![熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)_第1頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef1827/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef18271.gif)
![熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)_第2頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef1827/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef18272.gif)
![熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)_第3頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef1827/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef18273.gif)
![熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)_第4頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef1827/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef18274.gif)
![熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)_第5頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef1827/fc9e6c997018e97f042c3821f4ef18275.gif)
版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)第1頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)了解熒光原位雜交技術(shù)的基本原理和在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。掌握原位雜交技術(shù)的操作方法,熟練掌握熒光顯微鏡的使用方法。第2頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日二、實(shí)驗(yàn)原理FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針,按照堿基互補(bǔ)的原則,與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合,形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列,因而可以將探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比,熒光原位雜交具有快速、檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn),因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類(lèi)產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。第3頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日三、實(shí)驗(yàn)用具及材料
Y染色體探針、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本、恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻片、NikonE-400、熒光顯微鏡、蓋玻片、封口膜、200μL移液器、20μL移液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、吐溫20。
第4頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟
第5頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日1.探針及標(biāo)本的變性
探針變性:標(biāo)本變性:第6頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日2.雜交
DNA探針10μL滴于已變性并脫水的玻片標(biāo)本上,蓋上18×18蓋玻片,用Parafilm封片,置于潮濕暗盒中37℃雜交過(guò)夜(約15~17h)。
第7頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日3.洗脫
第8頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日4.雜交信號(hào)的放大
第9頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日5.封片
可采用不同類(lèi)型的封片液。如果封片液中不含有Mowiol(可使封片液產(chǎn)生自封閉作用),為防止蓋片與載片之間的溶液揮發(fā),可使用指甲油將蓋片周?chē)忾]。封好的玻片標(biāo)本可以在-20~-70的冰箱中的暗盒中保持?jǐn)?shù)月之久。
第10頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日6.熒光顯微鏡觀察FISH結(jié)果
先在可見(jiàn)光源下找到具有細(xì)胞分裂相的視野,然后打開(kāi)熒光激發(fā)光源,F(xiàn)ITC的激發(fā)波長(zhǎng)為490nm。細(xì)胞被PI染成紅色,而經(jīng)FITC標(biāo)記的探針?biāo)诘奈恢冒l(fā)出綠色熒光。本實(shí)驗(yàn)使用的是Y染色體上的特異序列,因此在男性外周血染色體標(biāo)本的雜交中呈陽(yáng)性,即使在未分裂的細(xì)胞中,也可以觀察到明顯的雜交信號(hào)。照相記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
第11頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日觀察結(jié)果(a)間期細(xì)胞(b)中期細(xì)胞,Y染色體熒光標(biāo)記探針
第12頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日五、作業(yè)及思考題
1.通過(guò)實(shí)驗(yàn)總結(jié)熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的技術(shù)關(guān)鍵。2.實(shí)驗(yàn)中會(huì)不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,為什么?
第13頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日第14頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日第15頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日第16頁(yè),共19頁(yè),2023年,2月20日,星期日第
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人民版道德與法治九年級(jí)上冊(cè)3.2《將關(guān)愛(ài)傳遞》聽(tīng)課評(píng)課記錄1
- 人教版八年級(jí)地理下冊(cè)三環(huán)一體式導(dǎo)學(xué)助聽(tīng)課評(píng)課記錄《第六章 北方地區(qū)》
- 湘教版數(shù)學(xué)九年級(jí)下冊(cè)1.5《二次函數(shù)的應(yīng)用》聽(tīng)評(píng)課記錄1
- 統(tǒng)編版七年級(jí)下冊(cè)道德與法治第四課 揭開(kāi)情緒的面紗 聽(tīng)課評(píng)課記錄
- 2022年新課標(biāo)八年級(jí)上冊(cè)道德與法治《6.2 做負(fù)責(zé)人的人 》聽(tīng)課評(píng)課記錄
- 小學(xué)二年級(jí)上冊(cè)口算練習(xí)題
- 八年級(jí)下學(xué)期工作總結(jié)
- 五年級(jí)上冊(cè)數(shù)學(xué)口算500題
- 滬科版數(shù)學(xué)八年級(jí)下冊(cè)《中位數(shù)和眾數(shù)》聽(tīng)評(píng)課記錄1
- 合作社管理分紅協(xié)議書(shū)范本
- 特殊感染手術(shù)的配合與術(shù)后處理課件
- 檢驗(yàn)科生物安全工作總結(jié)
- 《ESPEN重癥病人營(yíng)養(yǎng)指南(2023版)》解讀課件
- 《金屬與石材幕墻工程技術(shù)規(guī)范》jgj1332001-2021112401384
- 即時(shí)通訊系統(tǒng)建設(shè)方案
- 2024年中國(guó)南水北調(diào)集團(tuán)新能源投資限公司抽水蓄能項(xiàng)目崗位公開(kāi)招聘高頻考題難、易錯(cuò)點(diǎn)模擬試題(共500題)附帶答案詳解
- 數(shù)據(jù)中心基礎(chǔ)設(shè)施管理考核試卷
- TB-T 3263.1-2023 動(dòng)車(chē)組座椅 第1部分:一等座椅和二等座椅
- 部編版五年級(jí)下冊(cè)語(yǔ)文1-8單元習(xí)作課件
- 中國(guó)2型糖尿病運(yùn)動(dòng)治療指南 (2024版)
- 基礎(chǔ)構(gòu)成設(shè)計(jì)全套教學(xué)課件
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論