DB51T 2910-2022鱘魚類志賀鄰單胞菌病診斷技術(shù)規(guī)程

DB51四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布 鱘魚類志賀鄰單胞菌病診斷技術(shù)規(guī)程2規(guī)范性引用文件GB/T4789.28-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)GB/T18652-2002致病性嗜水氣單胞菌檢驗(yàn)方法SC/T7013-2008水生動(dòng)物產(chǎn)地檢SC/T7014-2006水生動(dòng)物檢鱘魚類志賀鄰單胞菌病Plesiomonasshigelloidesfors檢驗(yàn)中所需試劑、染色液與培養(yǎng)基的配制按照GB/T4789.28、GB/T18652和SC/T7014規(guī)定執(zhí)4.2水9.1革蘭氏染色9.2生理生化試驗(yàn)9.2.2氧化酶試驗(yàn)9.2.3吲哚試驗(yàn)按SC/T7014表2的吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)的規(guī)定執(zhí)行。培養(yǎng)基變紅為陽性；不變紅為將待檢菌穿刺接種于糖、醇類發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)基（A.228℃培養(yǎng)24h后觀察。培養(yǎng)基9.2.5運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)酚氯仿法、高鹽法或采用商用試劑盒提取細(xì)菌基因組D29.3.3瓊脂糖凝膠電泳參照物作對(duì)照。120V電泳約20min-40min，當(dāng)溴酚藍(lán)到達(dá)底部時(shí)停止。于紫外光下觀察，并在長(zhǎng)波9.3.4PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化、測(cè)序、序列比對(duì)9.3.4.1PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化按每0.1g瓊脂糖凝膠加0.1mL酚，將酚加入9.3.3離心10min，棄上清。將沉淀的DNA溶于適當(dāng)體積9.3.4.2PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序與同源性分析+--+++測(cè)定的16SrRNA基因序列與附錄B所列的基因序列比較，同源性達(dá)A.2糖、醇類發(fā)酵培養(yǎng)基蒸水定容至1L，室溫保存。使用時(shí)，配成1×TAE電A.4溴酚藍(lán)指示劑溶液6×上樣緩沖液將溴酚藍(lán)100mg，加雙蒸水5mL，在室溫下過夜。待溶解后再稱取蔗糖25g，將24體積的氯仿和1體積的異戊AAGTGGTAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATTCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTATACTTTATGGGATTCGCTCACTATCGCTAGCTTGCCGCCCTTTGTATATGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATCACCGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGACCGAATCGCTGGCAACAAAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGGATGTCAAGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCATGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGATTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCTCAAGGGCACAACCTCCAAATCGACATCGTTTACAGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCTGAGCGTCAGTCTTTGTCCAGGGGGCCGCCTTCGCCACCGGTATTCCTCCAGATCTCTACGCATTTCACCGCTACACCTGGAATCCCCCTCTACAAGACTCTAGCTTGCCAGTTTCAAATGCAGTTCCCAAGTTGAGCTCGGGGATTTCACATCTGACTTAACAAACCGTGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGGTGCTGCGAGTAACGTCAATGCCACTAGGTATTAACTAGTGACCCTTCCTCCCCGCTGAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCAGCGGCATGGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTGTGACTGGTCATTCTCTCAAACCAGTTAGAGATCGTCGCCTTGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATCCCACCTGGGTTGATAGCATGAGGTCCGAAGAGCC