分子生物學(xué)常用技術(shù) 核酸分子雜交技術(shù) 分子生物學(xué)_第1頁
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核酸分子雜交技術(shù)主講人:XXX目錄01核酸分子雜交的定義和基本原理02核酸探針03分子雜交的類型及主要步驟04核酸分子雜交條件的優(yōu)化核酸分子雜交的定義和基本原理01核酸分子雜交的定義和基本原理定義·單鏈的核酸分子在合適的條件下，與具有堿基互補序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱分子雜交?！だ煤怂岱肿与s交檢測靶序列的一類技術(shù)稱核酸分子雜交技術(shù)。核酸分子雜交的定義和基本原理基本原理DNA鏈與DNA鏈、DNA與RNA鏈、RNA與RNA鏈之間，只要具有一定的互補堿基序列就可以在適當(dāng)?shù)臈l件下相互結(jié)合形成雙鏈，用已知的DNA或RNA片段來檢測未知的DNA或RNA片段。DNADNARNARNA核酸探針02核酸探針定義是指能與特定的靶核酸序列（DNA或RNA）發(fā)生堿基互補結(jié)合，并被標(biāo)記且可采用某些特殊的方法檢測出來已知序列的核酸分子。核酸探針分類1基因組DNA探針2cDNA探針3RNA探針4寡核苷酸探針核酸探針DNA探針是最常用的核酸探針，多為某一基因的全部或部分序列，或某一非編碼序列。這些DNA片段是特異的，如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針?；蚪MDNA探針核酸探針（1）制備方法簡便，?？寺≡谫|(zhì)粒載體中，可以無限繁殖；（2）不易降解；（3）標(biāo)記方法較成熟。cDNA探針是以mRNA為模板經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄酶催化產(chǎn)生的互補于mRNA的DNA鏈。DNA探針優(yōu)點cDNA探針核酸探針RNA探針RNA探針可以是標(biāo)記分離的RNA，但通常是重組質(zhì)粒在RNA聚合酶作用下的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。優(yōu)點：更高的雜交效率。缺點：易于降解，標(biāo)記方法復(fù)雜。核酸探針寡核苷酸探針較短，一般由17～50個核苷酸組成?？梢允枪丫勖撗鹾颂呛怂帷⒐丫酆颂呛怂?、或修飾后的肽核酸。優(yōu)勢：可以區(qū)分僅僅一個堿基差異的靶序列。缺陷：不如長的雜交核酸分子穩(wěn)定，需優(yōu)化雜交和洗脫條件。分子雜交的類型及主要步驟03分子雜交的類型及主要步驟、固相雜交：將需要雜交的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，另一條核酸鏈游離在液體中液相雜交：參與反應(yīng)的兩條核酸鏈都游離在液體中類型分子雜交的類型及主要步驟核酸分子與固相介質(zhì)的結(jié)合信號檢測雜交主要步驟核酸分子雜交條件的優(yōu)化04核酸分子雜交條件的優(yōu)化探針標(biāo)記方法探針的選擇雜交率雜交的嚴(yán)格性雜交最適溫度雜交促進劑探針的濃度雜交反應(yīng)時間條件優(yōu)化小結(jié)核酸分子雜交的定義和基本原理核酸分子雜交的定義和基本原

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