BCA法測(cè)蛋白資料

BCA法測(cè)定蛋白濃度主講人：周芳亮【原理】：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測(cè)定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。

【主要特點(diǎn)】1.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。2.檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán)。3.快速：45分鐘內(nèi)完成測(cè)定。4.準(zhǔn)確靈敏,線性范圍廣。5.經(jīng)濟(jì)實(shí)用：在微孔板中進(jìn)行測(cè)定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。

【實(shí)驗(yàn)器材與試劑】1．器材:

分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋。2.試劑:BCA試劑盒；待測(cè)樣品?！静僮鞑襟E】1.配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。

2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用生理鹽水稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品BSA。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟200蛋白液稀釋5、按上表，將稀釋好的A-GBSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液，1：10,1:100稀釋液）各150μl分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個(gè)測(cè)定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。6、向每個(gè)試管中各加入3mlBCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘，將各管冷卻至室溫，須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測(cè)。7、用分光光度計(jì)在562nm處，測(cè)定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，同時(shí)做好記錄。8、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度?！咀⒁馐马?xiàng)】：

1.標(biāo)本的充分混勻。

2.要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個(gè)蛋白樣品均需做復(fù)孔,每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.使用水浴箱溫育時(shí)，應(yīng)注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。附錄資料：不需要的自行刪除常用止血包扎方法

院前急救總的任務(wù)：

是維持患者的生命、防止再損傷、減輕患者痛苦，為進(jìn)一步診治創(chuàng)造條件，提高搶救成功率，減少傷殘率院前急救的原則：1、先救治后運(yùn)送2、先重傷后輕傷3、急救與呼救并重4、先排險(xiǎn)后施救5、救治、監(jiān)護(hù)與轉(zhuǎn)運(yùn)的一致性院前急救的原則：6、先復(fù)蘇后固定7、先止血后包扎8、爭(zhēng)分奪秒，就地取材9、保留并低溫保存離斷的肢體或器官?，F(xiàn)場(chǎng)傷員的分類與標(biāo)記：第一急救區(qū)紅色：傷情嚴(yán)重，危及生命者第二急救區(qū)黃色：嚴(yán)重，但無危及生命者第三急救區(qū)綠色：受輕傷者，可以自己行走第四急救區(qū)黑色：死亡傷病員常用急救止血方法指壓動(dòng)脈止血法直接壓迫止血法（加壓包扎）止血帶止血法

指壓止血法用一定的力量將動(dòng)脈壓在骨骼的淺面，壓扁血管以達(dá)到壓迫止血的目的。減少出血，不能完全止血，只能短時(shí)間控制大出血，應(yīng)盡快改用其他方法。指壓止血法常用壓迫點(diǎn)：面動(dòng)脈、枕后動(dòng)脈、尺橈動(dòng)脈、肱動(dòng)脈、股動(dòng)脈、腘動(dòng)脈等。直接壓迫止血法（加壓包扎止血法）抬高受傷部位；無菌敷料覆蓋傷口直接壓迫5分鐘；繼續(xù)出血，在敷料上再加敷料，不要除去最初的敷料。止血帶止血法一般用于控制四肢出血，但損傷大、急性腎功能不全等嚴(yán)重并發(fā)癥；止血帶壓迫靜脈血管，有時(shí)會(huì)使得出血增多，肢體腫脹，不常規(guī)使用，只作為控制；止血帶止血法扎止血帶部位：一般在出血部位的近端，盡量靠近傷口，以減少缺血范圍；上臂的中下1/3處忌扎止血帶，以免損傷橈神經(jīng)；前臂、小腿不宜上止血帶，因?yàn)橛袃筛穷^，使血液阻斷不全。止血帶止血法常用的止血帶止血法:

橡皮管止血帶止血法卡式止血帶止血法三角巾止血帶止血法止血帶止血法用毛巾或紗布加以襯墊，左手拇指、食指、中指夾住止血帶一端，右手將止血帶另一端繞傷肢兩圈，再用左手食指、中指夾住止血帶拉出，形成一個(gè)v字形的方法。當(dāng)出血停止，遠(yuǎn)端摸不到動(dòng)脈搏動(dòng)，就達(dá)到止血目的，最后將時(shí)間標(biāo)簽放在身體的明顯部位，寫上上止血帶時(shí)間和放松時(shí)間。止血帶止血法注意事項(xiàng)：選擇有彈性的膠管或布條，不可用非彈性的繩索和電線；避免直接勒扎皮膚，應(yīng)加襯墊；松緊適宜，以出血停止，遠(yuǎn)端摸不到動(dòng)脈搏動(dòng)為準(zhǔn)；上止血帶之前應(yīng)將傷肢抬高2—3分鐘；

止血帶止血法注意事項(xiàng)：

連續(xù)使用60分鐘應(yīng)放松一次，每次2—3分鐘；在傷員身體明顯處標(biāo)明扎止血帶的時(shí)間和放松時(shí)間，并向接診醫(yī)生交待；需要斷肢再植者不宜扎止血帶，如有動(dòng)脈硬化、糖尿病、慢性腎病等，慎用止血帶。幾種常用的急救包扎方法繃帶包扎法三角巾的頭部帽式包扎法開放性氣胸包扎方法腹部臟器脫出的包扎方法幾種常用的急救包扎方法繃帶包扎法--螺旋形包扎法

適用于肢體粗細(xì)相差不多的部位，多用于四肢包扎.

用無菌敷料覆蓋傷口后，先用繃帶在傷肢遠(yuǎn)端纏繞兩周，再螺旋形向上纏繞，每繞一周重疊1/3—1/2.

幾種常用的急救包扎方法三角巾的頭部帽式包扎法適用于頭皮外傷和出血先用無菌紗布覆蓋傷口，再將三角巾底邊折一下，從雙耳上方向后方延伸，將兩側(cè)底邊在枕骨下面交叉，再回到前額打一個(gè)平結(jié)，再將三角巾頂角收緊折入即可。幾種常用的急救包扎方法開放性氣胸包扎方法

先用大塊無菌紗布或棉墊在深呼氣末封閉傷口，再用三角巾加壓包扎。

幾種常用的急救包扎方