn)I此波長(zhǎng)處膀無(wú)吸收。5.光寶束掃描虹方式（1）直瘋線(xiàn)掃描適用于爛規(guī)則的撕斑點(diǎn)，嫌僅用于拐熒光測(cè)班定法。（2）鋸元齒掃描適用于不雁規(guī)則的斑興點(diǎn)，測(cè)量呆誤差小，您被測(cè)成分毒積分值重系現(xiàn)性好，違故吸收測(cè)總定法常用斬此掃描方弓式。6.光源（1）控鎢燈（圍W）供可見(jiàn)光養(yǎng)（350忠～800初nm）測(cè)伶定，掃描誼有色成分貌的斑點(diǎn)。（2）峰氘燈（應(yīng)D2）供紫外光若（200寺～400剝nm）測(cè)松定，掃描病有紫外吸緊收的成分豎斑點(diǎn)。（3）賢氙燈（杯Xe）供熒光眉測(cè)定，姐發(fā)射不莖連續(xù)光荒譜，常障用波長(zhǎng)板為36棗5nm靈。四、含透量測(cè)定傘方法（乎外標(biāo)法撈）TLC翁S含量妻測(cè)定有外標(biāo)法蛋和內(nèi)標(biāo)纖法，中國(guó)盲藥典僅難采用外標(biāo)法。1.原付理外標(biāo)法披系將一仙定量的驢供試品耀溶液和稱(chēng)對(duì)照品臘溶液分園別點(diǎn)加布在同一產(chǎn)塊薄層凝板上，抱展開(kāi)，腦顯色，芝定位，跨掃描被盾測(cè)成分字和對(duì)照煤品斑點(diǎn)游，測(cè)得豆相應(yīng)的布吸收度怖或熒光均強(qiáng)度積桶分值，騾根據(jù)定誕量關(guān)系帶，計(jì)算伶出被測(cè)羽成分的部含量。2.類(lèi)量型根據(jù)對(duì)滴照品標(biāo)撕準(zhǔn)曲線(xiàn)涂性質(zhì)的額不同，宰外標(biāo)法盛又分為菌外標(biāo)一均點(diǎn)法和贊外標(biāo)兩珠點(diǎn)法。若標(biāo)準(zhǔn)選曲線(xiàn)通治過(guò)原點(diǎn)導(dǎo)，采用隔外標(biāo)一婆點(diǎn)法。若標(biāo)準(zhǔn)竭曲線(xiàn)不梅通過(guò)原每點(diǎn)，采悠用外標(biāo)打兩點(diǎn)法寄。外標(biāo)一米點(diǎn)法的蜜直線(xiàn)方己程：C=抖FA掀F為斜率飲外標(biāo)兩點(diǎn)栽法的直線(xiàn)嫂方程：、F1為斜率F2為截距3.操作色步驟（1）代對(duì)照品兩溶液的雨制備（2）猶供試品患溶液的昨制備（3）點(diǎn)霉樣一般要求射使用市售尿薄層板。①外標(biāo)一甩點(diǎn)法：至少錢(qián)6個(gè)原六點(diǎn)對(duì)照品建（R）支2個(gè)（妙同一質(zhì)欺量）：省2R供試品置（S）暢4個(gè)（種同一質(zhì)蓋量）分泛2組：督2S12S2②外標(biāo)兩勾點(diǎn)法：至少8重個(gè)原點(diǎn)對(duì)照品（墓R）4個(gè)咳分2組滔大質(zhì)恐量的2個(gè)死：2R1小質(zhì)量鋼的2個(gè)坐：2R2供試品槍?zhuān)⊿）龜4個(gè)（慌同一質(zhì)副量）分?jǐn)?組：愿2續(xù)S12S2對(duì)照品與棗供試品應(yīng)墓交叉點(diǎn)加拘在同一塊俊薄層板上重，目的在恭于消除各撇種誤差。纖測(cè)定時(shí)應(yīng)冒保證供試肅品原點(diǎn)的基量在線(xiàn)性沉范圍內(nèi)，曉必要時(shí)可踏適當(dāng)調(diào)整愁供試品溶揭液的點(diǎn)樣勤量。外標(biāo)兩顛點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)懶法（4）展殖開(kāi)（5）嘩顯色定冶位供試品撫色譜中閱待測(cè)斑夫點(diǎn)的比鼓移值（疑Rf值南）和光紡譜掃描醒得到的新吸收光資譜最大嬌吸收與蛛最小吸叔收應(yīng)與紙對(duì)照品選相符，羅以保證犬測(cè)定結(jié)傷果的準(zhǔn)累確性。（6）掃稀描應(yīng)沿展開(kāi)方踐向掃描，不得橫向掃描。（7）含饒量計(jì)算①外標(biāo)紡一點(diǎn)法▲求出供辮試品被測(cè)幻玉成分（斑徹點(diǎn)）的質(zhì)躺量Ms=MR

XAsARMs被測(cè)煉成分的質(zhì)迫量（M活n=2）MR被測(cè)對(duì)壘照品的援質(zhì)量As被測(cè)社成分吸收緒度（熒光接強(qiáng)度）積燭分值（A胸n=2惱）AR被測(cè)對(duì)照牙品吸收度破（熒光強(qiáng)監(jiān)度）積分圓值（A榨n=2）____▲求出拴供試品找中被測(cè)炎成分的晉含量含量（湖W/W革）=MsX劑稀釋茶倍數(shù)取樣量含量（伸W/片田）=MsX香稀釋倍數(shù)曾X平時(shí)均片重取樣量②外標(biāo)田兩點(diǎn)法▲求出供鴨試品斑點(diǎn)備中被測(cè)成歷分的質(zhì)量Ms=?C+V1C(V2-V1)(悔A-A1)(A2-A1)Ms被測(cè)胡成分的質(zhì)努量（mg醋n=2述）A1對(duì)照品丸小點(diǎn)樣嗚量吸收棚度V1對(duì)照品鋪小點(diǎn)樣吳量（μl）句（熒耳光強(qiáng)度）這積分值（浴An=話(huà)2）V2對(duì)照品掛大點(diǎn)樣神量（μl）A2對(duì)照品大撤點(diǎn)樣（熒潤(rùn)光強(qiáng)度）A被測(cè)各成分吸額收度（請(qǐng)熒光強(qiáng)油度）伶積皺分值（亭An咳=2）積分值瓦（A甩n=2盤(pán)）輩C對(duì)照級(jí)液的濃沙度（m汁g/m擁l）---__五、應(yīng)巧用實(shí)例1.九瞞分散中暈士的寧余的含量嘆測(cè)定九分散是受由馬錢(qián)子爹粉、麻黃齡、乳香和妻沒(méi)藥等制記成。馬錢(qián)步子粉中含稱(chēng)有士的寧蜓、番木鱉糞堿等生物備堿，具生謎理活性但宴也有毒性拘，故需控搬制馬錢(qián)子蟻含量。中漫國(guó)藥典規(guī)跳定按干燥榨品計(jì)每包齊含馬錢(qián)子躬以士的寧尺計(jì)應(yīng)為4芽.5～5耐.5mg潑。供試品頃溶液的落制備取本品1青0包，混突合研勻。韻精密稱(chēng)取錫2g置具按塞錐形瓶啟中，精密貌加氯仿2寨0ml與消濃氨試液魂1ml，蹤蝶輕輕搖勻牽，稱(chēng)重，換于室溫下格放置24建小時(shí)，再弱稱(chēng)重，補(bǔ)寨足氯仿減示失的重量來(lái)，充分振資搖，濾過(guò)縮慧。精密量談取濾液1寫(xiě)0ml，確用硫酸溶照液（3→天300）幸分次提取醋，至生物清堿提盡，賓合并硫酸亭液，置另并一分液漏昏斗中，加紹濃氨試液瓜使呈堿性義，用氯仿扯分次提取趁，合并氯都仿液，蒸還干，放冷垮，殘?jiān)袘c精密加氯授仿5ml佛使溶解，聯(lián)作為供試形品溶液。對(duì)照品溶快液的制備取士的疑寧對(duì)照冤品，加畫(huà)氯仿制擺成每1仙ml含肌0.4痕mg的湯溶液，尼作為對(duì)郵照品溶兇液。測(cè)定法吸取上雪述兩種妙溶液各每5μl，分別罷點(diǎn)于同一祝硅膠GF公254薄蠻層板上，法以甲苯-非丙酮-乙茄醇-濃氨絡(luò)試液。（暑16∶1啦2∶1∶狂4）的上起層溶液為道展開(kāi)劑，赴展開(kāi)，取蝕出，晾干做。照薄層團(tuán)色譜法進(jìn)遍行掃描，希波長(zhǎng)：λs=2搬54n寸m，λR=32譯5nm椒，測(cè)栽量供試君品吸收緣瑞度積分罪值與對(duì)纏照品吸虹收度積奮分值，屠計(jì)算，跟即得。遞已知：磨AR＝196扔63.0臣7，A訓(xùn)s＝20攔617.嗽25，取究樣量2.減098g躍。解答問(wèn)題①采用煩外標(biāo)一肉點(diǎn)法還三是外標(biāo)串兩點(diǎn)法迎？②采用什撞么方法顯坊色定位？③計(jì)算每膚包藥品中喜馬錢(qián)子的控含量。（史保留兩位嬸有效數(shù)字亂）①求出供試煉品斑點(diǎn)中棚士的寧的燥質(zhì)量②求出供腔試品中率士的寧久的含量Ms=MRX隙=替5μlx0.4μg/μlx=2.戒1μgAsAR196剛63.婆072061鳴7.25含量（m哨g/包）=MsX稀釋倍蝴數(shù)X標(biāo)示重量取樣量=0.00蹈21mgX5mlX20mlX2.5習(xí)g/包0.0竹05m殖lX才10巨ml孟X2帝.09翅8g=5.0（mg/煩包）2.枳際實(shí)導(dǎo)滯神丸中橙角皮苷的乘含量測(cè)脖定本品系由年枳實(shí)、大靜黃和黃連獻(xiàn)等八味藥祥材制成的另水丸。中環(huán)國(guó)藥典規(guī)握定按干燥磚品計(jì)算，音每1g含存枳實(shí)以橙特皮苷（C28H34O15）計(jì)惱，不得漢少于2記0.0逝mg。供試品丙溶液的血制備取本品粉隊(duì)末（過(guò)三箱號(hào)篩）約稅0.5g組，精密稱(chēng)畢定（0.推5124議g），置閘索氏提取貪器中，加遭甲醇90喊ml，加節(jié)熱回流4存小時(shí)，季趁熱濾過(guò)搖至100利ml量祖瓶中，用棟少量甲醇蘿洗滌容器覽，洗液與層濾液合并洞，放冷，當(dāng)加甲醇至筐刻度，搖農(nóng)勻，精密汗量取5m期l，置屋25ml樣量瓶中，翻加甲醇至烤刻度，搖衫勻，作為討供試品溶撇液。對(duì)照品服溶液的劃制備精密稱(chēng)取則橙皮苷對(duì)降照品，加盆甲醇制成稻每1ml愉含0.鈴05mg師的溶液，科作為對(duì)照依品溶液。測(cè)定法精密吸取轉(zhuǎn)供試品溶辯液5?、謝對(duì)照品溶派液2?傲與5掠?，分諸別點(diǎn)于同窮一聚酰胺怎薄膜上，鼓以甲醇為井展開(kāi)劑，林展開(kāi)，展世距約3c堤m，取梳出，晾干香，噴以另1％三氯奇化鋁的甲及醇溶液，參放置3熊小時(shí)，在窮紫外光燈折(365協(xié)nm)他下定位。持上機(jī)進(jìn)行軍熒光掃描光，激發(fā)波對(duì)長(zhǎng)：33計(jì)0nm歲,線(xiàn)性?huà)哓溍瑁瑴y(cè)量哨供試品與誼對(duì)照品熒秒光強(qiáng)度的搬積分值（朽AR(2毒?)歡=885善.7厚AR(光5?)哄=97富9.4輸AS=8非35.6伴），計(jì)算恢，即得。★①聚員酰胺T嚷LC分重離黃酮閥類(lèi)成分筐效果較初好故選土之。②橙皮苷嘩與AlC首l3反應(yīng)顯捆色，在鏟330蹤蝶nm紫掀外光下域發(fā)射較電強(qiáng)的綠歇色熒光惑（波長(zhǎng)雀：50圾0nm糾）?；卮饐?wèn)虹題：①本法論采用的莖是吸收撒測(cè)定法童還是熒司光測(cè)定拔法？外閱標(biāo)一點(diǎn)慢法還是濕外標(biāo)兩逼點(diǎn)法？交透射法鹽還是反賣(mài)射法？狡直線(xiàn)掃雁描還是創(chuàng)鋸齒掃持描？光弄源是什拼么？②求算枳柔實(shí)（橙皮鄙苷）的含桂量（保留身三位有效礦數(shù)字），捏并判斷是窯否符合藥渣典規(guī)定。(V2-V1)(碼A-A1)(A2-A1)①求算出惜斑點(diǎn)中橙猶皮苷的質(zhì)勸量Ms=舅?C央+V1C=?0.05砌mg/m糾l+2ul?0.05仙mg/m界l(97勤9.4－885.錘7)(5ul－2ul)貢(83形5.6－885.耀7)=0.01衛(wèi)98ug質(zhì)(1.9艇8X10mg)②求算出鴉枳實(shí)（橙未皮苷）在習(xí)藥品中的廉含量含量（mg/雅g）=MsX稀釋倍數(shù)取樣量=-51.98X10mgX2餐.5垃X1財(cái)0u播lX綿1.敬0X岔10尾ul-5555ulX5咬X繪10漁ul吹X0砍.51滋24g3=38.鉛6第五節(jié)高效液鄙相色譜吸法（Hig監(jiān)hP緣瑞erf杏orm鴨anc螺eL鄰iqu防id滾Chr羽oma尿tog身rap督h欲HPL辯C）一、定義以高壓芽液體為泛流動(dòng)相埋的液相撇色譜分豆析法稱(chēng)業(yè)為高效多液相色便譜法。二、特點(diǎn)高分辨以，高靈謊敏，快濾速，適妖用范圍跨寬，自全動(dòng)化程仆度高。特別適合子中藥的定烈性定量分毯析，《中貸國(guó)藥典》膝中大多含數(shù)中攝成藥的含誕量測(cè)定采胳用此法。三、類(lèi)型按原理分炒類(lèi)主要有殼：①鍵合相卻HPLC正相鍵懸合相H敵PLC儉少爽用反相鍵歸合相H鋒PLC側(cè)最常用然十八烷徹基鍵合邊固定相光(C提18或珍ODS奶)常用唉甲醇-蛋水、乙糾腈-水蓮作為流斜動(dòng)相②吸附H搜PLC③離子生交換HP腰LC④凝膠過(guò)攤濾HPL獵C⑤親和H閘PLC⑥膠束H勻PLC⑦手性H熄PLC四、色譜莊儀及其工核作原理（喊P圖）1.高效后液相色譜匆儀一般由桶高壓輸鋪液泵、夸進(jìn)樣閥第、色譜尤柱、檢朝測(cè)器和慶數(shù)據(jù)處棗理系統(tǒng)蠅或色譜簡(jiǎn)工作站皺組成。2.工作卵原理系用高哥壓泵將未流動(dòng)相鞭泵入裝憑有填充頂劑的色蠢譜柱，雹通過(guò)進(jìn)辣樣閥注附入樣品算溶液，閃流動(dòng)相鼻攜帶樣病品進(jìn)入司色譜柱粒進(jìn)行分光離，被碼分離成啄分依次棒進(jìn)入檢忍測(cè)器，河轉(zhuǎn)變成倡相應(yīng)的鎮(zhèn)電信號(hào)澆，由數(shù)娛據(jù)處理漿系統(tǒng)或隱色譜工爆作站進(jìn)況行處理跪而得到迷分析結(jié)飽果。二、含量并測(cè)定方法切（外標(biāo)法鑄）內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法藥物分析摔大多采用城此法1.系旁統(tǒng)適應(yīng)剝性試驗(yàn)包括色譜舉柱的理論岸板數(shù)、分視離度、重副復(fù)性和拖搖尾因子等摩四個(gè)指標(biāo)截。其中分旦離度和重注復(fù)性更具廊實(shí)用意義繼。系統(tǒng)適疏應(yīng)性試旅驗(yàn)即用拼各品種蘇項(xiàng)下規(guī)割定的對(duì)攏照品和閑條件對(duì)健色譜系篩統(tǒng)進(jìn)行踏試驗(yàn)，跌應(yīng)符合犁要求。稍否則可殲對(duì)色譜芹分離條貪件作適意當(dāng)?shù)恼{(diào)尺整。（1）賽色譜柱餓的理論活板數(shù)（汁n）考限察柱效在選定的廉條件下，俗注入供試較品溶液或券各品種項(xiàng)斥下規(guī)定的逼對(duì)照物質(zhì)滋溶液，記待錄色譜圖藝，量出供矛試品主成仆分或內(nèi)標(biāo)斥物質(zhì)峰的坊保留時(shí)間留tR（以羊分鐘或長(zhǎng)抵度計(jì)，下蟲(chóng)同,但應(yīng)乖取相同單出位）和半附高峰寬(Wh/2),按扇下式計(jì)室算色譜茶柱的理耳論板數(shù)塵。如果費(fèi)測(cè)得理領(lǐng)論板數(shù)先低于各票品種項(xiàng)邁下規(guī)定仔的最小理論末板數(shù)，價(jià)應(yīng)改變旬色譜柱的丘某些條澇件（如浪柱長(zhǎng)、載汪體性能沖、色譜傻柱充填軌的優(yōu)劣逼等），碎使理論板氧數(shù)達(dá)到倘要求。（2）剪分離度乳（R）哨考磁察分離絞效果在規(guī)定為的條件微下，注科入對(duì)照爸液或供釀試液，縮慧記錄色滲譜圖，子按下式邊計(jì)算待坦測(cè)峰（妄定量峰穿）與相尤鄰峰的侄分離度自。除另孕有規(guī)定喊，分離唯度應(yīng)大耐于1.蒜5。（3）重剪復(fù)性機(jī)考察測(cè)孕量的精密侮度在規(guī)定條遺件下，取濾一定量的體對(duì)照液，讀連續(xù)進(jìn)樣升3～5次皺，除另有飾規(guī)定外，旬其峰面積筑測(cè)量值的學(xué)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)混偏差（R概SD）應(yīng)進(jìn)不大于2.0縫％。（4）解拖尾因啊子（T勺）考察色譜仿峰的對(duì)稱(chēng)但性，保證列測(cè)量的準(zhǔn)確度。特別是犯采用峰高碌法測(cè)量時(shí)密，應(yīng)檢查丸待測(cè)峰的紋T是否符外合規(guī)定。業(yè)除另有規(guī)此定外，T俱應(yīng)在0.95蹲～1.0紙5之間。式中:W0.0終5h為0.攻05峰肆高處的燈峰寬；d1為峰極災(zāi)大至峰蠻前沿之膠間的距道離。2.對(duì)照疏品溶液的甜制備3.供試姜品溶液的瘦制備4.測(cè)定李法將上述富兩種溶茄液分別轎注入色勤譜儀，靈記錄色寶譜圖，敘按下式層計(jì)算被關(guān)測(cè)成分垂的含量匠。（1）求讓出供試液悼中被測(cè)成舞分的濃度C供（2）逮求出藥帽品中被社測(cè)成分產(chǎn)的含量C供＝C對(duì)A對(duì)A供C供X稀于釋倍數(shù)含量（W欣/W）＝取樣量三、應(yīng)陰用實(shí)例1.牛肌黃解毒凳片中黃煩芩的含視量測(cè)定本品由牛善黃、大黃即、黃芩、膠冰片、石課膏等八味級(jí)中藥制成淘。中國(guó)藥葵典以黃芩苷為指標(biāo)，秋采用HP日LC測(cè)定森其中黃芩邀的含量。（1）烏色譜條嘗件與系羨統(tǒng)適應(yīng)題性試驗(yàn)固定相：淋用十八烷裂基硅烷鍵明合硅膠；流動(dòng)相硬：甲醇招-水-磷酸（45廈∶55碰∶0.2），流僚速1m饅l/m熟in；檢測(cè)器艙：紫外緞檢測(cè)器思，檢測(cè)森波長(zhǎng)為宏315稱(chēng)nm；遮理論塔敵板數(shù)按震黃芩苷如峰計(jì)算狹應(yīng)不低素于30賣(mài)00。（2）對(duì)們照品溶液拒制備精密稱(chēng)款取在6測(cè)0℃減燥壓干燥型4小時(shí)適的黃芩喝苷對(duì)照蘿品適量星，以甲代醇溶解悶配成每或1ml樸中含3年1.2合μg的旦對(duì)照品躺溶液。（3）宗供試品緊溶液制慚備取牛黃棋解毒片扔20片悟，剝?nèi)デ烟且?，扭精密稱(chēng)哀定（6壘.25壯4g）滋，研細(xì)熔，精密斥稱(chēng)取1寫(xiě).04露5g訴，加7糧0%乙頭醇30掏ml，宣超聲處匠理20販分鐘，支放冷，夸濾過(guò)，脖濾液置策50m跨l量瓶挑中，用徑少量7昌0%乙服醇分次期洗滌容源器和殘?jiān)踉?，洗瘡液濾于什同一量衛(wèi)瓶中，逃加70切%乙醇睬至刻度眠，搖勻深，即得隊(duì)。（4）無(wú)測(cè)定法分別精及密吸取段對(duì)照品勤溶液與柄供試品啊溶液各駐10μ駛l進(jìn)樣炒，測(cè)得倒對(duì)照品正及供試最品中黃果芩苷的南峰面積頃分別為A供＝43搖404念41，A對(duì)＝394駱5856捆。【解答卷】①采用細(xì)的是外籌標(biāo)法還血是內(nèi)標(biāo)山法？②流動(dòng)相灶中為什么但要加入少貴量磷酸？③計(jì)算匯黃芩苷冰的含量架（?；萘魞晌恍钣行?shù)久字）。求算供礙試液中順黃芩苷松的濃度3945856=31.2(μg/ml)×=34.3(μg/ml)4340441▲求算藥原品中黃謊芩苷的烈含量黃芩苷（嗽mg/片裁）=C供×稀釋每倍數(shù)×歪平均片潮重取樣量=34.襯3（μ譯g/m印l）×郵10古×5販0ml特×31糠2.7婆mg/片104基5mg=0.掘51-32.藿香季正氣水中功厚樸酚與杜和厚樸酚掙總量的測(cè)照定本品由曉蒼術(shù)、英陳皮、恐厚樸（煎姜制）效、白芷睡等十味降中藥制牽成的液鳴體制劑昨，每支企裝10傭ml（瓶標(biāo)示裝狀量）。撇其中厚燒樸為要晝藥之一域，故《鴉中國(guó)藥伴典》采咸用HP夫LC，娘以厚樸到酚及和單厚樸酚竭的總量益為指標(biāo)子，控制爬厚樸的牽含量。（1）由色譜條籮件與系雁統(tǒng)適用臭性試驗(yàn)用十八烷打基硅烷鍵襲合硅膠為殘?zhí)畛鋭豢偧状?乙嗓腈-水（密50:2拴0:40妄）為流動(dòng)唐相；檢測(cè)該波長(zhǎng)29辰4nm。儀理論板數(shù)羊按厚樸酚殖峰計(jì)算應(yīng)玻不低于5圣000。（2）對(duì)繼照品溶液應(yīng)的制備取厚樸資酚、和棉厚樸酚膝對(duì)照品剛適量，設(shè)精密稱(chēng)望定，分蹲別加甲顆醇制成距每1m灰l含厚嗽樸酚0朝.2m罩g、和憲厚樸酚大0.1嘗mg的德溶液，資搖勻，革即得。（3）供許試品溶液統(tǒng)的制備精密量誦取裝量細(xì)項(xiàng)下的購(gòu)本品5古ml，背加鹽酸隆2滴，飽用氯仿?tīng)N振搖提晃取3次厚，每次疫10m襲l，合仔并氯仿濾液，蒸茅干，殘緒渣用甲旱醇溶解愁并精密橋稀釋至凳10m壺l，精盾密量取耍5ml茅，置1庫(kù)0ml翠量瓶中奧，加甲樂(lè)醇至刻膀度，搖略勻，即紋得。（4）磁測(cè)定法精密吸取寨上述三種昆溶液各1廚0μl，賤分別注入拋液相色譜險(xiǎn)儀測(cè)定，煩根據(jù)對(duì)照泊品的峰面呼積（AR厚AR和）以及供找試品中被哨測(cè)成分的裁峰面積（砍AS厚AS和）計(jì)算營(yíng)厚樸的接含量。煩本品每腎支含厚堂樸以厚鎖樸酚（C18H18O2）及和乖厚樸酚股（C18H18O2）的總遵量計(jì)，敏不得少助于5.硬8mg盈。2.和厚獄樸酚穿3.厚說(shuō)樸酚鑰5.6召.其他成纏分峰混合對(duì)師照品.捐和厚驅(qū)樸酚艦厚樸哨酚辟樣海品【解答】①采用的珍是外標(biāo)法被還是內(nèi)標(biāo)漿法？②為救什么要酸籮化樣品溶閥液，再用但氯仿萃取??？③計(jì)算血厚樸的含納量（保兵留兩位有撇效字）?！竞寇浻?jì)算】①分別劣求算供試造液中厚樸姨酚及和厚競(jìng)樸酚的濃喉度（mg展/ml）②分別求盾算藥品中辜厚樸酚及滅和厚樸酚錦的含量（報(bào)mg/支充）③求算暫厚樸酚崖及和厚舅樸酚的總量（參考習(xí)且題集第六尸章第37梨題紙三黃螞片中大黃堂的含量測(cè)息定）C對(duì)為厚即樸酚或須和厚樸萬(wàn)酚對(duì)照沸溶液的頭濃度；A供為供試控品中厚樸爺酚或和厚踐樸酚的峰易面積；A對(duì)為對(duì)照佩品厚樸酚獲或和厚樸勻酚的峰面簡(jiǎn)積。含量（脫mg/饅支）＝5ml取×5冤ml耍（取陜樣量）C供mg/莖ml竟×10吊ml厲×1貼0ml印×標(biāo)示裝棒量ml/支四、安全佛操作注意飾事項(xiàng)1.流動(dòng)貨相需用微姓孔濾膜（港0.45芝μm）濾己過(guò)并脫氣膜才可使用夸。2.開(kāi)混泵后，覺(jué)先打開(kāi)鎮(zhèn)沖洗鍵黃（PU抹RGE劇）進(jìn)行揭泵排氣灣。然后部將流動(dòng)匠相接入弦色譜柱娃充分沖態(tài)洗平衡變，待基害線(xiàn)穩(wěn)定布后方可常進(jìn)樣。3.測(cè)試燥溶液需用潑微孔濾膜造（0.4喘5μm）塵濾過(guò)。4.使第用鍵合譜硅膠柱放，流動(dòng)賄相的P早H值應(yīng)松控制在泳2～8毒，否則專(zhuān)色譜柱炭很容易誕損壞。5.由于掏C18鏈碼在水相環(huán)肆境中不易煮保持伸展繩狀態(tài)，故專(zhuān)對(duì)于使用金C18柱聚的反相色職譜系統(tǒng)，祥流動(dòng)相中葬有機(jī)溶劑熱的比例通慨常應(yīng)不低妙于5％。甘否則C1隨8鏈的隨車(chē)機(jī)卷曲將彼導(dǎo)致組分若保留值的后改變，造打成色譜系損統(tǒng)的不穩(wěn)襪定。6.工作鑒完畢，應(yīng)葬先后用水桶和甲醇充門(mén)分沖洗液吸路系統(tǒng)，閃尤其是使容用了含鹽論的流動(dòng)相多，更應(yīng)充儀分沖洗。第六節(jié)勿氣群相色譜留法（Ga酒s黑Ch厚rom妹ato肉gra為phy走GC）一、定義以氣體為是流動(dòng)相（牢亦稱(chēng)載氣橋）的色譜盛分析法稱(chēng)曠氣相色譜倡法（GC追）。二、特點(diǎn)分離效能匹高、選擇巖性好、靈咱敏度高、揀分析速度耗快等。在摩主要用于現(xiàn)中藥制劑長(zhǎng)中揮發(fā)油痕及其他揮捷發(fā)性組分致的含量測(cè)焦定，還可散用于水分議、乙醇量黨的測(cè)定。成但本法也膠存在一定鵝局限性，漆它對(duì)揮發(fā)半性差或遇岔熱易分解鳥(niǎo)破壞的物辣質(zhì)難以分歇析。三、分類(lèi)1.按固舅定相狀態(tài)凝分類(lèi)：氣村固GC、征氣液GC2.按桃分離原饞理分類(lèi)呢：吸附妥GC、刮分配G樹(shù)C3.按頑色譜柱萍分類(lèi)：甚填充柱故GC、半毛細(xì)管座柱GC翅（質(zhì)分辨率寺高（n伍>10沿）常簡(jiǎn)用于農(nóng)飯殘分析杜）四、儀器米及其工作薄原理工作原廈理加熱分初析樣品卵使其氣苗化，由屬載氣帶窩入色譜葬柱，由應(yīng)于各組缸分在固海定相與網(wǎng)載氣間定分配系支數(shù)不同伍，故在類(lèi)色譜柱犯中移動(dòng)便速度不懷同，經(jīng)往一段時(shí)息間后彼茅此得到伸分離，店再依次南被載氣樸帶入檢肝測(cè)器，眼將各組交分的濃籌度或質(zhì)蠢量轉(zhuǎn)換爸成電信啄號(hào)并記繪錄成色疾譜圖，儲(chǔ)根據(jù)色榴譜圖的麥峰高或梳峰面積廉而進(jìn)行擴(kuò)定量分扣析。五、含量突測(cè)定內(nèi)標(biāo)法常用于藥擁物分析。外標(biāo)法永少用輪，因?yàn)槠紾C進(jìn)往樣量小駝，造成絨的誤差蟻較大。1.色指譜條件侮和系統(tǒng)妹適應(yīng)性勸試驗(yàn)（1）馳色譜條淚件主要包帆括載氣澆、色譜符柱、檢腹測(cè)器、殺固定液腿（相）熄測(cè)試溫似度、進(jìn)壺樣量、零載體等遣。其中霧檢測(cè)器奔種類(lèi)、惹固定液素品種、子以及色撿譜柱的存材質(zhì)不前得改變憑，其它咬的如柱嫂子的內(nèi)頸徑和長(zhǎng)啞度、載清體的種市類(lèi)和粒售度、固幕定液涂介布的濃黎度、載議氣的流歪速、柱佛溫、進(jìn)盈樣量、蜜檢測(cè)器菊的靈敏衰度等可絹適當(dāng)改饑變，以悼適應(yīng)系宜統(tǒng)適用搜性試驗(yàn)曠的要求靈。①載氣：一般為劍N2，還可用淘H2、He躲。②色譜碰柱：玻璃柱限和不銹鋼嶺柱。③檢測(cè)器:氫火焰離蔽子檢測(cè)器伯（氫焰檢康測(cè)器F晃ID）適合有失機(jī)物檢懂測(cè)，靈漠敏度高鵝，應(yīng)用便廣泛。熱導(dǎo)檢測(cè)算器（TC德D）無(wú)機(jī)物釘、有機(jī)工物均可寇檢測(cè)，伍靈敏洽度較低順，用于喇水分測(cè)僅定。電子捕擁獲檢測(cè)隊(duì)器（E恩CD）適合含乳鹵素、柿硫、氮隆等電逐負(fù)性強(qiáng)們的元素哲的化合純物測(cè)定托。用于啊農(nóng)殘測(cè)艇定。④柱填棟料：吸附劑：變硅膠、氧黨化鋁等。珍較少用。高分子多敬孔小球：伐常用二乙鈔烯苯乙基溫乙烯苯型才的。氣固送吸附GC例如甲半（乙）口醇量、汁水分的特測(cè)定。涂漬固坡定液的踏載體（尚多用）府：常用鍵經(jīng)酸洗疑并硅烷畫(huà)化的硅嘗藻土（紅色載體稱(chēng)、白色歸載體）屬胳氣液分配駝GC。⑤固定液：常用仰甲基聚功硅氧烷盲（如S邁E-3招0、O還V-1遺7等）但、聚列乙二醇（如般PEG-呀20等）銷(xiāo)，一般涂證布濃度為5～25競(jìng)％。（2）繡系統(tǒng)適銹應(yīng)性試擔(dān)驗(yàn)（同充HPL挑C）2.內(nèi)集標(biāo)法（陵同乙醇券量測(cè)定沉法）（1）籃標(biāo)準(zhǔn)液稍的制備（2）供氣試液的制艘備（3）返校正因肯子（f抄）的測(cè)支定內(nèi)標(biāo)法特有的參數(shù)。內(nèi)標(biāo)法測(cè)促定時(shí)，同青一檢測(cè)器濫對(duì)不同（患被測(cè)成分邊和內(nèi)標(biāo)物未）具有不創(chuàng)同的響應(yīng)干值，故不翁能用峰面償積直接計(jì)具算的被測(cè)滴成分的含熟量，要引穴入校正因斜子