第九章維生素類藥物的分析

第九章維生素類藥物的分析第1頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一概述一、定義

維生素是維持人體正常代謝功能所必需的微量生物活性物質(zhì)，主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)，體內(nèi)不能自行合成，必須從食物中攝取。第2頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一VitA、D2、D3、E、K1

等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺VitMVitPP二、分類第3頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

三、分析方法本類藥物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化學(xué)法和物理化學(xué)法，多依據(jù)其生物特性及理化性質(zhì)進(jìn)行，但目前常用的分析方法是化學(xué)法或物理化學(xué)法。第4頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)維生素A（VitaminA）

維生素A包括有維生素A1（視黃醇）、去氫維生素A（維生素A2）和去水維生素A（維生素A3）等，其中維生素A1活性最高，維生素A2的生物活性是維生素A1的30-40%，維生素A3的生物活性是維生素A1的0.4%，故通常所說(shuō)的維生素A系指維生素A1。第5頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯R:一、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)第6頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1、為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯

（1）具有UV吸收

（2）存在多種立體異構(gòu)化合物

（3）易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)第7頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一△或有金屬離子存在時(shí)更易氧化2、不穩(wěn)定性第8頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一3、與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)CHCl34、溶解性不溶于水易溶于有機(jī)溶劑和植物油等第9頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1、三氯化銻反應(yīng)CHCl3二、鑒別試驗(yàn)

維生素A在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇氯仿溶液中呈現(xiàn)不穩(wěn)定的藍(lán)色，再變?yōu)樽霞t色。第10頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一反應(yīng)條件：①要求無(wú)水，如存在水可能產(chǎn)生氯化氧銻（SbOCl

）。②配制所用的氯仿不能含醇（應(yīng)用無(wú)醇氯仿）和光氣（COCl2）。③三氯化銻有腐蝕性。第11頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一2、紫外吸收光譜維生素A分子中含有5個(gè)共軛雙鍵，其無(wú)水乙醇液在326nm波長(zhǎng)處有最大吸收。當(dāng)在鹽酸催化下加熱，即發(fā)生脫水反應(yīng)生成去水維生素A（A3）。去水維生素A比維生素A多一個(gè)共軛雙鍵，其最大吸收波長(zhǎng)向紅移，在340～390nm波長(zhǎng)間出現(xiàn)3個(gè)最大吸收峰。3、薄層色譜第12頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一三、含量測(cè)定1、紫外分光光度法利用維生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共軛體系結(jié)構(gòu)，在325～328nm處有選擇性吸收峰，故可進(jìn)行含量測(cè)定。第13頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）均對(duì)測(cè)定有干擾，故采用三點(diǎn)校正法第14頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

三點(diǎn)校正法（1）條件：①雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減??；②物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。第15頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（2）波長(zhǎng)的選擇：①1

VitA的max（328nm）②23

分別在1的兩側(cè)各選一點(diǎn)第16頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（3）測(cè)定方法：①第一法（直接測(cè)定法）測(cè)定對(duì)象VitA醋酸酯第17頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一②第二法（皂化法）：用醇制氫氧化鉀加熱皂化（水解），用乙醚提取，揮干溶劑，殘?jiān)卯惐既芙?，測(cè)定含量。測(cè)定對(duì)象VitA醇第18頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

第一法第二法測(cè)定對(duì)象維生素A醋酸酯維生素A醇方法直接取樣，測(cè)定皂化提取，測(cè)定溶劑環(huán)己烷異丙醇max

328nm325nm測(cè)定波長(zhǎng)5個(gè)4個(gè)換算因數(shù)19001830第一法與第二法的區(qū)別第19頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（二）三氯化銻比色法維生素A可與三氯化銻的氯仿溶液作用，產(chǎn)生藍(lán)色，在618～620nm波長(zhǎng)處有最大吸收?？捎糜诰S生素A的比色測(cè)定。要求在5～10秒內(nèi)測(cè)定。本法缺點(diǎn)多，已被UV法取代。（三）高效液相色譜法第20頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)HClCl-維生素B1（鹽酸硫胺）第二節(jié)維生素B1的分析第21頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（1）溶解性①易溶于水②水溶液呈酸性（2）UV共軛雙鍵λmax=246nm（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第22頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一嘧啶環(huán)——

伯氨噻唑環(huán)——

季銨1、可與酸成鹽2、與生物堿↓→↓3、含量測(cè)定——

非水堿量法（3）硫色素反應(yīng)（4）堿性第23頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（二）鑒別試驗(yàn)1、硫色素反應(yīng)（VitB1的專屬反應(yīng)）

第24頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一VitB1H+H+H+H+2、沉淀反應(yīng)第25頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1、非水溶液滴定法（藥典用于測(cè)定原料藥）原理：利用噻唑環(huán)上季銨和嘧啶環(huán)上氨基的弱堿性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量測(cè)定第26頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一2、UV分光光度法（藥典用于測(cè)定片劑、注射劑）（1）原理：維生素B1分子中具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度，根據(jù)取樣量計(jì)算含量。（2）方法第27頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一NaOH（三）硫色素?zé)晒夥ㄔ恚?）激發(fā)波長(zhǎng)365nm發(fā)射波長(zhǎng)435nm（2）方法與計(jì)算第28頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇SdAb對(duì)照液供試液第29頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（3）特點(diǎn)①靈敏度高，線性范圍寬②代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析第30頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一L－抗壞血酸第三節(jié)維生素C的分析第31頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一①易溶于水②水溶液呈酸性(一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1、溶解性第32頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572、酸性一元酸第33頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一二烯醇結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)3、強(qiáng)還原性第34頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng)手性C（C4、C5）4、光學(xué)活性**第35頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一△糖類的顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相似5、具糖的性質(zhì)第36頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一6、UV特征第37頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（二）鑒別試驗(yàn)第38頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1、與AgNO3反應(yīng)2、與2，6-二氯靛酚反應(yīng)(ChP2000)氧化型玫瑰紅色還原型藍(lán)色OHˉ(ChP2000)第39頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一3、與堿性酒石酸銅反應(yīng)USP4、與KMnO4反應(yīng)5、糖類的反應(yīng)6、紫外分光光度法第40頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（三）雜質(zhì)檢查（略）1、溶液的澄清度與顏色檢查2、鐵、銅離子的檢查：原子吸收分光光度第41頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一指示劑淀粉指示液原理（1）1、碘量法（四）含量測(cè)定第42頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過(guò)的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6（2）方法第43頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一①酸性環(huán)境d.HCl

②新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度（3）討論③立即滴定減免水中O2的干擾減少O2的干擾第44頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（二）2，6-二氯靛酚鈉滴定法USPJP原理（1）第45頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一自身指示終點(diǎn)法（2）方法第46頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一②快速滴定2min內(nèi)

①酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾③剩余比色測(cè)定

（定量過(guò)量）（測(cè)剩余染料）（3）討論第47頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（4）缺點(diǎn)

需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周不穩(wěn)定干擾多氧化力較強(qiáng)（三）高效液相色譜法第48頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱。目前已知的維生素D類物質(zhì)至少有十種之多，它們都是甾醇的衍生物。中國(guó)藥典主要收載有維生素D2、D3原料藥；維生素D2膠丸和注射劑；維生素D，注射劑。USP(24)收載有片劑、膠囊、口服液等劑型。BP(2000)收載的劑型有片劑、口服液、注射液以及鈣與維生素D2、D3制成的復(fù)方片劑。

第四節(jié)維生素D的分析第49頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(一)結(jié)構(gòu)

維生素D2為9，10-開環(huán)麥角甾5，7，10(19)，22-四烯3β-醇，又名骨化醇或麥角骨化醇。維生素D3為9，10-開環(huán)膽甾-5，7，10(19)三烯-3β-醇，又名膽骨化醇。兩者的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相似，其差別僅是維生素D2比維生素D3在側(cè)鏈上多一個(gè)雙鍵，C24上多一個(gè)甲基。

一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第50頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一VD2VD3第51頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(二)性質(zhì)

1、性狀維生素D2、D3均為無(wú)色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無(wú)臭，無(wú)味；遇光或空氣均易變質(zhì)。

2、溶解性維生素D2在氯仿中極易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；維生素D3在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。

3、不穩(wěn)定性維生素D2、D3因含有多個(gè)烯鍵，所以極不穩(wěn)定，遇光或空氣及其他氧化劑均發(fā)生氧化而變質(zhì)，使效價(jià)降低，毒性增強(qiáng)。本品對(duì)酸也不穩(wěn)定。

4、旋光性維生素D2具有6個(gè)手性碳原子，而維生素D3有5個(gè)手性碳原子，所以二者均具有旋光性。

第52頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一5、顯色反應(yīng)

本品的氯仿溶液，加醋酐與硫酸，初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙詈笞優(yōu)榫G色。本反應(yīng)為甾類化合物的共有反應(yīng)。6．紫外吸收特性取本品，加無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成每10ml中約含10ug的溶液。照分光光度法，在265nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，維生素D2的吸收系數(shù)為460-490；維生素D3的吸收系數(shù)為465-495。第53頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(一)顯色反應(yīng)

1、與醋酐－濃硫酸反應(yīng)取維生素D2或D3約0.5mg，加氯仿5m1溶解后，加醋酐0.3ml與硫酸0.1ml，振搖，維生素D2初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?，最后成綠色。維生素D3初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?、藍(lán)綠色，最后變?yōu)榫G色。

2、與三氯化銻反應(yīng)取本品適量(約1000單位)，加1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化銻試液4ml，溶液即顯橙紅色，逐漸變?yōu)榉奂t色。

3、其它顯色反應(yīng)維生素D與三氯化鐵反應(yīng)呈橙黃色，與二氯丙醇和乙酰氯試劑反應(yīng)顯綠色，均可用于鑒別，但專屬性不強(qiáng)。二、鑒別試驗(yàn)第54頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(二)比旋度鑒別

取維生素D2，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成每1m1中含40mg的溶液，依法測(cè)定，比旋度為+102.5。至+107.5。；維生素D3加無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含5mg的溶液，依法測(cè)定，比旋度為十105。至+112。(二者均應(yīng)于容器開啟后30min內(nèi)取樣，并在溶液配制后30min內(nèi)測(cè)定)。

(三)其他鑒別方法

維生素D2、D3可用薄層色譜法、HPLC法和制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。此外，亦可通過(guò)其紫外、紅外吸收光譜的特征加以鑒別。第55頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(四)維生素D2、D3的區(qū)別反應(yīng)

取維生素D10mg，溶于96％乙醇10ml中。取此液0.1m1，加乙醇1ml和85％硫酸5ml。維生素D2顯紅色，在570nm波長(zhǎng)處有最大吸收；維生素D3顯黃色，在495nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

此反應(yīng)也用于D2和D3的含量測(cè)定。第56頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(一)麥角甾醇的檢查(二)前維生素D的光照產(chǎn)物三、雜質(zhì)檢查（略）第57頁(yè)，共66頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(一)維生素D測(cè)定法（二）討論四、含量測(cè)定（略）

維生素D的含量測(cè)定方法各國(guó)藥典各異。USP(24)關(guān)于維生素D的測(cè)定方法有