中藥指紋圖譜

中藥指紋圖譜小組成員

羅斌

尹先珍

趙丹目錄定義研究意義分析技術(shù)數(shù)據(jù)分析應(yīng)用前景定義中藥指紋圖譜是指運(yùn)用現(xiàn)代分析手段對中藥多維化學(xué)及其相關(guān)生物信息以圖形（圖像）的方式進(jìn)行表征并加以描述。分為三種：色譜指紋圖譜，波譜指紋圖譜，生物指紋圖譜研究意義

作為有著悠久文明史的中藥，其安全性、有效性早已經(jīng)過歷史的驗證。但中藥的均一穩(wěn)定性——即質(zhì)量可控的問題則是制約中藥發(fā)展，走向國際市場的瓶頸問題。中藥一般為復(fù)方制劑，方劑中有效成份極為復(fù)雜，大部分結(jié)構(gòu)、作用機(jī)時尚不清楚。在現(xiàn)有條件下，以單一化學(xué)成份分析的觀點(diǎn)，不適合中藥（天然藥物）這一復(fù)雜成份分析體系。而解決這一難題的有效手段，就是要參照植物藥的質(zhì)量控制方法，借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制模式，借助于建立相應(yīng)簡單理化鑒別，借助于現(xiàn)代的、被國際社會所認(rèn)可的中藥指紋圖譜技術(shù)。主要技術(shù)方法HPLCTLCGLCE

highperformanceliquidchromatographyGasChromatographycapillaryelectrophoresisThinLayerChromatography薄層色譜（TLC）定義原理特點(diǎn)色譜法的基本原理

利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。定義薄層色譜又叫薄板層析，屬固—液吸附色譜。是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。鋪板；點(diǎn)樣；展開；顯色；計算Rf值基本步驟比移值(Rf)是薄層色譜法中原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離的比值。丹參-不同薄層板薄層色譜圖高效液相色譜（HPLC）定義原理檢測器特點(diǎn)定義

液相色譜法是以液體為流動相的色譜法。根據(jù)混合物中各組分對兩相的親和力的不同可分為液固吸附色譜；液液分配色譜法；離子交換色譜法；凝膠滲透色譜法；離子色譜法；空間排阻色譜法。液相色譜儀原理高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運(yùn)動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

液相色譜儀工作流程圖檢測器功能

將被分析組在柱流出液中濃度的變化轉(zhuǎn)化為光學(xué)或電學(xué)信號；分類①紫外吸收檢測器②紫外一可見分光光度檢測器③示差折光化學(xué)檢測器④二極管陣列紫外檢測器⑤熒光檢測器⑥電化學(xué)檢測器工作特點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn):高壓、高效、高靈敏度、分析速度快，載液流速快（15-30min)、應(yīng)用范圍廣。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等.

缺點(diǎn):有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。而且需要嚴(yán)格的樣品預(yù)處理，很難表達(dá)被固定相吸附的樣品和高粘度的樣品。氣相色譜（GL）定義原理檢測器特點(diǎn)定義用氣體作為移動相的色譜法。根據(jù)所用固定相的不同可分為兩類：

固定相是固體的，稱為氣固色譜法；

固定相是液體的則稱為氣液色譜法。氣相色譜儀原理

氣相色譜儀中有一根流通型的狹長管道，這就是色譜柱。在色譜柱中，不同的樣品因為具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，與特定的柱填充物（固定相）有著不同的相互作用而被載氣（流動相）以不同的速率帶動。

當(dāng)化合物從柱的末端流出時，它們被檢測器檢測到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號，并被轉(zhuǎn)化為電信號輸出。在色譜柱中固定相的作用是分離不同的組分，使得不同的組分在不同的時間從柱的末端流出。檢測器

氣相色譜法中可以使用的檢測器有很多種，最常用的有熱導(dǎo)檢測器（TCD）與火焰電離檢測器（FID）。這兩種檢測器對很多種分析成分有靈敏的響應(yīng)，同時可以測定一個很大的范圍內(nèi)的濃度。

TCD從本質(zhì)上來說是通用性的，可以用于檢測除了載氣之外的任何物質(zhì)（只要它們的熱導(dǎo)性能在檢測器檢測的溫度下與載氣不同）。

FID對烴類的檢測比TCD更靈敏，但卻不能用來檢測水。兩種檢測器都很強(qiáng)大。由于TCD的檢測是非破壞性的，它可以與破壞性的FID串聯(lián)使用（連接在FID之前），從而對同一分析物給出兩個相互補(bǔ)充的分析信息。有一些氣相色譜儀與質(zhì)譜儀相連接而以質(zhì)譜儀作為它的檢測器，這種組合的儀器稱為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS，簡稱氣質(zhì)聯(lián)用）工作特點(diǎn)氣相色疲譜法是匙一種在唱有機(jī)化許學(xué)中對易揮發(fā)而不發(fā)生鎖分解的化編合物進(jìn)行漲分離與分貍析的色譜懼技術(shù)。氣相色柏譜的典額型用途芒包括測遠(yuǎn)試某一胳特定化斧合物的純度與對混合堤物中的各毯組分進(jìn)行分離毛細(xì)管輝電泳（鎖CE）定義分類檢測器特點(diǎn)定義是以彈性毛細(xì)管糞為分離夕通道、饞以高壓世直流電奔場為驅(qū)母動力，依據(jù)付樣品中余各組分限的淌度堡（單位澡電場強(qiáng)煉度下的分遷移速關(guān)度）和岡/或分古配行為矮的差異河而實(shí)現(xiàn)讀分離的輛一種分掏析方法棗。通過改凍變操作福模式和輪緩沖液述成分，磨可以對浸性質(zhì)不董同的各樹種成分施進(jìn)行有看效分離做和定量詳測定。分類1.分離模追式2.操作方式重新分為洪手動、半母自動及全霉自動型毛盞細(xì)管電泳郊。3.分離通道意形狀分為圓慕形、扁驅(qū)形、方警形毛細(xì)女管電泳鑰等。4.緩沖液的泛介質(zhì)分為水相狀毛細(xì)管與職非水相毛緣瑞細(xì)管毛細(xì)管礦電泳儀檢測器由于毛細(xì)渠管內(nèi)徑的抬限制，檢贏測信號是癢CE系統(tǒng)朱最突出的掌問題。紫

近些年，在實(shí)際應(yīng)用中還產(chǎn)生了激光誘導(dǎo)熒光（LIF）、有良好選擇性的安培（EC）、通用性很好的電導(dǎo)（CD）助以及可以獲得結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜（MS）等多種檢測器。工作特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：高效塔板數(shù)書目在1罷05-詳106筋片/攻m間屬，當(dāng)采天用CG凍E時芽，塔板筋數(shù)目可也達(dá)10陽7片被/m煩以上；快速

微量進(jìn)樣所需的樣品體積為nL級；

多樣性可根據(jù)需要選用不同的分離模式且僅需一臺儀器；

經(jīng)濟(jì)實(shí)驗消耗不過幾毫升緩沖溶液，維持費(fèi)用很低；缺點(diǎn)：由于進(jìn)樣量少，因而制備能力差；由于毛細(xì)管直徑小，使光路太短，用一些檢測方法（如紫外吸收光譜法）時，靈敏度較低；電滲會因樣品組成而變化，進(jìn)而影響分離重現(xiàn)性。No.1主要成分分析No.2聚類分析法No.3相似度評價法主要解切析方法No.嗚4人工神膊經(jīng)網(wǎng)絡(luò)用依利特風(fēng)P120寄1液相色好譜儀分析貿(mào)三聚氰胺No.暖1主要成分咐分析又稱主巷分量分泥析，在昏盡可能坡保留原伴有信息演基礎(chǔ)上填，用綜諸合指標(biāo)符解釋多轟變量的規(guī)方差-懷協(xié)方差路結(jié)構(gòu)，蹈把給定老的一組秘相關(guān)變糟量通過撫線性變飾換轉(zhuǎn)換師成另一楚組不相寄關(guān)的變腸量，這孝些新變賓量按照囑方差依初次遞減歲的順序嶄排列起叉來對多究變量進(jìn)津行降維摩處理。該方法辰具有變燙差最優(yōu)麥，信息躬損失最釣小，相漠關(guān)性最竹優(yōu)等特妻點(diǎn)。No.仙2聚類分覽析法又稱群分鳴析，是根煎據(jù)實(shí)驗數(shù)覆據(jù)本身的味定性或定斷量特征，爪變量域之逆間的相似捉性而逐步羞歸群成類沾的方法。其結(jié)果能樸客觀反映現(xiàn)些變量或悔區(qū)域之間撥的內(nèi)在組癢合關(guān)系?？煞譃槌庀到y(tǒng)聚魄類分析帆(hi晴era征rch猛ica秒lc篩lus闖ter托ing龜No.3相似度笑評價是口將一張?zhí)钪讣y圖甘譜的數(shù)退據(jù)用多榴維向量躍常見的有距離系數(shù)法，夾角余弦，相關(guān)系數(shù)法，Nei系數(shù)法，改進(jìn)Nei系數(shù)法。No.澇4人工神簡稱神谷經(jīng)網(wǎng)絡(luò)妻（NN畜s)或市稱作連批接模型舅（Co旺nne弦cti鑰oni妨st腫Mod績le)金,是一閘種模仿電動物神沒經(jīng)網(wǎng)絡(luò)俘的行為侮，并進(jìn)芹行分布在式信息墾其數(shù)據(jù)處理過程包括信號獲取，特征提取和信號檢測三個步驟。應(yīng)用在人參征鑒定中在茶葉分析中的應(yīng)用園參紅參人參中勁的應(yīng)用利用色晉譜指紋扇圖譜對棕人參中便的成分嗓進(jìn)行分壤析，可庸以得到圈各模式踢指紋圖透譜中的驚主要色鞏譜峰。金通過對五色譜峰勾的分析沾可以很勝好的反翁映人參淚中所含勁的化學(xué)陽物質(zhì)，型準(zhǔn)確的辭對人參決進(jìn)行鑒天別和質(zhì)莫量控制囑。應(yīng)用本光譜技爪術(shù)對不繡同種屬漠、不同授種植類畏型和不蠅同種植叔年份的乓人參進(jìn)逼行分析鵝，對得鍵到的指閃紋圖譜桐譜圖進(jìn)賺行分析登，可用哲來判斷蚊人參的粉真?zhèn)?，瘡還可用安溪鐵吊觀音西湖龍沃井茶葉中箱的應(yīng)用HPL艇C化學(xué)喚指紋圖伯譜法主邁要通過汁測定茶峰葉中的泰自由氨翁基酸含宋量、兒憲茶素、病咖啡因重及黃酮磨（苷）草類等化傘學(xué)成分巨含量，冒提取茶切特征成途分與模柳式識別姨方法相走結(jié)合判杜別茶葉塵品種和負(fù)產(chǎn)地。虎此方法茶的關(guān)鍵忠是模型偷的構(gòu)建凍。不同炭地區(qū)、濃不同品慌種的茶綱葉有不區(qū)同的判舌別模型良。例如用人工神炕經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（準(zhǔn)BP-A推NN）模笛型判別高佩綠（浙江律前負(fù)景中藥指紋慎圖譜質(zhì)控母技術(shù)是中殃藥質(zhì)量標(biāo)責(zé)準(zhǔn)現(xiàn)代化協(xié)的突破口造，將現(xiàn)代色分析學(xué)的

這對企業(yè)的發(fā)展提高競爭力是極為