方藥設(shè)計(jì)毒理研究

方藥設(shè)計(jì)毒理研究第1頁(yè)/共123頁(yè)藥物毒理研究第2頁(yè)/共123頁(yè)近半個(gè)世紀(jì)國(guó)外發(fā)生的重大要害事件年代藥物毒性表現(xiàn)受害人數(shù)53非那西丁腎損害、溶血2000人，死亡500人56三苯乙醇白內(nèi)障、陽(yáng)痿、1000人，死亡占%56反應(yīng)停海豹樣畸胎>1萬(wàn)人，死亡5千人67氨苯唑啉肺動(dòng)脈高壓70%用藥者60異丙腎氣霧劑心律失常、心衰死亡3500人63氯碘喹啉脊髓變性、失明>7856人，死5%33已烯雌酚下代陰道腺癌>300人68心得寧角膜、心包、腹膜損害>2257人藥物不良反應(yīng)的發(fā)展史第3頁(yè)/共123頁(yè)國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心

發(fā)布藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)乙雙嗎啉—白血病壯骨關(guān)節(jié)炎—肝損害清開靈注射液—過(guò)敏反應(yīng)雙黃連注射液—過(guò)敏反應(yīng)苯甲醇—兒童臂攣縮癥第4頁(yè)/共123頁(yè)藥名類別上市年代撤出時(shí)間芬氟拉明（fenfluramine）減肥藥19931997.6.17右芬氟拉明（dexfenfluramine）減肥藥97.9.151998.4.29特非那定（ferfenadine）抗組胺藥19851998.2.27米貝拉地爾（mibefradil）鈣拮抗藥97.6.201998.6.8西沙必利（cisapride）胃動(dòng)力藥00.2.292000.7近期從美國(guó)市場(chǎng)上撤出的處方藥（1）第5頁(yè)/共123頁(yè)藥名類別上市年代撤出時(shí)間曲格列酮（troglitazone）胰島素增敏藥1997.1.292000.3.2阿洛司瓊（alosetron）5-HT拮抗藥2000.2.92000.11.28格帕沙星（grepafexacn）抗菌藥1997.11.61997.11.1溴芬酸鈉（bromfenacsodium）鎮(zhèn)痛藥1997.7.151998.6.22西立伐他停（cerivastatin）降脂藥1999.12.122001.8.8近期從美國(guó)市場(chǎng)上撤出的處方藥（2）第6頁(yè)/共123頁(yè)中藥需進(jìn)行系統(tǒng)毒理學(xué)研究

長(zhǎng)期用藥安全性了解較少

長(zhǎng)期用藥之安全性了解較少

“無(wú)毒”中藥長(zhǎng)期給藥可致器質(zhì)性損害

新生兒溶血癥/禁用黃連事件；小柴胡湯/間質(zhì)性肺炎第7頁(yè)/共123頁(yè)“替代”用中藥木通/關(guān)木通；粉防己/廣防己；馬兜鈴酸、馬兜鈴酰胺所致急性腎衰.

德國(guó)聯(lián)邦藥品和醫(yī)療用品局96年6月限制使用番瀉、鼠李皮、大黃、蘆薈等含蒽醌類中藥.

一、二類中藥/有效成份、部位、活性成分濃縮/藥效、毒性增強(qiáng).第8頁(yè)/共123頁(yè)1.臨床前毒理學(xué)研究藥品臨床前毒理學(xué)研究的重要性

通過(guò)受試藥的毒理學(xué)試驗(yàn)，確定受試藥的劑量與毒性作用的相關(guān)性以及藥物的安全劑量范圍；

安全性研究的重要性和局限性第9頁(yè)/共123頁(yè)

認(rèn)識(shí)藥物毒性作用的靶器官和靶組織，以確定藥物毒性作用的選擇性；

觀察藥物毒性作用的發(fā)生、臨床特征及發(fā)展過(guò)程是否可逆，以判斷藥物毒性的性質(zhì)。這些研究結(jié)果是預(yù)測(cè)藥品臨床應(yīng)用安全性的重要依據(jù)。第10頁(yè)/共123頁(yè)

例:50年代中期，法國(guó)上市外用藥二碘二乙基錫，因動(dòng)物毒性研究不充分，缺乏初期臨床安全性評(píng)價(jià)，藥品倉(cāng)促上市應(yīng)用造成207例中毒，110人死亡，再次提醒人們認(rèn)識(shí)新藥研究中臨床前毒理學(xué)研究的重要性。第11頁(yè)/共123頁(yè)藥品臨床前毒理學(xué)研究的局限性

人體臨床用藥的不良反應(yīng)和藥品動(dòng)物毒性研究的相關(guān)率不及25%。

實(shí)施GLP是提高藥品毒理學(xué)研究質(zhì)量的重要保證。第12頁(yè)/共123頁(yè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺乏人所具有的對(duì)藥物毒性作用的主覺(jué)反應(yīng)；

毒理試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有限，發(fā)生率低的毒性反應(yīng)，難以經(jīng)小樣本實(shí)驗(yàn)得以發(fā)現(xiàn)；

所用動(dòng)物均系實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)品系，且多為健康動(dòng)物，對(duì)藥物的反應(yīng)性多較單一。

人體的疾病因素，可能影響人體對(duì)藥物的反應(yīng)性，以致產(chǎn)生在臨床前毒性試驗(yàn)中難以觀察到的毒性現(xiàn)象。

人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在藥物代謝動(dòng)力學(xué)方面的差異，亦會(huì)造成人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物毒性反應(yīng)的差異。藥品臨床前毒理學(xué)研究局限性的原因：第13頁(yè)/共123頁(yè)2.上市前藥品臨床安全性評(píng)價(jià)存在局限性的原因2)

上市前臨床試驗(yàn)療程一般較短，觀察期亦較短。一些需經(jīng)較長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用才能發(fā)生的反應(yīng)，或停藥后的滯后不良反應(yīng)，難以在臨床試驗(yàn)期間被觀察到；1)

上市前藥品臨床試驗(yàn)病例數(shù)相對(duì)較少，一些低頻度不良反應(yīng)，很難在此期間被發(fā)現(xiàn)；第14頁(yè)/共123頁(yè)3)

II期和III期臨床試驗(yàn)，受入選條件的限制（入選病例年齡、合并癥均有限制），不可能觀察到受試藥品對(duì)特殊人群的毒性作用；4)

對(duì)照性臨床試驗(yàn)的觀測(cè)指標(biāo)只限于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)規(guī)定的內(nèi)容，觀察臨床反應(yīng)，可能被疏漏，導(dǎo)致臨床評(píng)價(jià)的片面性。5)

不可能認(rèn)識(shí)偶見(jiàn)不良反應(yīng)（0.1-1%）和罕見(jiàn)不良反應(yīng)（<0.01%）第15頁(yè)/共123頁(yè)

我國(guó)1979年頒布“藥政管理法”

1985年頒布“新藥審批法”

1999年SDA頒布GLP及GCP2001.12頒布“藥品管理法”加強(qiáng)藥政管理第16頁(yè)/共123頁(yè)藥物急性毒性研究

第17頁(yè)/共123頁(yè)概述急性毒性是指動(dòng)物一次或24小時(shí)內(nèi)多次接受一定劑量的受試物，動(dòng)物在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。急性毒性目的:為新藥的研發(fā)提供參考信息。

第18頁(yè)/共123頁(yè)二、急性毒性試驗(yàn)的基本原則：（一）試驗(yàn)管理急性毒性試驗(yàn)必須執(zhí)行“藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）”。（二）試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則。第19頁(yè)/共123頁(yè)三、急性毒性試驗(yàn)的基本內(nèi)容（一）受試物急性毒性研究的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)受試物和上市藥品，因此建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。溶媒或賦形劑：選擇合適的溶媒或賦形劑。第20頁(yè)/共123頁(yè)（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般應(yīng)采用哺乳動(dòng)物，雌雄各半。如臨床為單性別用藥，則可采用相對(duì)應(yīng)的單一性別的動(dòng)物。大、小鼠為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其他動(dòng)物也可使用，當(dāng)采用非嚙齒類動(dòng)物更適合進(jìn)行研究時(shí)，盡可能采用非嚙齒類動(dòng)物。嚙齒類動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ級(jí)及其以上等級(jí)要求，非嚙齒類動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ級(jí)及其以上等級(jí)要求。通常采用健康成年動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。如果受試物擬用于兒童，建議考慮采用幼年動(dòng)物。動(dòng)物初始劑量不應(yīng)超過(guò)或低于平均體重的20％第21頁(yè)/共123頁(yè)（三）試驗(yàn)分組除設(shè)受試物合適的劑量組外，還應(yīng)設(shè)空白（和／或陰性）對(duì)照組。（四）給藥途徑給藥途徑不同，受試物的吸收率、吸收速度和暴露量會(huì)有所不同，為了盡可能觀察到動(dòng)物的急性毒性反應(yīng)，可采用多種給藥途徑進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)研究。給藥途徑一般采用兩種給藥途徑，其中一種應(yīng)與擬臨床給藥途徑一致，如不采用擬臨床途徑給藥，必須充分說(shuō)明理由。灌胃給藥時(shí)應(yīng)空腹。第22頁(yè)/共123頁(yè)（五）給藥容量：灌胃給藥，大鼠給藥容積每次一般不超過(guò)20ml/kg，小鼠每次一般不超過(guò)40ml/kg；其他動(dòng)物及給藥途徑的給藥容量可參考相關(guān)文獻(xiàn)及根據(jù)實(shí)際情況決定。（六）觀察期限：一般為7～14天，如果毒性反應(yīng)出現(xiàn)較慢應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)觀察時(shí)間，如觀察時(shí)間不足7天，應(yīng)充分說(shuō)明理由。一般應(yīng)詳細(xì)觀察給藥后4小時(shí)內(nèi)動(dòng)物的反應(yīng)情況，然后每天上、下午各觀察一次。第23頁(yè)/共123頁(yè)（七）觀察指標(biāo)：包括動(dòng)物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動(dòng)物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。對(duì)瀕死及死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖，其他動(dòng)物在觀察期結(jié)束后進(jìn)行大體解剖，當(dāng)發(fā)現(xiàn)器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，則對(duì)改變的器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。第24頁(yè)/共123頁(yè)（八）結(jié)果處理和分析1、根據(jù)所觀察到的各種反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間等，分析各種反應(yīng)在不同劑量時(shí)的發(fā)生率、嚴(yán)重程度。根據(jù)觀察結(jié)果歸納分析，判斷每種反應(yīng)的量效關(guān)系及隨時(shí)間的變化。2、判斷出現(xiàn)的各種反應(yīng)可能涉及的器官、組織或系統(tǒng)等。3、根據(jù)大體解剖中肉眼可見(jiàn)的病變和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果，初步判斷可能的毒性靶器官。組織病理學(xué)檢查應(yīng)附有病理學(xué)檢查負(fù)責(zé)人簽字的報(bào)告及有病變組織的病理照片。第25頁(yè)/共123頁(yè)4、根據(jù)不同劑量組各種反應(yīng)的發(fā)生率、動(dòng)物死亡情況等，判斷動(dòng)物對(duì)受試物的耐受性、最大無(wú)反應(yīng)劑量、最小毒性反應(yīng)劑量、最大耐受劑量、最小致死劑量等，初步判斷藥物的安全范圍。5、說(shuō)明所使用的計(jì)算方法和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，提供所選用方法合理性的依據(jù)。6、應(yīng)根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，提示在其他安全性試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)、質(zhì)量控制方面應(yīng)注意的問(wèn)題，同時(shí)，結(jié)合其他安全性試驗(yàn)、有效性試驗(yàn)及質(zhì)量可控性試驗(yàn)結(jié)果，權(quán)衡利弊，分析受試物的開發(fā)前景。第26頁(yè)/共123頁(yè)急毒試驗(yàn)的一般研究方法致死量法：藥物毒性的大小，可用動(dòng)物的致死量（Lethaldose）來(lái)表示，因?yàn)閯?dòng)物生與死的生理指標(biāo)較其他指標(biāo)明顯、客觀、容易掌握。在測(cè)定致死量的同時(shí)，還應(yīng)仔細(xì)觀察動(dòng)物死亡前的中毒反應(yīng)情況。致死量的測(cè)定主要包括最小致死量（LD5）、半數(shù)致死量（LD50）和最大致死量（LD95）。由于LD50的測(cè)定較簡(jiǎn)便，故致死量的測(cè)定一般采用LD50。第27頁(yè)/共123頁(yè)最大耐受量試驗(yàn)：最大耐受量（Maximaltolerancedose,MTD）是指動(dòng)物能夠耐受的而不引起動(dòng)物死亡的最高劑量。從獲取安全性信息的角度考慮，有時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的異常反應(yīng)和病理過(guò)程的觀察、分析，較以死亡為觀察指標(biāo)更有毒理學(xué)意義。第28頁(yè)/共123頁(yè)最大給藥量試驗(yàn)：最大給藥量指單次或24小時(shí)內(nèi)多次（2-3次）給藥所采用的最大給藥劑量。最大給藥量試驗(yàn)是在合理的給藥濃度及合理的給藥容量的條件下，以允許的最大劑量給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，觀察動(dòng)物出現(xiàn)的反應(yīng)。有許多中藥、天然藥物毒性較低，如單次給藥量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于藥效學(xué)試驗(yàn)等效劑量時(shí)，可不必進(jìn)行更大劑量的觀察。第29頁(yè)/共123頁(yè)其他方法固定劑量法（Fixed-doseprocedure）劑量累積試驗(yàn)法近似致死劑量法(ApproximateLethalDose–ALD)擴(kuò)展試驗(yàn)法劑量探測(cè)試驗(yàn)法第30頁(yè)/共123頁(yè)固定劑量法（Fixed-doseprocedure）：1984年由英國(guó)毒理學(xué)會(huì)提出，不以死亡而是以明顯的毒性體征作為觀察終點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。試驗(yàn)選擇5、50、500和2000mg/kg四個(gè)固定劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，特殊情況下可增加5000mg/kg劑量。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物首選大鼠，給藥前禁食6-12小時(shí)，給受試物后再禁食3-4小時(shí)。采用一次給藥的方式進(jìn)行。如無(wú)資料證明雄性動(dòng)物對(duì)受藥試物更敏感，首先用雌性動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試。固定劑量法（Fixed-doseprocedure）第31頁(yè)/共123頁(yè)無(wú)死亡結(jié)束試驗(yàn)初始量5mg50mg500mg2000mg無(wú)死亡150mg有死亡有死亡無(wú)毒性反應(yīng)無(wú)毒性反應(yīng)無(wú)死亡15mg無(wú)死亡結(jié)束試驗(yàn)1)首先用雌性動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試。（有毒性）（有毒性）每個(gè)劑量給一只動(dòng)物，預(yù)試一般不超過(guò)5只動(dòng)物。每個(gè)劑量試驗(yàn)之間至少應(yīng)間隔24小時(shí)。給受試物后的觀察期至少7天，如動(dòng)物的毒性反應(yīng)到第7天仍然存在，尚應(yīng)繼續(xù)觀察7天。第32頁(yè)/共123頁(yè)2）正式試驗(yàn)動(dòng)物：每個(gè)劑量至少用10只動(dòng)物，雌雄各半。劑量：根據(jù)預(yù)試的結(jié)果，選擇一個(gè)可能產(chǎn)生明顯毒性但又不引起死亡的劑量進(jìn)行試驗(yàn)。周期：給藥后至少應(yīng)觀察2周，根據(jù)具體特點(diǎn)可適當(dāng)延長(zhǎng)。觀察指標(biāo)：觀察記錄內(nèi)容包括：體重、皮膚、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循環(huán)、自主活動(dòng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為表現(xiàn)等。毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間，準(zhǔn)確的動(dòng)物死亡時(shí)間。所有動(dòng)物（死亡或處死的動(dòng)物）均應(yīng)進(jìn)行尸檢，尸檢異常的器官應(yīng)作病理組織學(xué)檢查。仔細(xì)觀察和詳細(xì)記錄。給藥當(dāng)天至少應(yīng)觀察記錄兩次，以后可每天一次。試驗(yàn)結(jié)果參考下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。第33頁(yè)/共123頁(yè)劑量mg/kg試驗(yàn)結(jié)果存活數(shù)<100%100%存活毒性表現(xiàn)明顯100%存活無(wú)明顯中毒5.0高毒(Verytoxic)(LD50≤25mg/kg)有毒（Toxic）（LD5025-200mg/kg）用50mg/kg試驗(yàn)50.0有毒或高毒，用5mg/kg進(jìn)行試驗(yàn)有害（Harmful）（LD50200-2000mg/kg）用500mg/kg試驗(yàn)500.0有毒或有害，用50mg/kg試驗(yàn)LD50>2000mg/kg用2000mg/kg試驗(yàn)2000.0用500mg/kg試驗(yàn)該化合物無(wú)嚴(yán)重急性中毒的危險(xiǎn)性固定劑量法試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)

第34頁(yè)/共123頁(yè)劑量累積法（金字塔法，Pyramidingdosagedesign）動(dòng)物：8只非嚙齒類動(dòng)物，對(duì)照和給藥組各4只，雌雄各2。劑量：劑量的設(shè)計(jì)通常是1、3、10、30、100、300、1000、3000mg/kg，或10、20、40、80、160、320、640、1280mg/kg，通常隔日給予下一個(gè)高劑量，劑量逐漸加大，直到出現(xiàn)動(dòng)物死亡時(shí)或達(dá)到劑量上限時(shí)止。判斷標(biāo)準(zhǔn)：①?zèng)]有動(dòng)物死亡時(shí)，最高劑量或限制劑量小于MLD和LD50；②某一劑量所有動(dòng)物均出現(xiàn)死亡時(shí)，MLD和LD50應(yīng)在最后兩個(gè)劑量之間；③當(dāng)二個(gè)劑量均出現(xiàn)部分動(dòng)物死亡，MLD位于首次出現(xiàn)死亡的劑量和前一低劑量之間，LD50則應(yīng)在首次出現(xiàn)動(dòng)物死亡的劑量和所有動(dòng)物均死亡的劑量之間；④假如沒(méi)有動(dòng)物死亡發(fā)生，常常以最高劑量給予動(dòng)物5-7天，以確定后續(xù)的重復(fù)給藥實(shí)驗(yàn)中高劑量的選擇。第35頁(yè)/共123頁(yè)近似致死劑量法(ApproximateLethalDose–ALD)1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：6只健康Beagle犬（4-6月齡）或猴（2-3歲），選用其他物種的動(dòng)物時(shí)應(yīng)說(shuō)明理由。2）試驗(yàn)過(guò)程：估計(jì)毒性范圍：根據(jù)小動(dòng)物的毒性試驗(yàn)結(jié)果和有關(guān)資料，估計(jì)可能引起毒性和死亡的劑量范圍。設(shè)計(jì)劑量序列表：按50%遞增法，設(shè)計(jì)出數(shù)個(gè)序列劑量。估計(jì)出可能致死劑量范圍。

近似致死劑量范圍：每間隔一個(gè)劑量給一只動(dòng)物，測(cè)出最低致死劑量和最高非致死劑量；然后用二者之間的劑量給一只動(dòng)物，如果該劑量下動(dòng)物未發(fā)生死亡，則該劑量與最低致死劑量之間的范圍為近似致死劑量范圍。如果該劑量下動(dòng)物死亡，則該劑量與最高非致死劑量間的范圍為近似致死劑量范圍。

第36頁(yè)/共123頁(yè)50mg/kg75mg/kg113mg/kg169mg/kg253mg/kg380mg/kg↑

最高非致死量

最低致死量

近似致死量范圍↑

↑

死亡存活死亡存活近似致死量范圍113~169mg/kg169~253mg/kg近似致死劑量范圍測(cè)定過(guò)程劑量序列第37頁(yè)/共123頁(yè)上下法（階梯法，序貫法，UpandDownMethod）

Dixon和Mood首次提出，1985年Bruce改進(jìn)，OECD和EPA推薦方法之一。特點(diǎn)：①節(jié)省動(dòng)物；②可觀察毒性表現(xiàn)和估算LD50及其可信限；③適合動(dòng)物快速死亡藥物。1）限度實(shí)驗(yàn)用于受試物可能沒(méi)有毒性的情況。試驗(yàn)劑量為2000mg/kg，特殊情況下也可使用5000mg/kg。2000mg/kg（1只）

存活主試驗(yàn)死亡2000mg/kg

（4只）

3或3只以上死亡

LD50<2000mg/kg

3或3只以上存活

LD50>2000mg/kg

主試驗(yàn)觀察14天結(jié)束試驗(yàn)第38頁(yè)/共123頁(yè)5000mg/kg（1只）

存活主試驗(yàn)死亡3或3只以上死亡

LD50<5000mg/kg

3或3只以上存活

LD50>5000mg/kg

主試驗(yàn)5000mg/kg

（2只）

存活LD50>5000mg/kg

有死亡5000mg/kg

（1只）

5000mg/kg

（1只）

結(jié)束試驗(yàn)結(jié)束試驗(yàn)觀察14天觀察14天第39頁(yè)/共123頁(yè)2）主試驗(yàn):

每次給藥1只動(dòng)物，間隔至少48小時(shí)。劑量序列選擇：①1.75、5.5、17.5、55.3、175、553、1750mg/kg（R≈3.16)②在得到致死量范圍后，以R=1.2劑量序列進(jìn)行試驗(yàn)，如：52.5~175則50、60、72、86.4、104、124、149、179低于LD50估計(jì)值（1只）

存活死亡高1級(jí)劑量低1級(jí)劑量死亡存活低1級(jí)劑量死亡結(jié)束試驗(yàn)存活高1級(jí)劑量結(jié)束試驗(yàn)序貫法軟件下載：/oppfead1/harmonization/第40頁(yè)/共123頁(yè)不同注冊(cè)類別新藥急性毒性試驗(yàn)的一般要求1．中藥、天然藥物1）中藥1-5類：其物質(zhì)基礎(chǔ)較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變或較少應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，一般采用兩種途徑和兩種動(dòng)物（嚙齒類和非嚙齒類）給藥。2）臨床為非靜脈給藥：則增加用靜脈給藥方式，以便全面暴露受試物的毒性反應(yīng)。如果因?yàn)橹苿诜┑仍虿荒懿捎渺o脈給藥，應(yīng)充分說(shuō)明理由，此時(shí)可采用另一種給藥途徑或僅采用一種擬臨床給藥途徑進(jìn)行毒性反應(yīng)的觀察。3）中藥6類（復(fù)方制劑）：如處方組成符合中醫(yī)藥理論，有一定的臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，可僅采用一種動(dòng)物，按擬臨床給藥途徑進(jìn)行；如復(fù)方制劑為天然藥物復(fù)方制劑，應(yīng)采用兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（嚙齒類和非嚙類），按擬臨床給藥途徑進(jìn)行給藥；如處方中含有天然藥物、有效成份或化學(xué)藥品，則應(yīng)對(duì)上述藥用物質(zhì)進(jìn)行急性毒性的相互作用研究。4）中藥7類（改變上市藥品給藥途徑，不包括非注射劑改為注射劑）：可用一種動(dòng)物，比較改變前后兩種不同給藥途徑的毒性反應(yīng)。5）中藥8類（改變上市藥品劑型或工藝但不改變給藥途徑）：如制備工藝有質(zhì)的改變，建議采用一種動(dòng)物，按擬臨床給藥途徑進(jìn)行急性毒性的觀察。6）中藥9類（增加新適應(yīng)癥或功能主治的品種）：一般不需進(jìn)行急性毒性研究。第41頁(yè)/共123頁(yè)2．化學(xué)藥品1）西藥1-2類（國(guó)內(nèi)外未上市的藥品和新給藥途徑制劑）：一般采用兩種途徑和兩種動(dòng)物（嚙齒類和非嚙齒類）給藥。如只有靜脈注射制劑，只需一種靜脈給藥途徑。復(fù)方藥物需進(jìn)行急性毒性拆方分析。2）西藥3類（尚未在國(guó)內(nèi)上市藥品）：提供資料。3）西藥4類（改變酸根、堿基，不改變其藥理作用的原料藥及其制劑）：如已在國(guó)外內(nèi)上市，只需提供資料。第42頁(yè)/共123頁(yè)藥物長(zhǎng)期毒性研究第43頁(yè)/共123頁(yè)概述長(zhǎng)期毒性研究（重復(fù)給藥毒性研究）是反復(fù)多次給藥的毒性試驗(yàn)的總稱，描述動(dòng)物重復(fù)給予受試物后的毒性特征，它是非臨床安全性評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容。第44頁(yè)/共123頁(yè)長(zhǎng)期毒性研究的主要目的①發(fā)現(xiàn)受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、量效和時(shí)效關(guān)系、可逆性等；②推測(cè)受試物重復(fù)給藥的臨床毒性靶器官或靶組織；③預(yù)測(cè)臨床試驗(yàn)的起始劑量和重復(fù)用藥的安全范圍；④提示臨床試驗(yàn)中需重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的安全性指標(biāo)；⑤對(duì)毒性作用強(qiáng)、毒性癥狀發(fā)生迅速、安全范圍小的受試物，長(zhǎng)期毒性研究還可以為臨床試驗(yàn)中的解毒或解救措施提供參考信息。第45頁(yè)/共123頁(yè)中藥在我國(guó)已有幾千年的應(yīng)用歷史，有豐富的臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，相對(duì)化學(xué)藥而言多數(shù)中藥具有毒性低的特點(diǎn)。但是，中藥的低毒和無(wú)毒是相對(duì)的。當(dāng)前，各種新技術(shù)、新工藝不斷應(yīng)用于中藥新藥的開發(fā)，而且從中藥、天然藥物中提取的有效成分、有效部位及其制劑日益增多，實(shí)際上很多中藥、天然藥物新藥已不同于傳統(tǒng)意義上的中藥，因此對(duì)其臨床前安全性評(píng)價(jià)應(yīng)給予足夠的重視。第46頁(yè)/共123頁(yè)長(zhǎng)期毒性研究試驗(yàn)周期長(zhǎng)，耗資高，工作量大，若因試驗(yàn)設(shè)計(jì)不合理，或所進(jìn)行的試驗(yàn)未充分揭示中藥的毒性特征，則會(huì)造成人力、物力、財(cái)力的浪費(fèi)，也會(huì)影響新藥的研究速度。充分認(rèn)識(shí)長(zhǎng)期毒性研究的重要性，合理、科學(xué)地進(jìn)行長(zhǎng)期毒性研究試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析，是新藥非臨床安全性評(píng)價(jià)的基本要求。第47頁(yè)/共123頁(yè)指導(dǎo)原則是根據(jù)中藥、天然藥物的特點(diǎn)，結(jié)合國(guó)際上藥物安全性評(píng)價(jià)的要求和我國(guó)藥物安全性評(píng)價(jià)研究現(xiàn)狀而制訂的。技術(shù)指導(dǎo)原則適用于中藥、天然藥物新藥長(zhǎng)期毒性研究。指導(dǎo)原則為長(zhǎng)期毒性研究的一般性原則，僅代表目前對(duì)長(zhǎng)期毒性研究的基本認(rèn)識(shí)。第48頁(yè)/共123頁(yè)

中藥、天然藥物的新藥研究情況復(fù)雜，本指導(dǎo)原則尚不能涵蓋中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究的全部?jī)?nèi)容，在進(jìn)行長(zhǎng)期毒性研究時(shí)，應(yīng)遵循“具體問(wèn)題具體分析”的原則。第49頁(yè)/共123頁(yè)二、長(zhǎng)期毒性研究的一般原則(1)長(zhǎng)性毒性研究應(yīng)遵循“具體問(wèn)題具體分析”的原則。(2)長(zhǎng)期毒性研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的原則。

藥物的開發(fā)是一個(gè)連續(xù)的、漸進(jìn)的系統(tǒng)工程，長(zhǎng)期毒性研究是藥物開發(fā)的一個(gè)有機(jī)組成部分。長(zhǎng)期毒性研究不能與其它藥理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和其它毒理學(xué)研究割裂，試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮其它藥理毒理研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究結(jié)果。長(zhǎng)期毒性研究的結(jié)果應(yīng)該力求與其它藥理毒理研究結(jié)果互為印證、說(shuō)明和補(bǔ)充。第50頁(yè)/共123頁(yè)三、長(zhǎng)期毒性研究的基本內(nèi)容（一）試驗(yàn)管理長(zhǎng)期毒性研究必須執(zhí)行《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP）。第51頁(yè)/共123頁(yè)（二）受試物長(zhǎng)期毒性研究的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)受試物和上市藥品因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，一般用中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒或賦形劑應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格及生產(chǎn)廠家。第52頁(yè)/共123頁(yè)（三）試驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期毒性研究一般需采用兩種動(dòng)物進(jìn)行一種為嚙齒類，常用大鼠:大鼠應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)II級(jí)及其以上等級(jí)要求一種為非嚙齒類，常用Beagle犬或猴:非嚙齒類動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)I級(jí)及其以上等級(jí)要求。第53頁(yè)/共123頁(yè)長(zhǎng)期毒性研究一般選擇健康、體重均一的動(dòng)物，雌性應(yīng)未孕。所選用的動(dòng)物種屬應(yīng)盡可能與藥效學(xué)研究所用的動(dòng)物相一致。必要時(shí)，也可選用疾病模型動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。原則上，動(dòng)物應(yīng)雌雄各半。當(dāng)臨床擬用于單性別時(shí)，可采用相應(yīng)性別的動(dòng)物。

第54頁(yè)/共123頁(yè)應(yīng)根據(jù)研究期限的長(zhǎng)短和受試物的使用人群范圍確定動(dòng)物的年齡。一般情況下，大鼠為4-9周齡；Beagle犬為6-9月齡，不宜超過(guò)12月齡。每組動(dòng)物的數(shù)量應(yīng)能夠滿足試驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)的需要。一般大鼠可為雌、雄各10-30只犬或者猴可為雌、雄各3-6只。若試驗(yàn)中期要處死動(dòng)物，應(yīng)相應(yīng)地增加動(dòng)物數(shù)。第55頁(yè)/共123頁(yè)（四）給藥途徑原則上應(yīng)與臨床擬用藥途徑相同?？诜o藥者一般采用灌胃給藥臨床用藥為靜脈注射時(shí)，若由于給藥周期長(zhǎng)，大鼠靜脈注射有困難時(shí)，可用其它適宜的注射途徑代替。如選擇其它的給藥途徑，應(yīng)說(shuō)明理由。第56頁(yè)/共123頁(yè)（五）給藥頻率原則上應(yīng)每天給藥，每天給藥時(shí)間應(yīng)相同。試驗(yàn)周期長(zhǎng)（3個(gè)月或以上）者，也可采取每周給藥6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點(diǎn)和臨床給藥方案等原因，應(yīng)根據(jù)具體藥物的特點(diǎn)設(shè)計(jì)給藥頻率。

第57頁(yè)/共123頁(yè)（六）給藥期限長(zhǎng)期毒性研究給藥期限的長(zhǎng)短，通常與擬定的臨床療程長(zhǎng)短、臨床適應(yīng)癥、用藥人群相關(guān)，應(yīng)充分考慮預(yù)期臨床的實(shí)際療程。給藥期限為1個(gè)月的長(zhǎng)期毒性研究通?？芍С峙R床療程不超過(guò)2周的藥物進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

第58頁(yè)/共123頁(yè)臨床療程超過(guò)2周的藥物，可以在臨床前一次性進(jìn)行支持藥物進(jìn)行III期臨床試驗(yàn)（生產(chǎn)）的長(zhǎng)期毒性研究。在這種情況下，如長(zhǎng)期毒性研究擬定給藥期限在三個(gè)月以上，可先對(duì)三個(gè)月完整的階段性研究資料進(jìn)行評(píng)價(jià)。但在進(jìn)行III期臨床試驗(yàn)前，必須完成全程長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究資料。第59頁(yè)/共123頁(yè)臨床療程超過(guò)2周的藥物，也可以根據(jù)具體情況，以不同給藥期限的長(zhǎng)期毒性研究來(lái)分別支持藥物進(jìn)入I期、II期或III期臨床試驗(yàn)（生產(chǎn)）。通過(guò)給藥期限較短的毒性研究獲得的信息，可以為給藥期限較長(zhǎng)的毒性研究設(shè)計(jì)提供給藥劑量、給藥頻率、檢測(cè)指標(biāo)等方面的參考；臨床試驗(yàn)中獲得的信息有助于給藥期限較長(zhǎng)的動(dòng)物毒性研究方案的設(shè)計(jì)，有利于降低藥物開發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。第60頁(yè)/共123頁(yè)一般藥物的長(zhǎng)期毒性研究給藥期限參考注：表中長(zhǎng)期毒性研究給藥期限不包括恢復(fù)期。應(yīng)根據(jù)具體情況設(shè)計(jì)不同的恢復(fù)期。*此處是指臨床療程超過(guò)2周的藥物，可用一個(gè)月的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)來(lái)支持藥物進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。第61頁(yè)/共123頁(yè)以不同給藥期限的長(zhǎng)期毒性研究來(lái)分別支持藥物進(jìn)入I期、II期或III期臨床試驗(yàn)（生產(chǎn)）時(shí)，不同給藥期限的長(zhǎng)期毒性研究的內(nèi)容不應(yīng)簡(jiǎn)化。無(wú)論采用何種模式，長(zhǎng)期毒性研究的內(nèi)容應(yīng)完整、規(guī)范，對(duì)結(jié)果的分析評(píng)價(jià)應(yīng)科學(xué)、合理。當(dāng)某一藥物預(yù)期長(zhǎng)期使用，或用于復(fù)發(fā)性疾病而需經(jīng)常反復(fù)給藥時(shí)，應(yīng)進(jìn)行最長(zhǎng)試驗(yàn)期限的長(zhǎng)期毒性研究。當(dāng)功能主治有若干項(xiàng)的，應(yīng)按照臨床最長(zhǎng)療程的功能主治來(lái)確定長(zhǎng)期毒性研究的給藥期限。第62頁(yè)/共123頁(yè)如臨床給藥需采用多個(gè)療程，療程之間間隔時(shí)間不足以使受試物可能對(duì)機(jī)體組織器官造成的損害恢復(fù)，則需按多個(gè)療程的時(shí)間之和作為參照的臨床療程；如療程間隔時(shí)間基本可判斷足以使受試物可能對(duì)機(jī)體組織器官造成的損害恢復(fù)，則可按單個(gè)療程的時(shí)間作為參照的臨床療程。第63頁(yè)/共123頁(yè)（七）給藥劑量-----設(shè)計(jì)的一般原則一般情況下，至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組和對(duì)照組（賦形劑或／和空白對(duì)照組）。低劑量組原則上應(yīng)高于同種動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑量或預(yù)期的臨床治療劑量的等效劑量。高劑量組原則上應(yīng)使動(dòng)物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至可引起少量動(dòng)物死亡（對(duì)于毒性較小的中藥，可盡量采用最大給藥量）。在高、低劑量之間至少應(yīng)再設(shè)一個(gè)中劑量組。第64頁(yè)/共123頁(yè)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行合理的劑量設(shè)計(jì)，如出現(xiàn)未預(yù)期的毒性反應(yīng)或不出現(xiàn)毒性反應(yīng)時(shí)，可在設(shè)計(jì)更長(zhǎng)時(shí)間的長(zhǎng)期毒性研究時(shí)適當(dāng)調(diào)整劑量。若受試物在飲食或飲水中給予時(shí)，應(yīng)能充分保證受試物的均一性、穩(wěn)定性和定量攝入，提供相關(guān)的檢測(cè)報(bào)告，并應(yīng)根據(jù)動(dòng)物生長(zhǎng)和體重的變化情況而調(diào)整在飲食或水中的劑量。局部給藥時(shí)，應(yīng)盡可能保證給藥劑量的準(zhǔn)確性及與局部充分接觸的時(shí)間。第65頁(yè)/共123頁(yè)（八）觀察指標(biāo)原則上，除常規(guī)觀察指標(biāo)外，還應(yīng)根據(jù)受試物的特點(diǎn)、在其他試驗(yàn)中已觀察到的某些改變，或其他的相關(guān)信息（如方中組成成分有關(guān)毒性的文獻(xiàn)），增加相應(yīng)的觀測(cè)指標(biāo)。第66頁(yè)/共123頁(yè)常規(guī)需觀察的指標(biāo)1、一般狀況觀察在試驗(yàn)期間，應(yīng)觀察動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、糞便、攝食量、體重、給藥局部反應(yīng)。第67頁(yè)/共123頁(yè)2、血液學(xué)指標(biāo)一般血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)。至少應(yīng)觀察紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類、血小板、凝血時(shí)間等。當(dāng)發(fā)現(xiàn)對(duì)造血系統(tǒng)有影響時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓的檢查。第68頁(yè)/共123頁(yè)第69頁(yè)/共123頁(yè)3、血液生化學(xué)指標(biāo)一般血液生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)4、體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查非嚙齒類動(dòng)物還應(yīng)進(jìn)行體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查等。尿液檢查指標(biāo)

第70頁(yè)/共123頁(yè)第71頁(yè)/共123頁(yè)第72頁(yè)/共123頁(yè)5、系統(tǒng)尸解和組織病理學(xué)檢查5．1系統(tǒng)尸解應(yīng)對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行尸解，尸解應(yīng)全面細(xì)致，為組織病理學(xué)檢查提供參考。

5．2

臟器系數(shù)應(yīng)對(duì)臟器進(jìn)行稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)。

第73頁(yè)/共123頁(yè)5．3組織病理學(xué)檢查

當(dāng)所用動(dòng)物為非嚙齒類動(dòng)物時(shí)，因動(dòng)物數(shù)較少，應(yīng)對(duì)所有劑量組、所有動(dòng)物的器官和組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。當(dāng)所用動(dòng)物為嚙齒類動(dòng)物時(shí)，應(yīng)對(duì)高劑量組和對(duì)照組的器官和組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，如果高劑量組出現(xiàn)組織病理學(xué)變化時(shí)，更低劑量組也應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查以確定劑量-毒性關(guān)系。若在尸檢時(shí)發(fā)現(xiàn)器官和組織有肉眼可見(jiàn)的病理變化時(shí)，應(yīng)對(duì)此臟器或組織進(jìn)行詳細(xì)的病理組織學(xué)檢查。有效成分或有效部位制成的制劑所需檢查的臟器和組織參考。第74頁(yè)/共123頁(yè)第75頁(yè)/共123頁(yè)若為一般的中藥復(fù)方制劑，所檢查的臟器和組織可減少為：心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、腦垂體、脊髓、胸骨（骨和骨髓）、淋巴結(jié)、膀胱、視神經(jīng)、睪丸（含附睪）、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺、甲狀腺、前列腺及給藥局部組織等。第76頁(yè)/共123頁(yè)第77頁(yè)/共123頁(yè)第78頁(yè)/共123頁(yè)第79頁(yè)/共123頁(yè)應(yīng)注意臟器和組織的取材保存，如在高劑量組發(fā)現(xiàn)有異常病變時(shí)，則可對(duì)取材保存的更低劑量組的臟器、組織時(shí)進(jìn)行檢查。必要時(shí)還應(yīng)增加其他器官組織的檢查。另外，根據(jù)所含中藥的性、味、功效、主治等不同情況，可能需增加相應(yīng)的病理組織學(xué)檢查；根據(jù)受試物特性和初步試驗(yàn)結(jié)果，可能需要進(jìn)行更進(jìn)一步的組織病理學(xué)檢查，這均遵循具體情況具體分析的原則。第80頁(yè)/共123頁(yè)（九）觀察指標(biāo)的時(shí)間和次數(shù)應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)期限的長(zhǎng)短和受試物的特點(diǎn)而確定試驗(yàn)期間觀察指標(biāo)的時(shí)間和次數(shù)，原則上應(yīng)盡早、及時(shí)發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。

第81頁(yè)/共123頁(yè)試驗(yàn)前，嚙齒類動(dòng)物至少應(yīng)進(jìn)行適應(yīng)性觀察3-5天，非嚙齒類至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察1-2周，應(yīng)對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行外觀體征、行為活動(dòng)、攝食量和體重檢查，非嚙齒類動(dòng)物還至少應(yīng)進(jìn)行2次體溫、心電圖、有關(guān)血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。試驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)指標(biāo)的歷史數(shù)據(jù)在長(zhǎng)期毒性研究中也具有非常重要的意義。

第82頁(yè)/共123頁(yè)試驗(yàn)期間，一般狀況和癥狀的觀察，應(yīng)每天觀察一次，飼料消耗和體重應(yīng)每周記錄一次。大鼠體重應(yīng)雌雄分開進(jìn)行計(jì)算。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)應(yīng)進(jìn)行一次全面的檢測(cè)。當(dāng)給藥期限較長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇合適的時(shí)間進(jìn)行中期階段性的檢測(cè)。第83頁(yè)/共123頁(yè)長(zhǎng)期毒性研究應(yīng)在給藥結(jié)束留存部分動(dòng)物進(jìn)行恢復(fù)期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。應(yīng)根據(jù)受試物的代謝動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)、靶器官或靶組織的毒性反應(yīng)和恢復(fù)期確定恢復(fù)期的長(zhǎng)短?；謴?fù)期觀察期間除不給受試物外，其他觀察內(nèi)容與給藥期間相同。在試驗(yàn)期間，對(duì)瀕死或死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)檢查并分析原因。第84頁(yè)/共123頁(yè)（十）結(jié)果及分析試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)全面客觀反映整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程收集的原始資料和信息，應(yīng)詳細(xì)描述毒性的主要表現(xiàn)、大體解剖檢查和/或病理組織學(xué)檢查結(jié)果等，并說(shuō)明數(shù)據(jù)處理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如用計(jì)算機(jī)處理數(shù)據(jù)，應(yīng)指出所用程序名稱。結(jié)果應(yīng)以清楚、準(zhǔn)確的方式來(lái)表示。第85頁(yè)/共123頁(yè)長(zhǎng)期毒性研究的最終目的在于預(yù)測(cè)人體可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。只有通過(guò)對(duì)研究結(jié)果的科學(xué)分析和評(píng)價(jià)才能夠清楚描述動(dòng)物的毒性反應(yīng)，并推測(cè)其與人體的相關(guān)性，因此長(zhǎng)期毒性研究結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)是長(zhǎng)期毒性研究的必要組成部分。分析長(zhǎng)期毒性研究結(jié)果的目的是判斷動(dòng)物是否發(fā)生毒性反應(yīng)，描述毒性反應(yīng)的性質(zhì)和程度（包括毒性發(fā)作時(shí)間、程度、持續(xù)時(shí)間以及可逆性等）和靶器官，確定安全范圍，并探討可能的毒性作用機(jī)制。第86頁(yè)/共123頁(yè)應(yīng)重視對(duì)動(dòng)物中毒或死亡原因的分析，注意觀察毒性反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間和恢復(fù)的時(shí)間及動(dòng)物的死亡時(shí)間。應(yīng)對(duì)所獲取的數(shù)據(jù)進(jìn)行全面和科學(xué)的分析，對(duì)在正常范圍以外的各實(shí)測(cè)值應(yīng)在試驗(yàn)結(jié)果中詳細(xì)列出，對(duì)異常數(shù)據(jù)予以合理的分析。在分析長(zhǎng)期毒性研究結(jié)果時(shí)，應(yīng)正確理解均值數(shù)據(jù)和單個(gè)數(shù)據(jù)的意義，綜合考慮數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和生物學(xué)意義。第87頁(yè)/共123頁(yè)正確利用統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)檢驗(yàn)的結(jié)果有助于確定試驗(yàn)結(jié)果的生物學(xué)意義，但具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并不一定代表具有生物學(xué)意義。在判斷生物學(xué)意義時(shí)應(yīng)考慮與該實(shí)驗(yàn)室的歷史數(shù)據(jù)相比較。根據(jù)長(zhǎng)期毒性研究結(jié)果，分析討論需在臨床、質(zhì)量可控性研究中注意的問(wèn)題。長(zhǎng)期毒性研究結(jié)果還應(yīng)結(jié)合其他相關(guān)安全性試驗(yàn)及藥/毒代動(dòng)力學(xué)的結(jié)果進(jìn)行分析。

第88頁(yè)/共123頁(yè)（十一）綜合評(píng)價(jià)1．應(yīng)結(jié)合其他安全性試驗(yàn)的毒性反應(yīng)情況，判斷毒性反應(yīng)是否存在種屬差異，是否需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。2．應(yīng)結(jié)合臨床前藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果和擬臨床適應(yīng)癥，判斷有效性與毒性反應(yīng)的關(guān)系，判斷藥物對(duì)正常動(dòng)物和模型動(dòng)物的生理生化指標(biāo)的改變是否相同或相似，并注意提示臨床研究應(yīng)注意的問(wèn)題。對(duì)受試物引起的嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，應(yīng)盡可能查找產(chǎn)生毒性的原因，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料或試驗(yàn)資料，推測(cè)可能的毒性成分，提出是否對(duì)處方工藝及處方中的某些藥材或某些成分需進(jìn)行特別的控制等。3．結(jié)合臨床主治（適應(yīng)癥），權(quán)衡利弊，考慮其開發(fā)前景。第89頁(yè)/共123頁(yè)（十二）其它考慮某些其他安全性試驗(yàn)項(xiàng)目，如一般藥理學(xué)研究中的心血管系統(tǒng)等指標(biāo)的觀察、注射給藥的局部刺激性的觀察、免疫毒理研究、有依賴傾向的受試物的依賴性觀察、毒代動(dòng)力學(xué)研究等均可結(jié)合長(zhǎng)期毒性研究同時(shí)進(jìn)行。第90頁(yè)/共123頁(yè)在所進(jìn)行的試驗(yàn)中，盡量獲取更多的和所需要的信息。鼓勵(lì)創(chuàng)新藥進(jìn)行毒代動(dòng)力學(xué)研究。因有些中藥已有一定的臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，對(duì)受試物的長(zhǎng)期毒性研究可結(jié)合以往的臨床應(yīng)用和文獻(xiàn)情況及其它試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。第91頁(yè)/共123頁(yè)四、不同情況的中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究的一般要求考慮到中藥、天然藥物各類藥物處方來(lái)源、立題依據(jù)等的不同，在具體進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)可參照以下要求進(jìn)行。但這些要求僅是一般要求，研制者應(yīng)遵循新藥開發(fā)的客觀規(guī)律，具體試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)受試物自身特點(diǎn)、具體情況來(lái)進(jìn)行設(shè)計(jì)，考慮需進(jìn)行哪些研究。第92頁(yè)/共123頁(yè)1．未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑，未在國(guó)內(nèi)上市銷售的來(lái)源于植物、動(dòng)物、礦物等藥用物質(zhì)制成的制劑，未在國(guó)內(nèi)上市銷售的中藥材新的藥用部位制成的制劑，未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑，未在國(guó)內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物制成的注射劑以上情況，由于其物質(zhì)基礎(chǔ)較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變，或應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)較少，為全面考察受試物的長(zhǎng)期毒性反應(yīng)情況，應(yīng)采用兩種動(dòng)物進(jìn)行長(zhǎng)期毒性研究（建議為嚙齒類和非嚙齒類），并仔細(xì)分析產(chǎn)生毒性反應(yīng)的原因。

第93頁(yè)/共123頁(yè)2．未在國(guó)內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物組成的非注射給藥的復(fù)方制劑若處方中各味藥材均符合法定標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)毒性藥材，無(wú)十八反、十九畏等配伍禁忌，又未經(jīng)化學(xué)處理（水、乙醇粗提除外），急性毒性試驗(yàn)（采用最大給藥容量、最大給藥濃度）未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)，臨床實(shí)際用藥期為1周以內(nèi)者，可免做長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。第94頁(yè)/共123頁(yè)臨床用藥超過(guò)一周，未在國(guó)內(nèi)上市銷售的由中藥、天然藥物組成的非注射給藥的復(fù)方制劑，可先進(jìn)行一種動(dòng)物（嚙齒類）的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)明顯毒性時(shí)，為進(jìn)一步研究毒性情況，再采用第二種動(dòng)物（非嚙齒類）進(jìn)行研究。若該類處方中含有毒性藥材（見(jiàn)附錄IV）、無(wú)法定標(biāo)準(zhǔn)藥材或有十八反、十九畏等配伍禁忌時(shí)，則應(yīng)進(jìn)行兩種動(dòng)物（嚙齒類和非嚙齒類）的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。第95頁(yè)/共123頁(yè)毒性藥材

指導(dǎo)原則中所稱毒性藥材，系指入國(guó)務(wù)院《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》的中藥品種。即：砒石、砒霜、水銀、生馬錢子、生川烏、生草烏、生白附子、生附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蝥、青娘蟲、紅娘蟲、生甘遂、生狼毒、生藤黃、生千金子、生天仙子、鬧羊花、雪上一枝蒿、紅升丹、白降丹、蟾酥、洋金花、紅粉、輕粉、雄黃。另外，凡在近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的有毒性作用藥材（原料）或在復(fù)方中含有明顯有毒組份的均按毒性藥材處理。第96頁(yè)/共123頁(yè)3．改變國(guó)內(nèi)已上市銷售藥品給藥途徑（不包括由非注射劑改為注射劑）的制劑、不改變給藥途徑的非注射給藥改劑型制劑和改工藝制劑若處方中各味藥材均符合法定標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)毒性藥材，無(wú)十八反、十九畏等配伍禁忌，又未經(jīng)化學(xué)處理（水、乙醇粗提除外），急毒試驗(yàn)（采用最大給藥容量、最大給藥濃度）未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)，臨床實(shí)際用藥期為1周以內(nèi)者，可免做長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。第97頁(yè)/共123頁(yè)臨床用藥超過(guò)一周，建議采用高劑量增設(shè)一個(gè)原給藥途徑、原劑型或原工藝對(duì)照組，先進(jìn)行一種動(dòng)物（嚙齒類）的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。如發(fā)現(xiàn)與原給藥途徑、原劑型或原工藝制劑不同的明顯毒性反應(yīng)或更嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)行另一種動(dòng)物（非嚙齒類）的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究第98頁(yè)/共123頁(yè)4．增加新的適應(yīng)癥或者功能主治的品種如需延長(zhǎng)用藥周期或增加劑量者，應(yīng)結(jié)合原品種的申報(bào)資料及處方組成的情況確定是否需進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究及長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究的內(nèi)容。

第99頁(yè)/共123頁(yè)新藥特殊毒性研究（突變、生殖、致癌、藥物依賴試驗(yàn)）第100頁(yè)/共123頁(yè)新藥臨床前特殊毒理學(xué)評(píng)價(jià)包括致突變?cè)囼?yàn)、生殖毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)）、致癌試驗(yàn)和藥物依賴性試驗(yàn)。第101頁(yè)/共123頁(yè)1.突變?cè)囼?yàn)基本試驗(yàn)方法有三種：

1）微生物回復(fù)突變?cè)囼?yàn)即Ames試驗(yàn)，試驗(yàn)用菌株為組胺酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌（S.Typhimurium），以TA97、TA98、TA100和TA102作為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株。受試藥物至少要設(shè)5個(gè)劑量組，應(yīng)設(shè)空白、溶媒、陽(yáng)性對(duì)照和代謝活化（S9）對(duì)照，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)一次。結(jié)果依據(jù)加入被測(cè)新藥平皿中回變生長(zhǎng)的菌落數(shù)并與空白對(duì)照平皿中的菌落數(shù)據(jù)相比較得出受試藥物有無(wú)誘變性來(lái)判斷。第102頁(yè)/共123頁(yè)

2）哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)用中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞（CHL）在體外培養(yǎng)進(jìn)行。觀察染色體斷裂后導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)和數(shù)目的異常稱為染色體畸變。結(jié)果要求受試藥物誘發(fā)的染色體畸變率與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并與劑量有相關(guān)性。

3）體內(nèi)試驗(yàn)嚙齒動(dòng)物微核（有絲分裂后期）試驗(yàn)，我國(guó)《新藥審批辦法》中要求做小鼠骨髓微核試驗(yàn)。上述三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)結(jié)果全部陰性時(shí)，則不必往下進(jìn)行。

第103頁(yè)/共123頁(yè)2．生殖毒性試驗(yàn)

1）一般生殖毒性試驗(yàn)（Ⅰ）試驗(yàn)在交配前給藥，目的是評(píng)價(jià)生殖細(xì)胞接觸藥物（化合物）后對(duì)受胎能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和評(píng)價(jià)包括：受孕率、死胎數(shù)、活胎數(shù)、活胎重量、性別、外觀及內(nèi)部器官的形態(tài)學(xué)觀察和骨骼的檢查。

2）致畸敏感期毒性試驗(yàn)（Ⅱ）試驗(yàn)在器官發(fā)生期給藥，旨在揭示藥物可能的胚胎毒性和致畸性。大、小鼠孕后6～15天，家兔6～18天連續(xù)給藥，。妊娠末期剖檢。

3）圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)（Ⅲ）試驗(yàn)在圍產(chǎn)期和哺乳期給藥，于妊娠后期及整個(gè)泌乳期給藥，即：大、小鼠于妊娠第15天開始，至分娩后21天（小鼠）和28天（大鼠）；家兔于妊娠第22天開始，至分娩后31天。所有雌性動(dòng)物自然分娩，觀察子代直至成年。

第104頁(yè)/共123頁(yè)

3.致癌試驗(yàn)致癌試驗(yàn)是一項(xiàng)復(fù)雜、細(xì)致的長(zhǎng)期過(guò)程，應(yīng)設(shè)空白對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照藥組（結(jié)構(gòu)相近的已知致癌物），受試藥物至少設(shè)3個(gè)劑量。第105頁(yè)/共123頁(yè)4、藥物依賴性試驗(yàn)包括身體依賴性與精神依賴性試驗(yàn)。

1）身體依賴性試驗(yàn)①自然戒斷試驗(yàn)需用小鼠、大鼠和猴3種動(dòng)物，連續(xù)給予動(dòng)物一段時(shí)間的受試藥后突然停藥，觀察動(dòng)物出現(xiàn)的戒斷癥狀。

②替代試驗(yàn)給予動(dòng)物代表藥（如嗎啡、巴比妥鈉或苯巴比妥鈉），使之產(chǎn)生身體依賴性后，停止給予代表藥，以同樣方式給予不同劑量受試藥，觀察替代期間動(dòng)物的戒斷癥狀。

③催促試驗(yàn)短時(shí)間內(nèi)給予動(dòng)物大劑量受試藥，然后注射受體拮抗劑（鈉洛酮）以催癮，觀察是否出現(xiàn)戒斷癥狀及其程度。

④誘導(dǎo)試驗(yàn)誘發(fā)驚厥，包括：聽(tīng)源性發(fā)作（Audiogenicseizures）；戊四氮驚厥（Pentylenetetrazole）。對(duì)鎮(zhèn)靜催眠藥產(chǎn)生身體依賴性的動(dòng)物，在斷藥期間出現(xiàn)反跳性興奮，用閾下刺激強(qiáng)度誘發(fā)驚厥。第106頁(yè)/共123頁(yè)2）精神依賴性試驗(yàn)采用“自身給藥”（覓藥行為）操作式條件行為試驗(yàn)，測(cè)定靜脈注射藥物對(duì)動(dòng)物的強(qiáng)化效應(yīng)，是當(dāng)前國(guó)際上通用的評(píng)價(jià)藥物精神依賴性潛力實(shí)驗(yàn)方法。第107頁(yè)/共123頁(yè)新藥制劑安全性試驗(yàn)（過(guò)敏、刺激、溶血試驗(yàn)）第108頁(yè)/共123頁(yè)制劑安全性（刺激性、過(guò)敏性和溶血性）藥物制劑經(jīng)眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動(dòng)脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內(nèi)等非口服途徑給藥，對(duì)用藥局部產(chǎn)生的毒性（如刺激性和過(guò)敏性等）和/或?qū)θ懋a(chǎn)生的毒性（如過(guò)敏性和溶血性等）。是臨床前安全性評(píng)價(jià)的組成部分。

毒性來(lái)源：藥物的活性成分及其代謝物、輔料、雜質(zhì)等及制劑理化性質(zhì)（如pH值、滲透壓等）。第109頁(yè)/共123頁(yè)㈠刺激性試驗(yàn)1、定義刺激性：非口服藥物制劑對(duì)給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥改變，給藥部位不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。2、刺激性試驗(yàn)設(shè)計(jì)1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般每個(gè)試驗(yàn)選擇一種動(dòng)物進(jìn)行評(píng)價(jià)。2）給藥的頻率與期限依據(jù)擬定臨床應(yīng)用情況決定。①重復(fù)給藥每天給藥一次，給藥期限最長(zhǎng)不超過(guò)4周；②偶爾給藥單次給藥試驗(yàn)。3）可逆性停藥后恢復(fù)期觀察（局部及相關(guān)部位）。4）受試藥和對(duì)照物受試物與用于人體制劑一致。以溶媒和/或賦形劑作為陰性對(duì)照。必要時(shí)采用陽(yáng)性對(duì)照或已上市制劑。5）劑量（濃度和總劑量）設(shè)一個(gè)與臨床制劑相同濃度劑量組，通過(guò)給藥頻率進(jìn)行劑量調(diào)整。第110頁(yè)/共123頁(yè)6）給藥方式①給藥方案、途徑和部位應(yīng)盡量與臨床用藥方案一致。②給藥容積、速率和頻率根據(jù)劑量和動(dòng)物給藥部位的解剖和生理特點(diǎn)。③可在同一動(dòng)物身上進(jìn)行不同給藥途徑的刺激性試驗(yàn)，并可在對(duì)側(cè)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)。條件：耐受性許可和無(wú)相互影響。3、皮膚刺激性試驗(yàn)

1）經(jīng)皮給藥及可能接觸皮膚的非口服給藥制劑（直腸、陰道給藥）應(yīng)考慮進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)。2）在急性毒性驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性或皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)中已經(jīng)評(píng)價(jià)過(guò)皮膚刺激性，可不必進(jìn)行單獨(dú)的皮膚刺激性試驗(yàn)。第111頁(yè)/共123頁(yè)3）試驗(yàn)方法①動(dòng)物首選家兔4~8只，雌、雄各半，應(yīng)設(shè)賦形劑對(duì)照，采用同體左右側(cè)自身對(duì)比。試驗(yàn)前24小時(shí)給藥區(qū)（背部）進(jìn)行左、右各3cm×3cm脫毛（剪、剃或脫毛劑）。損傷皮膚不宜進(jìn)行試驗(yàn)。在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度考察破損皮膚的刺激性。②給藥不宜通過(guò)增加涂敷厚度或加大涂布面積來(lái)提高給藥劑量。取受試物0.5ml直接涂于一側(cè)去毛皮膚，用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用膠布和繃帶固定；另一側(cè)涂賦型劑對(duì)照。貼敷時(shí)間至少4小時(shí)。貼敷結(jié)束后，除去受試物并用溫水清潔給藥部位。多次給藥應(yīng)連續(xù)同時(shí)辰，在同一部位給藥，貼敷期限一般不超過(guò)4周。

③觀察觀察皮膚反應(yīng)，按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分。單次給藥：去除藥物后30-60分鐘，24、48和72小時(shí)肉眼觀察記錄涂敷部位紅斑和水腫等情況。如存在持久性損傷，延長(zhǎng)觀察期限，觀察恢復(fù)情況和時(shí)間，但延長(zhǎng)期不超過(guò)14天。出現(xiàn)皮膚刺激性中度以上的動(dòng)物應(yīng)對(duì)給藥局部進(jìn)行病理學(xué)檢查。多次給藥：每次去除藥物后1小時(shí)以及再次貼敷前觀察及記錄紅斑、水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時(shí)間及消退時(shí)間，并對(duì)紅斑及水腫進(jìn)行評(píng)分。末次貼敷后，在去除藥物后30-60分鐘，24、48和72小時(shí)肉眼觀察并記錄涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫等情況。持久性和中度以上損傷的觀察同單次給藥。第112頁(yè)/共123頁(yè)④結(jié)果評(píng)價(jià)：?jiǎn)未谓o藥計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組受試物及賦形劑皮膚反應(yīng)積分平均分值。將受試側(cè)皮膚反應(yīng)平均分值減去賦形劑皮膚平均分值得到原發(fā)性刺激指數(shù)，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。多次給藥首先計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組原發(fā)性刺激積分均值，然后計(jì)算觀察期限內(nèi)每天每只動(dòng)物刺激積分均值即累積刺激指數(shù)，進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。紅斑水腫刺激反應(yīng)分值刺激反應(yīng)分值無(wú)紅斑

0無(wú)水腫

0輕度紅斑（勉強(qiáng)可見(jiàn)）

1輕度水腫（勉強(qiáng)可見(jiàn)）

1中度紅斑（明顯可見(jiàn)）

2中度水腫（明顯隆起）

2重度紅斑

3重度水腫（皮膚隆起1mm，輪廓清楚）

3紫紅色紅斑到輕度焦痂形成

4嚴(yán)重水腫（皮膚隆起1mm以上并有擴(kuò)大）

4最高總分值8皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)第113頁(yè)/共123頁(yè)分值評(píng)價(jià)0-0.49無(wú)刺激性0.5-2.99輕度刺激性3.0-5.99中度刺激性6.0-8.0強(qiáng)刺激性皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)4）試驗(yàn)報(bào)告符合GLP實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范，內(nèi)容包括：受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和來(lái)源（注明動(dòng)物合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境（包括飼料來(lái)源、室溫、濕度、照明、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施合格證號(hào)）；詳細(xì)的試驗(yàn)操作；每只動(dòng)物在每一觀察時(shí)間點(diǎn)的皮膚反應(yīng)積分；具體描述其它毒性反應(yīng)；試驗(yàn)結(jié)論等。5）試驗(yàn)結(jié)果的解釋該試驗(yàn)系統(tǒng)比人皮膚刺激反應(yīng)敏感，刺激反應(yīng)陰性大多可確定為無(wú)刺激性，陽(yáng)性反應(yīng)要排除假陽(yáng)性。除非受試物有大范圍或長(zhǎng)時(shí)間的使用，否則輕度刺激性可不予重視。第114頁(yè)/共123頁(yè)4.注射給藥部位刺激性試驗(yàn)炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。1）試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物：家兔，每組（單次給藥、多次給藥）不少于3只。設(shè)生理鹽水對(duì)照，用同體左右側(cè)自身對(duì)比。給藥方法：途徑與臨床使用情況一致，可選用耳緣靜脈，耳中心動(dòng)脈、股和背部肌肉，側(cè)胸壁皮下組織等。給藥容積和速率應(yīng)根據(jù)動(dòng)物情況進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。給藥期限應(yīng)根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來(lái)決定，多次給藥一般不超過(guò)7天。動(dòng)物觀察：?jiǎn)未谓o藥，在給藥后48-96小時(shí)對(duì)動(dòng)物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察；多次給藥，每天給藥前以及最后一次給藥后48-96小時(shí)對(duì)動(dòng)物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察。觀察期結(jié)束時(shí)應(yīng)對(duì)部分動(dòng)物進(jìn)行病理學(xué)檢查。留下的動(dòng)物繼續(xù)觀察14－21天再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程度。2）結(jié)果評(píng)價(jià)：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查結(jié)果，對(duì)受試物進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。3）試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)符合GLP實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范，內(nèi)容包括：受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和來(lái)源（注明動(dòng)物合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境（包括飼料來(lái)源、室溫、濕度、照明、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施合格證號(hào)）；詳細(xì)的試驗(yàn)操作；每只動(dòng)物在每一觀察時(shí)間點(diǎn)的刺激反應(yīng)情況；具體描述其它毒性反應(yīng)；試驗(yàn)結(jié)論等。

第115頁(yè)/共123頁(yè)⒊眼刺激性試驗(yàn)眼前部表面可逆性組織改變（炎癥、變性和壞死等）。

1）試驗(yàn)方法

試驗(yàn)動(dòng)物：首選家兔，動(dòng)物數(shù)每組不少于3只。應(yīng)設(shè)置生理鹽水對(duì)照組，可采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。試驗(yàn)前24小時(shí)內(nèi)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行雙眼檢查（包括熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結(jié)膜損傷動(dòng)物棄用。

給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受試物，然后合眼瞼約10s。不需沖洗眼睛。用藥周期根據(jù)擬臨床情況決定，多次給藥一般不超過(guò)4周。

眼部觀察：?jiǎn)未谓o藥，在給藥后1、24、48和72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查；多次給藥，每天給藥前以及最后一次給藥后1、24、48和72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查。如果在72小時(shí)未見(jiàn)任何刺激癥狀，試驗(yàn)則可結(jié)束。如存在持久性損傷，有必要延長(zhǎng)觀察期限。但一般不超過(guò)21天。可使用放大鏡、裂隙燈、生物顯微鏡和其他器械進(jìn)行眼刺激反應(yīng)檢查。在記錄了24h的觀察后，可進(jìn)一步用熒光素染色檢查。記錄每次檢查眼部反應(yīng)的分值（見(jiàn)表）。觀察部位：結(jié)膜、角膜、虹膜及其他。第116頁(yè)/共123頁(yè)2）結(jié)果評(píng)價(jià)：將每一個(gè)觀察時(shí)間每一動(dòng)物的眼角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)分值相加得總積分，將一組的積分總和除以動(dòng)物數(shù)，即得最后分值。眼刺激反應(yīng)分值標(biāo)準(zhǔn)角膜

虹膜結(jié)膜（瞼結(jié)膜和球結(jié)膜）充血水腫分泌物眼刺激反應(yīng)分值眼刺激反應(yīng)分值眼刺激反應(yīng)分值眼刺激反應(yīng)分值眼刺激反應(yīng)分值無(wú)混濁0正常0血管正常

0無(wú)水腫0