水環(huán)境監(jiān)測中的細菌及浮游生物指標

水環(huán)境監(jiān)測中的細菌和浮游生物指標

09海科（2）班繆國培以《丹江口水庫的細菌和浮游生物監(jiān)測及評價》為例目錄論文背景材料與方法結果與分析結果與建議1.論文背景1.1丹江口水庫簡介丹江口水庫是我國水資源調(diào)整的重大工程——南水北調(diào)中線工程的水源地，為亞洲最大的淡水湖，是江漢丹江兩大水系重要的控制性工程，這兩條河流也是水庫的主要入庫河流，因其水量大，自凈能力強，水質較好，致使丹江口水庫的水準優(yōu)良。但隨著庫區(qū)周圍地區(qū)經(jīng)濟的進一步發(fā)展，由于自然因素以及人為因素使入庫干、支流水質發(fā)生變化,必將影響丹江水庫的水質。2.材料與方法2.1材料2.1.1培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、半固體培養(yǎng)基、EC培養(yǎng)基等。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基(EMB)、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、TCBS瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基等購自哈爾濱海峽醫(yī)藥有限公司。2.1.2檢驗試劑呂氏堿性美蘭溶液、革蘭氏染液、孔雀綠染液、福爾馬林固定液等。2.材料與方法2.2實驗方法1.2.1水樣采集在陶岔、小太平洋、大石橋設3個點(總站授權南陽市環(huán)境保護監(jiān)測站檢測點),按水樣采集標準采集無菌水樣、生物檢測樣和理化檢測樣?，F(xiàn)場測定水溫(t)、溶解氧(DO)、pH等部分常規(guī)檢測項目。渠首陶岔水質的理化檢測由在渠首設的自動監(jiān)測儀測定(同時也進行人工測定)。其它兩個點的水溫、pH、DO、電導率(EC)由便攜式儀器測定。透明度采用塞氏盤法測定回顧一下塞氏盤法與透明度：塞氏盤法是一種現(xiàn)場測定透明度的方法。塞氏盤為直徑200mm的白鐵片圓板，板面從中心平分為四個部分，黑白相間，中心穿一帶鉛錘的鉛絲，上面記一用cm標記的細繩。測定時，將塞氏盤平放入水中，逐漸下沉，到剛好看不到盤面的白色時，記錄深度（cm），即為水的透明度。

回顧一下：細菌的平板分離與純化稀釋涂布平板法：

優(yōu)點：可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。

缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計數(shù)。常用于分離好養(yǎng)細菌。

稀釋混合平板法（本實驗即采用此法）：

優(yōu)點：可以計數(shù)，吸收量為1ml，較方便。

優(yōu)點：不能觀察菌落特征。

一般用于菌落總數(shù)的計數(shù)（即本實驗所要達到的目的）。常用于分離兼性厭氧細菌。

平板劃線法：

優(yōu)點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離.

缺點：不能計數(shù)

一般用于從菌種的分純.了解：細菌檢測的方法原理據(jù)《海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)程》：大腸菌群系一群在37℃或44℃生長時能使乳糖發(fā)酵、在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群數(shù)系指單位生物樣中所含有的“大腸菌群”的數(shù)目。一般在37℃培養(yǎng)生長的稱為“總大腸菌群”，在44℃培養(yǎng)生長的稱為“糞大腸菌群”。海洋生物檢驗采用44℃培養(yǎng)法，以檢出糞大腸菌群（即耐熱大腸桿菌）。發(fā)酵法系通過初發(fā)酵及復發(fā)酵二個步驟，以證實生物體中是否存在糞大腸菌群并測定其數(shù)目。知識拓展大腸桿菌（細胞學分類）：原核生物界-變形菌門-γ變形菌綱-腸桿菌目-腸桿菌科-埃希氏菌屬-大腸桿菌種大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛(wèi)生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。調(diào)查研究表明，大腸菌群細菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)?；顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方，人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多2.2.2細菌檢測2.2.2.2總大腸菌群數(shù)的測定采用多管發(fā)酵法(MPN法)。(1)稀釋水樣:以無菌操作取水樣10mL放于含有90mL滅菌生理鹽水的玻璃瓶內(nèi),經(jīng)充分振搖做成1﹕10的均勻稀釋液。(2)乳糖發(fā)酵試驗:無菌操作水樣10mL接種于各裝有5mL3倍濃縮乳糖蛋白胨的發(fā)酵管(內(nèi)有導管)5支;另取1.0mL、0.1mL水樣分別接種于各裝有10mL乳糖蛋白胨的發(fā)酵管(內(nèi)有導管)各5支,接種后置37攝氏度溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察結果。2.2.2.2總大腸菌群數(shù)的測定（3）平板分離:發(fā)酵管顏色變黃為產(chǎn)酸,杜氏小管內(nèi)有氣泡為產(chǎn)氣。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸發(fā)酵管分別轉種到EMB（伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基）上,37攝氏度培養(yǎng)24h觀察菌落。挑取符合下列特征的菌落進行革蘭氏染色、鏡檢菌體形態(tài)。特征性的菌落性狀為:深紫黑色,具有金屬光澤的菌落;紫黑色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;淡紫紅色,中心色較深的菌落。2.2.2.2總大腸菌群數(shù)的測定（4）復發(fā)酵實驗：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,則挑取該菌落接種于乳糖發(fā)酵管,于37攝氏度培養(yǎng)24h。如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,即證實有大腸菌群存在。（5）結果計算：根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN檢索表,并換算出大腸菌群的最近似數(shù)(MPN值)。2.2.3浮游生物的鑒定將加有5%固定液的水樣用濾器抽濾、濃縮,取濃縮水樣在普通顯微鏡下鑒定,初步將浮游生物鑒定到屬或種。3.結果與分析(3.1細菌結果分析)3.1丹江口水庫細菌監(jiān)測結果

污染指數(shù)評價表細菌總數(shù)CFU/mL＞106105~106102~105<102水質水質評價多污帶α-中污帶β-中污帶寡污帶飲用水質量評價表細菌總數(shù)CFU/mL≤100糞大腸菌群數(shù)(個/L)≤3≤200≤104國家飲用水標準Ⅰ類水標準Ⅱ類水標準Ⅲ類水標準3.1結果分析（細菌角度）根據(jù)2004年春季和夏季陶岔、小太平洋和大石橋3個點的細菌菌落總數(shù)、總大腸菌群數(shù)和糞大腸菌群數(shù)測定結果。從細菌監(jiān)測結果可知,3個點水質質量依次為:小太平洋>大石橋>陶岔,小太平洋水質符合Ⅰ類水標準,可與天然礦泉水相媲美。3.2結果分析（浮游生物角度）陶岔水樣中浮游植物為裸藻門、硅藻門和綠藻門,其中硅藻為優(yōu)勢種;小太平洋水樣中浮游植物為硅藻門和綠藻門,其中硅藻為優(yōu)勢種;大石橋水樣中有硅藻門和綠藻門,其中硅藻為優(yōu)勢種。綜上所述：從浮游生物檢測結果可知:水源區(qū)未檢出污染指示種,但水庫處于中營養(yǎng)狀態(tài)。4.結論與建議丹江口水庫各檢測水樣中已分離純化的細菌經(jīng)初步鑒定多為腸桿菌,尚未發(fā)現(xiàn)