抗氧化藥藥理

抗氧化藥藥理抗氧化藥藥理第1頁淺談自由基100年放射生物學領(lǐng)域→潛水醫(yī)學領(lǐng)域→SOD→缺血再灌注與自由基損傷→腫瘤、免疫等各種生命過程自由基：損傷作用

信號作用當代抗衰老研究目標不是將自由基徹底去除，而是將自由基維持在一個適當?shù)退?，維持氧化和抗氧化防御之間平衡?？寡趸幩幚淼?頁自由基是什么一個原子或分子含有未成對電子，或是一個原子、分子或離子子，帶有一個單獨不成正確電子。即是自由基外層只有一個子，所以急于抓取其它電子來穩(wěn)定自己，而破壞其它分子大個別生物學和醫(yī)學所關(guān)心自由基是由氧分子衍生而來氧分子衍生之自由基也一樣應(yīng)用在以氮及碳分子為中心所衍生出之自由基O2＋e–?→O-2（氧自由基；超氧化物）自由基致線粒體DNA突變自由基對呼吸鏈損傷自由基對線粒體膜損傷自由基破壞線粒體鈣穩(wěn)態(tài)已經(jīng)有公認,線粒體鈣穩(wěn)態(tài)破壞是細胞壞死最終共同通路?？寡趸幩幚淼?頁自由基起源燒烤、抽煙、致癌物質(zhì)、環(huán)境化學物質(zhì)、氯化物、重金屬、酒精性飲料、抗癌藥品、猛烈運動等線粒體是細胞呼吸和氧化中心，氧自由基主要起源于線粒體呼吸鏈反應(yīng)，這里可產(chǎn)生活細胞內(nèi)90%以上自由基。自由基種類繁多，其中，以超氧陰離子自由基(?O2ˉ)和羥自由基(?OHˉ)等氧自由基最為主要抗氧化藥藥理第4頁抗氧化劑多年來經(jīng)研究發(fā)覺去除氧自由基藥品很多，如眾所周知維生素e、維生素a、維生素F及丹參等，都能很好地去除氧自由基，在臨床上也已得到廣泛應(yīng)用。還有一些天然產(chǎn)物知母寧和蛋白類化合物（金屬硫蛋白、鈍頂螺旋藻藻膽蛋白）也含有較強抗氧化能力。在當前眾多去除氧自由基藥品中，以中草藥及其提取成份活性較強，在臨床應(yīng)用也十分廣泛.因而在中草藥中尋找高效無不良反應(yīng)天然自由基去除劑研究，成為醫(yī)藥學活躍研究領(lǐng)域

。一些含有氧自由基去除能力中草藥不但能夠治療與氧自由基增加而引發(fā)相關(guān)疾病，如癌癥、缺血:再灌注損傷、輻射損傷，還可經(jīng)過去除氧自由基對面部色素沉積（如蝴蝶斑，黃褐斑）有一定療效。所以，研究去除氧自由基藥品及其制劑不但在臨床治療上有重大意義而且在化裝品及保健食品開發(fā)上含有較大市場潛力。但在使用過程中應(yīng)恰當，不然利少弊多。09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第5頁抗氧化劑分類抗氧化劑(antioxidants)：

分為兩類：--由體內(nèi)制造抗氧化酵素--由體外補充抗氧化食物+體內(nèi)抗氧化酵素，必須有有銅(Cu)鋅(Zn)硒(Se)鐵(Fe)等參加飲食中抗氧化物質(zhì)：β－胡蘿卜素從飲食或營養(yǎng)補充品連續(xù)補充抗氧化劑和營養(yǎng)素是必須

09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第6頁抗氧化藥品研究進展微量元素類

---------羧乙基鍺倍半氧化物（鍺--123）

電子自旋共振技術(shù)（ESR）和比色法OH·和O2·----------硒--為含硒谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性個別

O2·所致脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng)克山病、肝癌及結(jié)腸癌預(yù)防。----------青絡(luò)鍺（Ge-M10）和青絡(luò)銅（Cu-M5）

抗癌藥研發(fā)09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第7頁藥用天然化合物-------多糖類-----藻類多糖ESR和自旋捕集技術(shù)，OH·和O2·

------菌類多糖鄰苯三酚自氧化法測定

------其它植物多糖金線蓮多糖沙棘多糖--------黃酮類化合物ESR自旋捕捉法和微量量熱法試驗--------酚類單酚類與多酚類抗衰老、心腦血管---------萜類化合物及其甙-------人參總甙類犬腎移植模型---------冬凌草甲素OH·和O2·抗癌-----------蒽醌類化合物蘆薈大黃素和蘆薈素09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第8頁藥用植物----------傘形科藥用植物

大都含有去除自由基-------------馬齒莧不一樣處理方法引發(fā)馬齒莧水提物對O2·作用差異，使得馬齒莧臨床應(yīng)用有所不一樣--------------鮮花提取液化學發(fā)光法多數(shù)鮮花含有抗氧化活性，其中天竺葵、春蘭、仙客來、萬壽菊等花瓣浸提液含有較強去除·OH活性---------------其它藥用植物大黃，丹參，三七，銀杏，陳皮，荷葉，桑葉等09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第9頁酶類------------巴曲酶蛇毒中提取血栓素樣蛋白酶，含有抗血栓作用超氧陰離子自由基去除劑--------------SOD

公認使用期很短，只有幾小時，且不易經(jīng)過細胞膜09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第10頁化學合成藥

-----------吲達帕胺和維拉帕米

離體兔心灌注模型試驗，設(shè)置吲達帕胺和維拉帕米組與對照組MDA下降，SOD增強------------4-氧和4-羥四甲基哌啶氮氧自由基及其衍生物

顯著抗脂質(zhì)過氧化物09年，抗氧化劑臨床應(yīng)用及其研究進展抗氧化藥藥理第11頁抗氧化藥研究熱點特異性抗氧化是用比較特異抗氧化物質(zhì)來阻斷那些主要損害機體自由基，保留正?；蚝米杂苫椒ㄎ镔|(zhì)還原性不強，不然可能含有還原損傷效應(yīng)，如維生素C當前比較有前途幾個是：尿酸、衣達拉豐（藥品）、氫氣、FK106(免疫抑制藥品)抗氧化藥藥理第12頁另外一個比較有前途是開啟內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)方法，就是氧化反應(yīng)元件激動物，如硫氧化還原蛋白、GSH合成等，這些物質(zhì)是體內(nèi)抗氧化最有效系統(tǒng)，不需要補充抗氧化物質(zhì)，就能夠發(fā)揮作用，而且不會造成過分抗氧化，實際上氧化還原最主要是平衡許多天然化合物能激動這個路徑比如蘿卜硫素、姜黃素，這些藥品含有非常好抗癌作用抗氧化藥藥理第13頁天然藥品抗氧化活性成份研究進展天然藥品抗氧化活性成份分離提取技術(shù)發(fā)展

天然藥品有效成份傳統(tǒng)提取方法為索氏萃取法(Soxhletextraction,SE)缺點：局部過熱，溶液限制

新液相色譜法發(fā)展和應(yīng)用,為有效成份提取提供了新有利方法。如：灌注色譜法可用于天然藥品中蛋白質(zhì)、肽類、酶類、低聚糖類、生物堿類等分離純化。高速逆流色譜法(Hsccc)用于生物堿類、黃酮類、萜類、木脂素類、香豆素類及植物激素類等活性成份分離提取抗氧化藥藥理第14頁當前多采取微波輔助萃取法(MAE)和超臨界流體萃取技術(shù)(SFE)。MAESFE分離提取快速,與索氏萃取法比較只需較少溶劑且得率較高

。酚類化合物能夠輕易地用MAE提取而得最潔凈提取方法,萃取和分離合二為一，速度快，在靠近常溫條件下操作，適合于揮發(fā)性物質(zhì)分離抗氧化藥藥理第15頁抗氧化活性測定--體外抗氧化活性總抗氧化能力消除活性氧能力--在體抗氧化作用試劑盒丙二醛含量能夠反應(yīng)出體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷水平?？寡趸幩幚淼?6頁抗氧化活性篩選方法主要為三大類：

@體外抗氧化模型

—脂質(zhì)過氧化抑制

—去除各類活性氧、自由基能力檢測方法

—氧化還原法@細胞損傷模型—H2O2損傷細胞體外模型

—過氧化脂質(zhì)損傷細胞體外模型建立

@體內(nèi)抗氧化模型07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第17頁體外抗氧化模型以油脂為底物：

加速氧化方法：烘箱法、活性氧加速法等

利用金屬離子、自由基引發(fā)劑氧化誘導期指示方法能否客觀反應(yīng)底物氧化誘導期結(jié)束，對評價抗氧化劑活性非常關(guān)鍵。

方法：碘量法

硫氰酸亞鐵法三價鐵離子與硫氰酸絡(luò)合

共軛二烯酸測定法

化學熒光法

增重法

養(yǎng)壓法茴香胺反應(yīng)物法、克雷斯試驗法、胡蘿卜素漂白法等

脂質(zhì)過氧化抑制07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第18頁體外抗氧化模型以亞油酸為底物硫氰酸鐵法

硫代巴比妥酸法

-----利用亞油酸氧化產(chǎn)生丙二醛和硫代巴比妥酸反應(yīng)生成紅色物質(zhì)，在532nm有吸收。+卵磷脂氧化法+亞油酸甲酯氧化法+以鼠肝微粒體為底物脂質(zhì)過氧化抑制07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第19頁體外抗氧化模型去除羥自由基能力產(chǎn)生羥自由基(·OH)體系有Fe—EDTA一抗壞血酸一H20體系、Fe一EDTA—H20體系、黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶一H0體系及紫外光照H0，光解產(chǎn)生·OH等。

方法：二甲基亞砜法DMSO脫氧核糖核酸降解法亞硝基二甲苯胺(NPA)漂白法水楊酸法高效液相電化學檢測法茜素紫顯色法去除各類活性氧、自由基能力檢測方法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第20頁體外抗氧化模型檢測去除H202

能力方法去除過氧自由基能力檢測方法過氧自由基(RO·)包含水溶性RO·和脂溶性RO·

RO·可使順式十八碳四烯酸脂質(zhì)過氧化，測定熒光強度(于324nm激發(fā)，412nm處釋放)可了解脂質(zhì)過氧化情況，推測受試物去除RO·情況。+超氧陰離子自由基去除能力測定鄰苯三酚蛋氨酸

鄰苯三酚法可經(jīng)過測定鄰苯三酚自氧化速率來確定待測物抑制作用+去除二苯代苦味?；杂苫芰z測方法ABTs方法2，2一連氮一雙一(3一乙基苯并噻唑啉一6一磺酸去除各類活性氧、自由基能力檢測方法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第21頁受試物直接去除自由基能力檢測除以上介紹方法外，受試物對各類自由基去除作用還可用電子順磁共振(ESR)法。用ESR測試得到自旋加合物電子自旋共振圖譜，得知受試物對自旋加合物信號強度影響，從而了解受試物對自由基去除情況體外抗氧化模型07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第22頁FRAPassay(FerricReducingAbilityofplasma)：血漿高鐵還原能力分析能力原理：實質(zhì)是基于氧化還原反應(yīng)比色法在低pH值溶液中，F(xiàn)e3+一TPTZ(Fe3+一三吡啶三嗪)被抗氧化劑還原成Fe2+一TPTz，溶液變成深藍色，而且在593nm處有最大光吸收。其它體外測定抗氧化活性方法還有利用Cu2~-Fenton反應(yīng)，P標識檢測DNA氧化損傷法，SPME法監(jiān)測脂質(zhì)過氧化系統(tǒng)中產(chǎn)生揮發(fā)性羰基類化合物來評價抗氧化活性法等。體外抗氧化模型氧化還原法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第23頁自由基損傷細胞體外模型H202

損傷細胞體外模型

H202培養(yǎng)液MTT法觀察細胞損傷及藥品對細胞損傷保護作用+過氧化脂質(zhì)損傷細胞體外模型建立過氧化脂質(zhì)t—BuOOH、NDE(2，4一nona—diena1)07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第24頁體內(nèi)抗氧化試驗用受試物連續(xù)喂飼大鼠或小鼠1個月～3個月，然后處死動物，測定其血或組織(如肝、腦)中MDA、單胺氧化酶(MAO—B)及抗氧化酶SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH—Px)及過氧化氫酶(CAT)，同對照組比較，若MDA、MAO—B降低，SOD、GSH—Px、CAT等升高，則說明受試物含有抗氧化能力。07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第25頁體外篩選含有抗氧化活性物質(zhì)可經(jīng)過體內(nèi)試驗深入驗證。體內(nèi)試驗特點是比較靈敏，周期較長，成本較大，試驗比較繁瑣，不如體外試驗簡易方便，但卻是當前最準確、可信度最高抗氧化劑篩選方法。天然抗氧化活性物質(zhì)篩選對促進抗衰老、防癌和心血管系統(tǒng)疾病保健食品、藥品開發(fā)含有主動作用。07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展抗氧化藥藥理第26頁量子化學計算方法在化學工作者用試驗方法檢測某一類抗氧化劑抗氧化能力基礎(chǔ)上，依據(jù)所得數(shù)據(jù)，以計算機軟件為工具用量子化學模擬計算，確定抗氧化劑構(gòu)效關(guān)系，開創(chuàng)了用量子化學理論研究抗氧化劑能力新路能夠反抗氧化劑活性進行預(yù)測，且有可能在理論上結(jié)構(gòu)出新活性更高抗氧化劑，進而加速抗氧化劑合成與篩選抗氧化藥藥理第27頁遺傳藥理學抗氧化藥藥理第28頁研究藥品效應(yīng)遺傳變異及其規(guī)律在正常個體間，藥品代謝酶動力學參數(shù)(米氏常數(shù)Km,反應(yīng)最大速率Vmax)存有很大差異在體內(nèi)試驗測量到藥品消除速率差異可自4倍~40倍以上大量孿生兒女和家族研究顯示遺傳是造成高度個體間差異主要原因抗氧化藥藥理第29頁研究意義不一樣病人去除藥品固有能力是不一樣一位含有快速代謝藥品能力人，為取得適宜治療濃度，可能需要更高劑量、更頻繁地給藥一位代謝能力遲緩病人，為防止發(fā)生毒性反應(yīng)，可能需要較低劑量和較少給藥次數(shù)對于安全范圍較窄藥品尤為主要抗氧化藥藥理第30頁研究任務(wù)認識和說明藥品反應(yīng)個體