腫瘤學動物實驗技能培訓

腫瘤學動物實驗技能培訓第1頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六一、常用實驗動物及選擇——品系選擇

名稱毛色免疫特性適合實驗BALB/c白色野生型同基因型腫瘤實驗C57BL黑色野生型同基因型腫瘤實驗NudeBALB/c,裸鼠無毛胸腺缺陷，T細胞缺陷人移植瘤實驗SCID白色T、B細胞減少，細胞免疫和體液免疫缺陷，巨噬細胞和NK細胞正常免疫功能重建，腫瘤學NOD/SCID白色與SCID相比，NK細胞減少免疫功能重建，腫瘤學NOG/NSG白色IL-2受體缺陷，與NOD/SCID相比，天然和獲得性免疫缺陷更高免疫功能重建，腫瘤細胞治療BALB/cC57BL裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG第2頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六

成年動物的年齡、體重和壽命比較

小鼠大鼠豚鼠兔狗成年日齡（天）65～9085～11090～120120～180250～360成年體重（g）20～28200～280350～6002000～35008000～15000平均壽命（年）1～22～3＞25～613～17最高壽命（年）＞3＞4＞6＞1334一、常用實驗動物及選擇——年齡選擇

一般購買6-8周小鼠，用于實驗第3頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六二、小鼠的飼養(yǎng)——環(huán)境

微生物控制等級選擇

普通級動物：示教、預實驗清潔級動物：適用大多數科研。無特定病原體動物（SPF）：為理想的健康動物，適用于所有科研、檢定。無菌動物（GF）：適用于特殊研究。第4頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六動物室環(huán)境控制要求值項目控制要求值備注溫度21～27℃按動物品種而有若干差別濕度45～55%氣流速度10～25cm/秒避免直吹風換氣次數8～15次/小時100%新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不應超過總空氣量的1/3）照明75～300lux定時人工照明（分置小瓦數日光燈）氨濃度20ppm以下噪音50分貝以下無動物時（有動物時，除狗居外，不高于65分貝）

二、小鼠的飼養(yǎng)——環(huán)境

第5頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六動物飼養(yǎng)密度動物飼養(yǎng)密度應符合衛(wèi)生標準，有一定的活動面積，不能過分擁擠。各種動物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳期所需面積較大，一般小鼠4-6只/籠。二、小鼠的飼養(yǎng)——密度

第6頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六二、小鼠的飼養(yǎng)——墊料、飼料、水

墊料、飼料均需經過輻照并密封包裝。水，自來水121度高壓滅菌20min。飼料選擇營養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選擇高蛋白，高脂肪飼料。第7頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六三、腫瘤建模

腫瘤模型類型：皮下移植瘤、肺轉移模型、原位移植瘤；

查閱文獻確定細胞接種濃度：一般1*106個細胞左右；

預實驗：以2倍比例選擇三個細胞濃度開展預實驗；

準備細胞：細胞重懸于PBS、生理鹽水或基礎培養(yǎng)基中，定量；

接種：皮下接種可選擇乙醚麻醉，100ul/位點；肺轉移尾靜脈注射，用小鼠固定器，200ul/只；對于皮下移植瘤，如需細胞數量較大，可以接種組織塊兒；皮下接種部位：Flank，背頸部，腋窩。第8頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六四、標記與分組編號與標記方法染色法剪耳法穿耳孔法標牌法烙印法剪毛法第9頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六在每組動物不超過l0只或一個實驗不超過40只的情況下適用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色染色法：單色涂染法四、標記及分組——單色染色法第10頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六涂染原則：從左到右、從上到下左前肢為1號、左側腹部2號、左后肢3號，兩耳后部4號、背部5號、后肢背部6號，右前肢7號、右側腹部8號、右后肢9號頭部為40號、尾巴根為10號。方法步驟四、標記及分組——單色染色法第11頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六在每組動物不超過100只的情況下適用常用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色，作為“個”位數常用染色劑：0.5%中性紅或品紅溶液，可染成紅色，作為“十”位數四、標記及分組——雙色染色法第12頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六用兩種顏色同時進行染色標記用苦味酸(黃色)染色標記作為個位數，個位數的染色標記方法同單色涂染法用品紅(紅色)染色標記作為十位數四、標記及分組——雙色染色法方法步驟第13頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六左前肢為10號、左側腹部20號、左后肢30號兩耳后部40號、背部50號、后肢背部60號右前肢70號、右側腹部80號、右后肢90號第100號不作染色標記方法步驟第14頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六穿耳孔法：用專用耳空器在動物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號碼的方法。原則是：左耳代表十位，右耳代表個位。標牌法：一般掛在動物的頸部、耳朵、腳上。烙印法剪毛法四、標記及分組——其他方法第15頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六四、標記及分組——分組一致性原則差異是絕對的，一致是相對的利用隨機數字表進行隨機分組，最大限度避免人為因素第16頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六五、治療、給藥

治療起點和途經根據不同的腫瘤和治療藥物不同而定；皮下移植瘤，尾靜脈給藥：50mm3,100mm3；皮下移植瘤，瘤內給藥：200-300mm3；腹腔給藥。第17頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六六、腫瘤的測量

皮下移植瘤：游標卡尺測量，稱重，小動物活體成像；

肺轉移瘤：肺表面結節(jié)數，小動物活體成像；第18頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六皮下移植瘤實驗：生存期較長，有如下情況者處死小鼠，記為死亡：腫瘤長徑達到2cm，或體積大于1cm3；蜷縮不動；毛發(fā)蓬松臟亂無光；對外界刺激無反應；體重明顯下降的（24h內下降2-3g）。七、小鼠生存期統(tǒng)計——治療終點轉移瘤實驗：一般生存期較短；第19頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六八、動物組織標本采集

收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定，HE染色觀察治療毒性；

治療實驗：收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標；免疫熒光實驗：收集新鮮組織，做冰凍切片；第20頁，共22頁，2023年，2月20日，星期六九、動物實驗倫理

悉心照料動物，保證正常生存條件；皮下移植瘤體