DB33T 2246-2020豬流行性乙型腦炎病毒熒光定量RT－PCR檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS65.020.20浙江省地DB33方標(biāo)準(zhǔn)DBT2246—2020ealtimePCRdetectiontechniqueforJapaneseencephalitisvirus浙江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布前言GBT1.1-2009的規(guī)定編寫。浙江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。口。中心。豬流行性乙型腦炎病毒熒光定量RT－PCR檢測方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬流行性乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)熒光定量RT－PCR檢件、操作步驟和結(jié)果判定等要求。于豬流行性乙型腦炎病毒核酸的檢測。語和定義文件。炎公件儀器。2試劑Trizol：核糖核酸(Ribonucleicacid,RNA)提取試劑。3.2.4焦炭酸二乙酯(Diethylpyrocarbonate,DEPC)水：取DEPC100μL，加超純水至100mL，室eebufferedsalinePBSNaHPOHOgnGGCTCTTATCACGTTCTTCAAGTTT：5－TGCTTTCCATCGGCCYAAAA3，探針：5－FAM-AGCATTAGCCCCGACCAAGGCG-TAMRA-3。3.2.9陽性對照：豬乙型腦炎活疫苗(SA14-14-2株)。操作步驟4.1樣品采集4.2樣品處理nAl4.4.1反應(yīng)體系組成設(shè)立陽性對照、陰性對照，反應(yīng)體系(20μL)由表1中物質(zhì)組成。配制表OneStepRT-PCRBufferⅢExTaqHS(5U/μL)PrimeScriptRTEnzymeMixⅡ10μmol/L)mol/L)針(10μmol/L)A4aseFreedHO4總量4.4.2反應(yīng)條件。4.4.3熒光素的設(shè)定ReportDye為FAM，QuencherDye設(shè)定為none。結(jié)果判定5.1結(jié)果分析條件設(shè)定點(diǎn)為準(zhǔn)。5.2質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)Ct，陰性對照無Ct值且無典型擴(kuò)增曲線，二者同時(shí)成立成立，

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