紙色譜與薄層色譜法

紙色譜與薄層色譜法

實(shí)驗(yàn)十五一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解用色譜法定性分析及提純化合物的原理；2.熟悉并掌握薄層色譜及紙色譜的基本操作。二.實(shí)驗(yàn)原理

(1)色譜法色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能(分配)的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì),進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配的作用,從而使各組分分離.流動(dòng)的混合物溶液稱為流動(dòng)相；固定的物質(zhì)稱為固定相。

根據(jù)分離的原理不同,可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等,根據(jù)操作條件的不同,又可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等類型。薄層層析的優(yōu)點(diǎn)：適用于小量樣品（幾到幾十微克）的分離又可用來(lái)精制樣品，特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。(3)

紙色譜

紙色譜主要用于多功能團(tuán)或高極性化合物的分析和分離．基本原理是以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜。供試品經(jīng)展開后，可用比移值(Rf)表示其各組成成分的位置，但由于影響比移值的因素較多，因而一般采用在相同實(shí)驗(yàn)條件下與對(duì)照物質(zhì)對(duì)比以確定其異同。作為藥品的鑒別時(shí)，供試品在色譜中所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置，應(yīng)與對(duì)照品在色譜中所顯的主斑點(diǎn)相同。作為藥品的純度檢查時(shí)，可取一定量的供試品，經(jīng)展開后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)或呈色（或熒光）的強(qiáng)度。Rf=溶液最高濃度中心至原點(diǎn)中心距離/溶劑前沿至原點(diǎn)中心的距離。紙色譜演示四．操作步驟（一）、薄層色譜偶氮苯和蘇丹III的分離

（1）、薄層板制備：將硅膠G和CMC溶液調(diào)成均勻的糊狀，用滴管涂于潔凈的載玻片上，取下涂好薄層板，置水平桌面上于室溫下晾干，在110℃烘60分鐘。置于干燥箱中留以備用。（2）、

點(diǎn)樣：距底邊1cm處劃一橫線作為起始線，點(diǎn)樣直徑不應(yīng)超過(guò)2mm，點(diǎn)間距離約為1.8cm，點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大，像降落傘。取三塊分別點(diǎn)樣試劑為偶氮苯和混合液，混合液和蘇丹III，偶氮苯和蘇丹III

（3）

展開：廣口瓶需預(yù)先用展開劑（9：1的無(wú)水苯-乙酸乙酯）飽和，將點(diǎn)好樣品的薄層板放入裝有展開劑的廣口瓶中，薄層板浸入展開劑的深度為距薄層板底邊約0.7cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中），密封室蓋，等展開至規(guī)定距離（距薄層板上端1cm左右），取出薄層板，盡快劃一橫線，晾干，測(cè)出顯色點(diǎn)與起始線的距離和溶劑上升的距離，并計(jì)算比移值。裝置圖薄層色譜紙色譜五.

注意事項(xiàng)1.薄層板制備好之后，一定要進(jìn)行活化，除去水分；2.點(diǎn)樣時(shí)要注意樣點(diǎn)直徑要不超過(guò)2mm。點(diǎn)幾個(gè)樣點(diǎn)時(shí)間隔應(yīng)1—1.5㎝。一次點(diǎn)樣若不夠，可點(diǎn)幾次，但要等溶劑揮發(fā)后再點(diǎn)下一次，防止量多出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；3.所用濾紙應(yīng)質(zhì)地均勻平整且實(shí)驗(yàn)中手不要觸及濾紙的表面，以免污染；4.避免兩條濾紙?jiān)诖笤嚬苤信鲆黄?，切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中；5.若溶質(zhì)展開后較分散,則選取其最高濃度中心；6.在向?yàn)V紙噴灑茚三酮時(shí)，要以霧狀噴灑，不能有液滴在其表面凝集，更不能有液滴在其表面流動(dòng)，以免影響展開效果.六.思考題1.如何利用Rf值來(lái)鑒定化合物?2.在