液相色譜常見問題及其對策

液相色譜常見問題及其對策1第1頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日現(xiàn)象：無壓力，流動相不流動可能原因

1、保險絲斷或電源問題

2、柱塞桿折斷

3、泵頭內(nèi)有空氣或流動相不足

4、單向閥損壞

5、漏液

6、壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)液相色譜常見問題及其對策

－壓力異常2第2頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏高或不斷上升

1、流速設(shè)定過高

2、保護(hù)柱或柱子篩板堵塞

3、流動相使用不當(dāng)或有緩沖鹽析出

4、色譜柱選擇不當(dāng)

5、進(jìn)樣閥損壞

6、線路過濾器堵塞液相色譜常見問題及其對策

－壓力異常3第3頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低

1、流速設(shè)定過低

2、色譜柱選擇不當(dāng)

3、柱溫過高

4、系統(tǒng)漏液液相色譜常見問題及其對策

－壓力異常4第4頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日現(xiàn)象：壓力波動可能原因

1、泵頭中有氣泡

2、單向閥損壞

3、柱塞密封圈損壞

4、脫氣不充分

5、系統(tǒng)漏液

6、使用了梯度洗脫液相色譜常見問題及其對策

－壓力異常5第5頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日接頭處漏液

1、接頭處松動

2、接頭磨損

3、接頭被污染

4、部件不匹配

液相色譜常見問題及其對策

－漏液6第6頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日泵漏液

1、單向閥松動

2、泵密封損壞

3、放空閥損壞

4、接頭松動（不要擰的太緊）液相色譜常見問題及其對策

－漏液7第7頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日進(jìn)樣閥漏液可能原因

1、轉(zhuǎn)子密封損壞

2、定量環(huán)堵塞

3、進(jìn)樣口密封松動

4、進(jìn)樣針尺寸不合適

5、廢液管產(chǎn)生虹吸

6、廢液管堵塞液相色譜常見問題及其對策

－漏液8第8頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日檢測器漏液可能原因

1、流通池墊片損壞

2、流通池透鏡破碎

3、手緊接頭處漏液

4、廢液管堵塞

5、流通池堵塞液相色譜常見問題及其對策

－漏液9第9頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日保留時間漂移可能原因

1、柱溫變化

2、流動相組分變化

3、色譜柱沒有平衡

4、流速變化

5、泵中有氣泡

6、流動相選擇不當(dāng)

7、鍵合相流失

8、緩沖容量不夠液相色譜常見問題及其對策

－保留時間漂移10第10頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日基線漂移可能原因

1、溫度波動

2、流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)3、流通池被污染或有氣泡

4、流通池窗口破裂

5、流動相配比不當(dāng)或流速變化

6、柱子平衡（約30－60min）液相色譜常見問題及其對策

－基線問題11第11頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日基線漂移可能原因

7、流動相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成

8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭樣峰被洗出

9、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處液相色譜常見問題及其對策

－基線問題12第12頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日基線噪聲（規(guī)則的）可能原因

1、流動相、泵、檢測器中有氣泡

2、有地方漏液

3、流動相混和不均勻

4、溫度影響（檢測器和柱溫差別太大）

5、其他電子設(shè)備的影響

液相色譜常見問題及其對策

－基線問題13第13頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日基線噪聲（不規(guī)則的）可能原因

1、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

2、有地方漏液

3、流動相各溶劑不相溶或混和不均勻

4、流通池污染

5、檢測池能量不足

6、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡液相色譜常見問題及其對策

－基線問題14第14頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日前沿峰、拖尾峰可能原因

1、柱塞板堵塞

2、色譜柱塌陷

3、柱外效應(yīng)

4、干擾峰

5、緩沖不足或不合適

6、化學(xué)或次級保留（硅羥基效應(yīng)）液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常15第15頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日前沿峰、拖尾峰

可能原因

7、重金屬污染

8、樣品溶劑選擇不當(dāng)

9、樣品過載

10、柱溫過低液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常16第16頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日分叉峰

可能原因

1、保護(hù)柱或分析柱污染

2、樣品溶劑不溶于流動相液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常17第17頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日峰展寬進(jìn)樣體積過大流動相粘度過高檢測池體積過大保留時間過長柱外體積過大樣品過載液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常18第18頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日峰變形

可能原因

1、樣品過載

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常19第19頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日鬼峰1、進(jìn)樣閥殘余峰2、樣品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化液相色譜常見問題及其對策

－峰形異常20第20頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器手動進(jìn)樣器檢測器21第21頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不必將塑料管剪斷吸濾頭液相色譜容易出問題的部件22第22頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日LC-10ATvp泵：串聯(lián)式往復(fù)泵LC-10ADvp泵：并聯(lián)式往復(fù)泵液相色譜容易出問題的部件23第23頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭24第24頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通措施：1）用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生負(fù)壓，使寶石球與墊片分開

2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗單向閥25第25頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件故障2：寶石球或塑料墊片受污導(dǎo)致密封不好表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗單向閥26第26頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日故障：密封圈磨損而導(dǎo)致密封不良現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或漏夜措施：更換密封圈注意點：更換密封圈拆卸泵頭前，柱塞桿復(fù)位（P－SET）柱塞密封圈流動相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈液相色譜容易出問題的部件27第27頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日故障：堵塞現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或壓力偏高措施：5％稀硝酸，超聲波清洗判斷依據(jù)：關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速1mL/min，如壓力>3kgf/cm2，則可能堵塞。線路過濾器排液閥壓力傳感器線路過濾器流動相液相色譜容易出問題的部件28第28頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日手動進(jìn)樣閥故障：轉(zhuǎn)子密封損壞現(xiàn)象：漏液原因：a擰的太緊

b樣品太臟

c針頭損壞或不使用液相專用針解決措施：更換轉(zhuǎn)子密封，并在使用時注意保養(yǎng)液相色譜容易出問題的部件29第29頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥故障：載樣困難

原因：a定量環(huán)堵塞

b進(jìn)樣器污染

解決措施：清洗或更換定量環(huán)、進(jìn)樣器30第30頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日柱子故障：系統(tǒng)高壓、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時間的改變

解決措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05M稀硫酸液相色譜容易出問題的部件31第31頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1.

柱子劣化（進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）2.

樣品劣化（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)

所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化32第32頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日延長柱壽命方法：倒沖柱換過濾片修補(bǔ)柱頭

液相色譜容易出問題的部件33第33頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件柱的補(bǔ)修34第34頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日填料的取出液相色譜容易出問題的部件35第35頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日恢復(fù)例液相色譜容易出問題的部件36第36頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日分析柱的維護(hù)1、在使用新柱之前，最好用強(qiáng)溶劑在低流量下(0.2-0.3ml/min)沖洗30mins，長時間未用的分析柱也要同樣處理2、定期使用強(qiáng)溶劑沖洗柱子3、使用緩沖鹽時，要先用水沖洗，再用有機(jī)溶劑沖洗4、凈化樣品5、分離條件6、不使用時，要蓋上蓋子，避免固定相干枯7、使用預(yù)柱8、避免流動相組成及極性的劇烈變化9、避免壓力脈沖的劇烈變化液相色譜容易出問題的部件37第37頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日更換氘燈（紫外檢測器）

判斷氘燈能量：設(shè)定220nm波長，檢查參比池能量，如能量低于800，需更換氘燈。操作注意點：不要用手直接接觸氘燈表面液相色譜容易出問題的部件38第38頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜容易出問題的部件故障：樣品池受污表現(xiàn)：樣品池和參比池能量相差較大檢查方法：設(shè)定250nm波長，通甲醇或水，查看SMPLEN和REFEN，如兩者相差較大，則樣品池受污。措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染嚴(yán)重，拆開樣品池，將透鏡等放入異丙醇中超聲波清洗。紫外檢測器39第39頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日其他問題溶劑的過濾濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜：

適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)酸，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑40第40頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日脫氣：除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對測定的影響：

1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積

2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形

3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動其他問題41第41頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日脫氣的目的

1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度1）示差折射率檢測器*使折射率變化2）UV檢測器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收3）熒光檢測器*溶解氧氣有消光作用其他問題42第42頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日其他問題脫氣的方法1.

超聲波脫氣法2.He清除法3.使用氟樹脂膜的減壓脫氣法43第43頁，共48頁，2023年，2月20日，星期日其他問題He清