結(jié)直腸癌Tiam高表達(dá)與其啟動子低甲基化相關(guān)

結(jié)直腸癌Tiam高表達(dá)與其啟動子低甲基化相關(guān)第1頁/共24頁

結(jié)直腸癌Tiam1高表達(dá)與其啟動子低甲基化相關(guān)

第2頁/共24頁背景Tiam1:T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1Tiam1與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移Tiam1的表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明表觀遺傳學(xué)：DNA異常甲基化第3頁/共24頁

藍(lán)色區(qū)域?yàn)镃pG島，該CpG島長2183bp，跨越啟動子和第一外顯子，存在256個CpG位點(diǎn)Tiam1基因5’端CpG島預(yù)測

第4頁/共24頁去甲基化藥物處理HT29細(xì)胞前后Tiam1mRNA表達(dá)1.SW6202.HT29(5-aza-dC)3.HT29(對照)C.空白對照GAPDH(580bp)Tiam1(252bp)

marker123c第5頁/共24頁Ⅰ.116例配對結(jié)直腸癌組織中Tiam1蛋白的表達(dá)第6頁/共24頁第7頁/共24頁Tiam1蛋白在結(jié)直腸癌配對組織中的表達(dá)分布

*

Z=-4.608，P＝0.000#

Z＝-3.115，P＝0.002

第8頁/共24頁Z＝-2.584，P＝0.01

Tiam1蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

第9頁/共24頁Tiam1蛋白在癌組織中的表達(dá)與臨床病理資料之間的關(guān)系第10頁/共24頁Ⅱ.結(jié)直腸癌組織中Tiam1基因異常甲基化的研究第11頁/共24頁MSP原理第12頁/共24頁CMU2n2t12n12t31n31t48n48t83n83t116n116tmu212314883116nt部分配對組織中Tiam1DNA甲基化及其蛋白表達(dá)情況第13頁/共24頁MSP擴(kuò)增產(chǎn)物測序部分結(jié)果

umoo.未轉(zhuǎn)化的原始序列m.甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物u.未甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物第14頁/共24頁Z=-2.244,P=0.025

r=-0.494,P<0.001116例配對組織中Tiam1基因的甲基化狀況

232例組織中Tiam1蛋白表達(dá)與甲基化之間的相關(guān)性

第15頁/共24頁腫瘤組織Tiam1甲基化狀態(tài)與臨床病理資料之間的關(guān)系

第16頁/共24頁Ⅲ.結(jié)直腸癌細(xì)胞株中Tiam1基因異常甲基化的研究第17頁/共24頁Tiam1高表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株：LoVo細(xì)胞、

SW620細(xì)胞Tiam1低表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株：LS174T細(xì)胞Tiam1不表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株：HT29細(xì)胞第18頁/共24頁5-aza-dC處理對Tiam1mRNA在HT29及LS174T中表達(dá)的影響GAPDH(580bp)Tiam1(252bp)

1234cmarkerLS174T(+)LS174T(-)HT29(+)HT29(-)5-aza-dC第19頁/共24頁5-aza-dC（+）X2005-aza-dC（-）X200免疫細(xì)胞化學(xué)檢測5-aza-dC處理對HT29細(xì)胞中Tiam1蛋白表達(dá)的影響第20頁/共24頁免疫細(xì)胞化學(xué)檢測5-aza-dC處理對LS174T細(xì)胞中Tiam1蛋白表達(dá)的影響5-aza-dC（-）X2005-aza-dC（+）X200第21頁/共24頁1.SW6202.HT293.HT29(5-aza-dC)4.SW6205.LS174T6.LS174T(5-aza-dC)

123456GAPDHTiam1Westernblot法檢測5-aza-dC處理對HT29、LS174T細(xì)胞中Tiam1蛋白表達(dá)的影響第22頁/共2