腸癌BH表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制

腸癌BH表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制第1頁/共30頁研究背景第2頁/共30頁腫瘤微環(huán)境A.還原論者認(rèn)為腫瘤是由一群?jiǎn)渭兊哪[瘤細(xì)胞聚集而成的B.腫瘤是由腫瘤細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)構(gòu)成的，腫瘤基質(zhì)主要包括成纖維細(xì)胞、各種免疫細(xì)胞和新生血管上皮細(xì)胞等細(xì)胞類型。第3頁/共30頁Tc1Th1M1M2Th17/Tc17Th2/Tc2Treg/AnergicMyeloid-DerivedSuppressorCells(MDSC)Tc1Th1M1M2Th17/Tc17Th2/Tc2Treg/AnergicTreg/AnergicMyeloid-DerivedSuppressorCells(MDSC)腫瘤浸潤免疫細(xì)胞幾乎囊括了宿主免疫系統(tǒng)的所有成分：T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞，肥大細(xì)胞等，形成一個(gè)腫瘤局部微環(huán)境下的免疫系統(tǒng)。其中的淋巴細(xì)胞成分被定義為腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（Tumorinfiltratinglymphocytes，TIL）,巨噬細(xì)胞被定義為腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞（Tumorassociatedmacrophagel，TAM）。腫瘤微環(huán)境和免疫細(xì)胞第4頁/共30頁協(xié)同刺激分子和協(xié)同刺激信號(hào)雙信號(hào)B7/CD28超家族

TNF/TNFR超家族協(xié)同刺激分子及其受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑在T細(xì)胞的活化和行使功能過程中發(fā)揮重要作用，正成為對(duì)臨床疾病進(jìn)行免疫干預(yù)最有希望的手段之一。第5頁/共30頁人B7-H1基因定位于9p24。屬于免疫球蛋白超家族。其開放閱讀框編碼290個(gè)氨基酸由胞外IgV、IgC結(jié)構(gòu)域、疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域、及胞內(nèi)區(qū)組成。胞外段與B7-1、B7-2具有較高的同源性，分別達(dá)到20％、15％。B7-H1蛋白廣泛表達(dá)于APCs，活化T、B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞及一些非淋巴樣組織。B7-H1通過與T細(xì)胞上的受體PD-1結(jié)合，負(fù)性調(diào)控免疫應(yīng)答。B7-H1分子概況第6頁/共30頁B7-H1分子概況第7頁/共30頁研究?jī)?nèi)容1、分析人結(jié)直腸癌中B7-H1分子表達(dá)及T細(xì)胞的浸潤情況2、探討B(tài)7-H1信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤T細(xì)胞的作用機(jī)制結(jié)直腸癌的發(fā)展過程第8頁/共30頁第一部分人結(jié)直腸癌中B7-H1分子的表達(dá)及T細(xì)胞的浸潤情況第9頁/共30頁實(shí)驗(yàn)方法腸癌標(biāo)本的收集及資料統(tǒng)計(jì)（收集結(jié)直腸癌標(biāo)本112例）免疫組化檢測(cè)B7-H1的表達(dá)、CD3+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞的浸潤情況結(jié)合患者臨床病理參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析和生存分析第10頁/共30頁標(biāo)本來源

標(biāo)本取自2003年1月至2003年12月在蘇州大學(xué)附屬第四醫(yī)院接受結(jié)腸直腸癌切除手術(shù)的112名患者的組織蠟塊，收集患者的病理資料。所有病例經(jīng)HE染色讀片、病理診斷確認(rèn)為結(jié)腸癌或直腸癌?；颊吣挲g29-85歲，中位年齡62歲，所有患者術(shù)前均未接受放療或化療。同時(shí)選取10例癌旁正常組織作為正常對(duì)照。采用已確認(rèn)B7-H1免疫組化染色陽性的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織作為陽性對(duì)照組織，采用扁桃體組織作為CD3抗體和CD8抗體免疫組化染色的陽性對(duì)照組織。第11頁/共30頁CDBAA.腸癌組織高度表達(dá)B7-H1;B.腸癌組織低度表達(dá)B7-H1;C.正常組織不表達(dá)B7-H1;D.陰性對(duì)照一、B7-H1分子在結(jié)直腸癌及正常組織中的表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果腸癌組織中B7-H1分子的表達(dá)水平顯著高于臨近正常切端組織。（P<0.001）第12頁/共30頁二、B7-H1在腸癌的表達(dá)情況和腸癌患者臨床病理因素的相關(guān)性第13頁/共30頁三、B7-H1的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系腸癌組織中B7-H1分子的表達(dá)水平與患者的臨床預(yù)后顯著相關(guān)，且B7-H1高表達(dá)的患者生存率顯著低于低表達(dá)的患者。（P<0.05）第14頁/共30頁四、CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞在腸癌組織的浸潤與患者預(yù)后的關(guān)系BAA.腸癌組織中CD3+T細(xì)胞的浸潤B.腸癌組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤C(jī)D3+T細(xì)胞在腸癌組織浸潤程度和腸癌患者的總體生存率密切相關(guān)，CD3+T細(xì)胞浸潤高的患者其生存率較CD3+T細(xì)胞浸潤低的患者升高（P<0.01）。第15頁/共30頁五、腸癌CD3+T、CD8+T細(xì)胞的浸潤情況和患者臨床參數(shù)的相關(guān)性第16頁/共30頁六、腸癌CD3+T、CD8+T細(xì)胞的浸潤程度與B7-H1分子表達(dá)水平的相關(guān)性第17頁/共30頁第一部分小結(jié)1、B7-H1分子在腸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，并且與腫瘤部位和Duke’s分期顯著相關(guān)；2、生存分析顯示，腸癌患者的預(yù)后與B7-H1分子的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，與CD3+T細(xì)胞的浸潤程度呈正相關(guān)，而與CD8+T細(xì)胞的浸潤程度無顯著相關(guān)性；3、B7-H1分子的表達(dá)水平與CD3+T細(xì)胞的浸潤程度呈負(fù)相關(guān)；第18頁/共30頁第二部分B7-H1信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤T細(xì)胞及其亞群的影響第19頁/共30頁實(shí)驗(yàn)方法分析腫瘤患者外周血和組織中的T細(xì)胞亞群,及組織中Tregs與B7-H1的相關(guān)性構(gòu)建SW480/B7-H1+/-細(xì)胞，并與外周血CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)檢測(cè)刺激前后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的功能改變第20頁/共30頁一、腫瘤患者外周血和組織中的T細(xì)胞亞群腫瘤患者外周血中T細(xì)胞總數(shù)比例較健康人變化不大，腫瘤組織中浸潤的T細(xì)胞有所下降，但仍占浸潤淋巴細(xì)胞總數(shù)的67.1，表明T細(xì)胞依然是抗腫瘤免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞。而無論在腫瘤患者外周還是組織中，CD4+T/CD8+T細(xì)胞比例均發(fā)生了倒置，同時(shí)CD4+CD25+Tregs比例也都較正常人顯著上升。實(shí)驗(yàn)結(jié)果第21頁/共30頁二、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）與腫瘤細(xì)胞B7-H1的關(guān)系第22頁/共30頁三、SW480/B7-H1和SW480/Mock細(xì)胞上B7-H1分子和GFP報(bào)告基因的表達(dá)A．SW480/Mock細(xì)胞上GFP綠熒光蛋白的表達(dá)B．SW480/Mock細(xì)胞上B7-H1蛋白的表達(dá)C．SW480/B7-H1細(xì)胞上GFP綠熒光蛋白的表達(dá)D．SW480/B7-H1細(xì)胞上B7-H1蛋白的表達(dá)SW480/MOCKSW480/B7-H1GFPB7-H1第23頁/共30頁四、腫瘤B7-H1信號(hào)促進(jìn)CD4+Tregs的誘導(dǎo)產(chǎn)生第24頁/共30頁五、腫瘤B7-H1信號(hào)促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分泌TGF-β和IL-10第25頁/共30頁第二部分小結(jié)1、腸癌患者的組織及外周血中的Tregs比例都較正常人顯著上升；2、成功構(gòu)建了腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株SW480/B7-H1+/-；3、在CD3單抗和TGF-β的共同作用下，SW480/B7-H1可誘導(dǎo)Treg的產(chǎn)生。第26頁/共30頁全文總結(jié)1、腸癌組織較正常組織顯著高表達(dá)B7-H1分子，且與患者的腫瘤部位和Duke’s分期顯著相關(guān)，提示B7-H1在腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。2、腸癌組織中B7-H1的表達(dá)水平與CD3+T細(xì)胞的浸潤程度呈負(fù)相關(guān)，且兩者都與患者的預(yù)后顯著相關(guān)，提示B7-H1分子可能通過下調(diào)腫瘤微環(huán)境中的浸潤性T淋巴細(xì)胞，從而介導(dǎo)了腫瘤免疫逃逸。3、體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，B7-H1分子對(duì)Tregs的產(chǎn)生具有誘導(dǎo)作用，提示B7-H1還有可能通過誘導(dǎo)產(chǎn)生抑制性的Tregs，從而抑