實驗十七偶氮胂Ⅲ法測血鈣

實驗十七偶氮胂Ⅲ法測血鈣第1頁/共16頁實驗十七偶氮胂Ⅲ法測血鈣

第2頁/共16頁

血漿中約含鈣2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三種形式存在：①非擴散鈣(non-difusionalcalcium)：是指與血漿蛋白相結合的鈣，占血漿總鈣的45%；②離子鈣(ioncalcium)：是具有生理活性的部分，約占血漿總鈣的50%；③絡合鈣(chelatingcalcium)：主要指與枸櫞酸結合的鈣，是體內鈣的一種運輸方式，約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡合鈣都能透過毛細血管壁，故統(tǒng)稱為擴散鈣。血鈣的測定方法很多，一般可分為總鈣測定和離子鈣測定法。前者包括同位素稀釋質譜法(isotopedilutingmassspectrometry)、原子吸收光譜法(atomicabsorptionspectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡合滴定法(chelatingtitration)等。AAS是最常用的準確測定血漿總鈣含量的參考方法，但費用昂貴，不適于常規(guī)工作；分光光度法中以甲基百里香酚藍比色法（methylthymolbluecolorimetry）和偶氮胂Ⅲ比色法（ArsenazoⅢcolorimetry）最常用。絡合滴定法簡便易行，但判斷終點受主觀因素影響，有被淘汰趨勢，但不少基層實驗室仍延用。離子選擇電極法測定離子鈣已在臨床廣泛應用。分光光度法已被廣泛用自動生化分析議分析。

第3頁/共16頁【實驗原理】

在堿性條件下，樣品中鈣與偶氮胂Ⅲ作用生成藍色復合物，其顏色深淺與鈣濃度成正比，通過在660nm波長處測定吸光度的變化值，與經過同樣處理的鈣校準液進行比較，即可計算出樣品中鈣含量。

第4頁/共16頁【操作步驟】

測定管（U）標準管（S）空白管（B）試劑（ml）2.02.02.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml）----0.02標準液（ml）--0.02--血清0.02----混勻，37恒溫2分鐘，660nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。第5頁/共16頁【計算】樣品鈣含量（mmol/L）=×2.50【參考范圍】血清鈣：2.1～2.6mmol/L【臨床意義】

（1）低鈣血癥見于①攝入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期婦女；③吸收減少：佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥；④腎臟疾病：急、慢性腎衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒；⑤壞死性胰腺炎。（2）高鈣血癥見于①攝入鈣過多：靜脈用鈣過量、大量飲用牛奶等；②原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥、腎癌等使血鈣升高；③服用維生素D過多，鈣吸收作用增強；④骨?。鹤冃涡怨茄?、轉移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有異位內分泌作用的腫瘤；⑥長期制動引起骨骼脫鈣。第6頁/共16頁【評價】

1.線性范圍：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。

2.精密度：批內、批間平均CV分別≤5.0%

3.準確度：不準確度≤10%

4.試劑空白吸光度值≤0.35。【注意事項】1.樣品中鈣含量超過5.00mmol/L，則用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋倍數(shù)。2.測試溫度無嚴格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應保持反應體系恒溫。3.高脂樣本會引起測定結果假性升高，可用樣本空白管校正。4.反應形成的色素可穩(wěn)定2小時。

5.所用試驗器材必須清潔，沒有鈣污染。

6.試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。

7.試劑使用后立即關緊瓶蓋，避免污染。

8.使用肝素作為抗凝劑時濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。第7頁/共16頁實驗十七鈣鎂試劑比色法測血鎂【目的要求】1.掌握比色法測血鎂2.熟悉血鎂測定的其他方法【實驗原理】

血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應生成紫紅色絡合物。顏色深淺與美的濃度成正比，與同樣處理的標準品比較，可以求得鎂的含量。第8頁/共16頁【操作步驟】

測定管（U）標準管（S）空白管（B）試劑（ml）2.02.02.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml）----0.02標準液（ml）--0.02--血清0.02----混勻，37恒溫2分鐘，540nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。第9頁/共16頁【計算】樣品鎂含量（mmol/L）=×1.0【參考范圍】血清鎂：0.67～1.04mmol/L【評價】

1.線性范圍：2.0mmol/L±10%。

2.精密度：批內、批間平均CV分別≤5.0%

3.準確度：不準確度≤10%

4.試劑空白吸光度值≤1.10。第10頁/共16頁

【注意事項】1.試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。2.測試溫度無嚴格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應保持反應體系恒溫。3.高脂樣本會引起測定結果假性升高，可用樣本空白管校正。4.反應形成的色素可穩(wěn)定1小時。

5.所用試驗器材必須清潔，沒有鎂污染。

6.所用試劑具有毒性和腐蝕性，請勿用口吸吸管，如有污染，應立刻用大量流水沖洗。第11頁/共16頁實驗十八還原鉬藍法測血清磷

血液中的磷(phosphorus)主要有兩種形式：有機磷和無機磷。血清無機磷含量與血鈣有一定關系，兩者濃度的乘積為一常數(shù)（以mg/dl濃度計算，乘積等于40）。磷參與機體糖、脂類及氨基酸的代謝，是骨鹽的主要成分，也是轉運能量的物質，磷酸鹽是調節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一?！灸康囊蟆?.掌握此法測血磷的原理。2.熟悉血磷測定的其他方法第12頁/共16頁【實驗原理】

利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應生成磷鉬酸復合物，用對甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍，與同樣處理的標準液進行比色，可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質干擾。第13頁/共16頁【操作步驟】

測定管（U）標準管（S）空白管（B）去離子水（ml）----0.1磷標準液（ml）--0.1--血清0.1----顯色液（ml）4.04.04.0

混勻，37恒溫10分鐘，650nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。第14頁/共16頁【計算】樣品磷含量（mmol/L）=×1.29【參考值】成人0.97～1.62mmol/L；兒童1.45～2.10mmol/L【臨床意義】1.低磷血癥見于①攝入不足和吸收減少：饑餓或惡病質、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長期