(3.2)-2.2.3抗酸染色衛(wèi)生微生物檢驗實驗方法與技能

抗酸染色【原理】有些細菌，如結(jié)核分枝桿菌，細胞壁含有大量脂質(zhì)，一般不宜著色，需用強濃染液加溫或延長時間才能著色。一旦著色后可抵抗鹽酸酒精的脫色作用，這種特性為抗酸性，應(yīng)用此原理染色的方法為抗酸染色法。2023/4/152常用方法萋-尼（Ziehl-Neelsen）氏染色法（WHO推薦方法）金永（Kinyoun）染色法2023/4/153樣本：抗酸染色專用混合液試劑：抗酸染色液儀器：顯微鏡、生物安全柜其他：載玻片、接種環(huán)、酒精燈，玻片架等2023/4/154【實驗器材】抗酸染色專用混合液抗酸染色液萋-尼（Ziehl-Neelsen）氏染色法2023/4/155【方法】涂片制備用接種環(huán)取待檢樣本，在清潔無油脂玻片上涂開。自然干燥后，用片夾挾住玻片一端，通過火焰固定。2023/4/156【方法】染色初染：于涂面處滴加石炭酸復(fù)紅溶液，置于酒精燈火焰上方徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)。待蒸氣消失后再加溫，如此反復(fù)3～4次，約染色5~8min，水洗，瀝干。注意隨時添加染液，勿使染液煮干、煮沸。2023/4/157【方法】染色脫色：滴加3%的鹽酸酒精脫色，不時搖動玻片至無紅色脫落為止，水洗，瀝干。復(fù)染：滴加呂氏亞甲藍染液，染色0.5~1分鐘，水洗，印干后鏡檢?？顾峋t色；非抗酸菌—藍色?！窘Y(jié)果】結(jié)核分枝桿菌抗酸染色2023/4/159金永（Kinyoun）染色法（冷染法）【染色步驟】初染：涂片固定后加金永氏石碳酸復(fù)紅染色液染色15min，不必加熱。脫色：棄去初染液后，水洗，加金永氏脫色液脫色至無紅色為止，水洗。復(fù)染：滴加復(fù)染液亞甲藍染色30~60s，水洗，待干，油鏡鏡檢。2023/4/1510[結(jié)果]：抗酸菌染成紅色，非抗酸菌及細胞等均染成淡藍色。金永（Kinyoun）染色法痰液標本金永抗酸染色2023/4/1511【應(yīng)用】常用于分枝桿菌屬細菌的檢查。痰液、腦脊液或胸腹水中找到抗酸菌，具有診斷意義。常取膿性或干酪樣痰標本，制成約15mm×20mm大小的卵圓形厚涂片。染色后，肉眼觀察痰膜呈淡藍色或藍色，不得有紅色斑塊，痰膜脫落部分在10%以下。若發(fā)現(xiàn)即可報告“找到抗酸桿菌”。2023/4/1512涂片鏡檢結(jié)果的報告方式半定量報告齊-尼抗酸染色（×1000）未找到抗酸菌0可疑抗酸菌：重新送檢1~2/300視野1+1~9/100視野2+1~9/10視野3+1~9/視野4+>9/視野【應(yīng)用】2023/4/1513【注意事項】廢棄標本、實驗操作相關(guān)污染物須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方能丟棄或清洗。涂片應(yīng)在生物安全柜中進行。為防止交叉污染，一張載玻片只能做一份樣本涂片。2023/4/1514【知識拓展】主要采用冷染法操作簡單染色標準化減少污染提高效率和安全性抗酸染色儀2023/4/1515【思考】某患者痰液樣本抗酸染色結(jié)果陽性，該患者一定是感染了結(jié)核分枝桿菌嗎？答案：不一