基因工程操作程序演示文稿

基因工程操作程序演示文稿現在是1頁\一共有40頁\編輯于星期五基因工程操作程序現在是2頁\一共有40頁\編輯于星期五補：原核細胞的基因結構非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結合位點啟動子終止子RNA聚合酶能夠識別調控序列中的結合位點，并與其結合。

轉錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。

轉錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來?，F在是3頁\一共有40頁\編輯于星期五①不能轉錄為信使RNA，不能編碼蛋白質。：能轉錄相應的信使RNA，能編碼蛋白質編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細胞的基因結構②有調控遺傳信息表達的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結合位點。啟動子現在是4頁\一共有40頁\編輯于星期五補：真核細胞的基因結構編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結合位點內含子

外顯子

啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游啟動子終止子現在是5頁\一共有40頁\編輯于星期五補：真核細胞的基因結構編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結合位點內含子

外顯子

能夠編碼蛋白質的序列叫做外顯子

不能夠編碼蛋白質的序列叫做內含子啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內含子：外顯子：現在是6頁\一共有40頁\編輯于星期五現在是7頁\一共有40頁\編輯于星期五真核細胞的基因結構編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質的序列內含子：不能編碼蛋白質的序列：有調控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA

聚合酶結合位點。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內含子現在是8頁\一共有40頁\編輯于星期五原核細胞真核細胞不同點編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點都由能夠編碼蛋白質的______和具有調控作用的______區(qū)組成的原核細胞與真核細胞的基因結構比較思考編碼相同數目氨基酸的蛋白質，原核細胞與真核細胞基因結構一樣長嗎？連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼現在是9頁\一共有40頁\編輯于星期五基因工程基本操作的四個步驟1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構建3、將目的基因導入受體細胞4、目的基因的檢測與鑒定現在是10頁\一共有40頁\編輯于星期五一、目的基因的獲取1、目的基因主要是指______________________編碼蛋白質的結構基因請舉出三個以上的例子2、獲取目的基因的常用方法有哪些?（1）從基因文庫中獲取（2）利用PCR技術擴增（3）人工合成請閱讀P9第一和二兩段現在是11頁\一共有40頁\編輯于星期五(一)從基因文庫中獲取目的基因

將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫基因文庫

基因組文庫部分基因文庫（如:cDNA文庫）1.基因文庫現在是12頁\一共有40頁\編輯于星期五基因組文庫與部分基因文庫的關系現在是13頁\一共有40頁\編輯于星期五2.基因文庫的構建方法①鳥槍法：供體細胞中的DNA許多DNA片段運載體限制酶與載體連接載入受體細胞產生特定性狀導入外源DNA擴增目的基因分離(直接分離法)(一)從基因文庫中獲取目的基因現在是14頁\一共有40頁\編輯于星期五②反轉錄法：cDNA文庫

以目的基因轉錄成的信使RNA為模板，反轉錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA雜交雙鏈(單鏈RNA/單鏈DNA)單鏈DNA反轉錄酶核酸酶H2.基因文庫的構建方法DNA聚合酶雙鏈DNA（cDNA）(目的基因)現在是15頁\一共有40頁\編輯于星期五上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點？優(yōu)點缺點鳥槍法反轉錄法根據已知氨基酸合成DNA法操作簡便廣泛使用工作量大，盲目，分離出來的有時并非一個基因專一性強操作過程麻煩，mRNA很不穩(wěn)定，要求的技術條件較高專一性最強僅限于合成核苷酸對較少的簡單基因現在是16頁\一共有40頁\編輯于星期五(二)利用PCR技術擴增目的基因現在是17頁\一共有40頁\編輯于星期五①概念：PCR全稱為_______________，是一項在生物____復制___________的核酸合成技術③條件：_______________________、

______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式擴增，即____（n為擴增循環(huán)的次數）⑤結果：聚合酶鏈式反應體外特定DNA片段DNA復制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物Taq酶指數2n使目的基因的片段在短時間內成百萬倍地擴增(二)利用PCR技術擴增目的基因現在是18頁\一共有40頁\編輯于星期五⑥過程：a、DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復性25℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈現在是19頁\一共有40頁\編輯于星期五現在是20頁\一共有40頁\編輯于星期五（3）人工合成一、目的基因的獲?、贄l件：如基因比較小，

又已知；②方法：可借助

用化學方法直接人工合成。核苷酸序列DNA合成儀現在是21頁\一共有40頁\編輯于星期五③根據已知的氨基酸序列合成DNA法：

根據已知蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結構基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結構基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學合成2.基因文庫的構建方法現在是22頁\一共有40頁\編輯于星期五1.用一定的_________切割質粒，使其出現一個切口，露出____________。2.用_____________切斷目的基因，使其產生_________________。(二)基因表達載體的構建——

核心3.將切下的目的基因片段插入質粒的______處，再加入適量___________，形成了一個重組

DNA分子（重組質粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同現在是23頁\一共有40頁\編輯于星期五質粒DNA分子限制酶處理一個切口兩個黏性末端兩個切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質粒）——

核心同一種(二)基因表達載體的構建4.過程:現在是24頁\一共有40頁\編輯于星期五5.基因表達載體的組成：復制原點+目的基因+啟動子+終止子+標記基因它們有什么作用？現在是25頁\一共有40頁\編輯于星期五(三)將目的基因導入受體細胞轉化——目的基因進入_________內，并且在受體細胞內維持_____和_____的過程受體細胞穩(wěn)定表達現在是26頁\一共有40頁\編輯于星期五(三)將目的基因導入受體細胞轉化——方法將目的基因導入植物細胞將目的基因導入動物細胞將目的基因導入微生物細胞農桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——感受態(tài)細胞目的基因進入_________內，并且在受體細胞內維持_____和_____的過程受體細胞穩(wěn)定表達現在是27頁\一共有40頁\編輯于星期五1、將目的基因導入植物細胞的方法：農桿菌轉化法（1）農桿菌介紹（2）原理及適用范圍(三)將目的基因導入受體細胞現在是28頁\一共有40頁\編輯于星期五2、將目的基因導入動物細胞（1）方法：顯微注射法（2）程序：(三)將目的基因導入受體細胞3、將目的基因導入微生物細胞（1）思考：為什么選用微生物作為受體細胞？（2）方法：現在是29頁\一共有40頁\編輯于星期五現在是30頁\一共有40頁\編輯于星期五(四)目的基因的檢測與鑒定——檢查是否成功檢測—①檢測轉基因生物染色體的DNA

上是否插入了目的基因方法——DNA分子雜交現在是31頁\一共有40頁\編輯于星期五現在是32頁\一共有40頁\編輯于星期五(四)目的基因的檢測與鑒定——檢查是否成功檢測—①檢測轉基因生物染色體的DNA

上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質方法——方法——方法——DNA分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）抗原抗體雜交現在是33頁\一共有40頁\編輯于星期五現在是34頁\一共有40頁\編輯于星期五(四)目的基因的檢測與鑒定——檢查是否成功檢測—鑒定——①檢測轉基因生物染色體的DNA

上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法——方法——方法——DNA分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）抗原抗體雜交現在是35頁\一共有40頁\編輯于星期五DNA分子雜交示意圖

采用一定的技術手段，將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。P15思考與探究現在是36頁\一共有40頁\編輯于星期五1）以下說法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列

B、質粒是基因工程中唯一的運載體

C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接

D、基因控制的性狀都能在后代表現出來C練習現在是37頁\一共有40頁\編輯于星期五2）不屬于質粒被選為基因運載體的理由是

A、能復制（）

B、有多個限制酶切點

C、具有標記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習現在是38頁\一共有40頁\編輯于星期五3）有關基因工程的敘述中，錯誤的是（）

A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來