軍團(tuán)菌病應(yīng)急處置程序參考方案

第第10頁(yè)共23頁(yè)軍團(tuán)菌病應(yīng)急處置程序參考方案軍團(tuán)菌病應(yīng)急處置技術(shù)方案總則背景軍團(tuán)菌病〔Legionnaires“sdisease〕是由軍團(tuán)病桿菌引起的以肺部感染為主可合并肺外多個(gè)系統(tǒng)損害的一種呼吸道傳染病。受感染的人和動(dòng)物排出的軍團(tuán)桿菌污染環(huán)境、土壤和水源,成為本病的傳染源,其中軍團(tuán)菌污染的各種水源為主要傳染源。傳染的主要途徑是:經(jīng)呼吸道傳染含軍團(tuán)桿菌的氣溶膠通過(guò)空氣由人直接吸入肺泡〔空氣傳播〕氣溶膠是軍團(tuán)菌傳播、患有慢性病的或有免疫功能低下的,以及長(zhǎng)期吸煙者都是易感人群。軍團(tuán)菌病全年均可發(fā)生,而以6至10月份發(fā)病最多。流行主要因素：水溫適當(dāng)靜止的水源如大容積貯水器空氣水混合局部的水龍頭及淋浴噴頭處溫水游泳池空調(diào)冷疑水超聲潮濕器系統(tǒng)的帶菌是本病流行的主要緣由。該病首發(fā)于1976年美國(guó)的一次退伍軍人聚會(huì)。此后歐洲、澳洲等不同國(guó)家和地區(qū)相繼覺(jué)察軍團(tuán)菌病例。目前多個(gè)國(guó)家已將軍團(tuán)菌肺炎為法定傳染病WHO也將其列入傳染病報(bào)告范圍。全球每年都有數(shù)起軍團(tuán)菌病爆發(fā)流行其發(fā)病率約為12/10201982京、天津、福建、、四川、廣東、山東、哈爾濱、山西、河北、遼寧、疆、上海等地都有病例發(fā)生的報(bào)告。作為全球國(guó)際化休閑城目前隨著百姓生活水平的逐步提高城中高層建筑的日益增多空調(diào)廣泛使用熱水管、噴水池、淋浴及加濕器等設(shè)備的普及這些都有可能增加軍團(tuán)菌病的危急性。因而軍團(tuán)菌病已作為一種“現(xiàn)代生活文明病”在不斷威逼著人們的安康。編制目的通過(guò)實(shí)施本技術(shù)方案構(gòu)建預(yù)防為主、防治結(jié)合的軍團(tuán)菌病的應(yīng)急處理機(jī)制提高快速反響和應(yīng)急處理力量做到“早覺(jué)察、早報(bào)告、早采樣、早隔離、早治療”有效地掌握疫情集中集中保障人民群眾的身體安康和生命安全確保社會(huì)穩(wěn)定和經(jīng)濟(jì)進(jìn)展。編制依據(jù)依據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》、《突發(fā)公共衛(wèi)生大事應(yīng)急條例》、《省軍團(tuán)菌病應(yīng)急處置技術(shù)方案》等法律法規(guī)制定本方案。適用范圍本方案適用于應(yīng)對(duì)軍團(tuán)菌病爆發(fā)疫情的前期預(yù)備工作及暴發(fā)發(fā)生后的應(yīng)急處理工作。疫情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)急響應(yīng)疫情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)軍團(tuán)菌病疫情涉及的范圍、危害程度、以及對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的影響將疫情分為四級(jí)：Ⅰ級(jí)疫情〔紅色預(yù)警〕、Ⅱ級(jí)疫情〔橙色預(yù)警〕、Ⅲ級(jí)疫情〔黃色預(yù)警〕、Ⅳ級(jí)疫情〔藍(lán)色預(yù)警〕具體分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：Ⅰ級(jí)疫情〔紅色預(yù)警〕：2周以內(nèi)一個(gè)社區(qū)、建筑工地、學(xué)校商場(chǎng)醫(yī)院賓館等集體單位發(fā)生10例及以上軍團(tuán)菌病病例或死亡1例及以上或多點(diǎn)同時(shí)爆發(fā)。Ⅱ級(jí)疫情〔橙色預(yù)警〕：一個(gè)社區(qū)、建筑工地、學(xué)校商場(chǎng)醫(yī)院賓館等集體單位發(fā)生5例及以上軍團(tuán)菌病病例無(wú)死亡病例。Ⅲ級(jí)疫情〔黃色預(yù)警〕：一個(gè)社區(qū)、建筑工地、學(xué)校商場(chǎng)1Ⅳ級(jí)疫情〔藍(lán)色預(yù)警〕：省內(nèi)其他城消滅軍團(tuán)菌病病例。分級(jí)應(yīng)急響應(yīng)依照疫情分類標(biāo)準(zhǔn)確定疫情預(yù)警級(jí)別實(shí)行不同的響應(yīng)措施：Ⅰ級(jí)疫情〔紅色預(yù)警〕的應(yīng)急響應(yīng)由省疾病預(yù)防掌握中心參與現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)指導(dǎo)和處置疫情發(fā)生地及其所在疾病預(yù)防掌握中心負(fù)責(zé)現(xiàn)場(chǎng)處置。Ⅱ級(jí)疫情〔橙色預(yù)警〕的應(yīng)急響應(yīng)由省疾病預(yù)防掌握中心參與現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)指導(dǎo)疫情發(fā)生地及其所在疾病預(yù)防掌握中心負(fù)責(zé)現(xiàn)場(chǎng)處置。Ⅲ級(jí)疫情〔黃色預(yù)警〕的應(yīng)急響應(yīng)級(jí)疾控中心參與現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)指導(dǎo)疫情發(fā)生地疾病預(yù)防掌握中心負(fù)責(zé)現(xiàn)場(chǎng)處置。Ⅳ級(jí)疫情〔藍(lán)色預(yù)警〕的應(yīng)急響應(yīng)級(jí)疾控中心組織技術(shù)與物資預(yù)備由疫情發(fā)生地疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)接觸者醫(yī)學(xué)觀看現(xiàn)場(chǎng)。應(yīng)急響應(yīng)的終止末例軍團(tuán)菌病例發(fā)生后連續(xù)16天無(wú)發(fā)病例消滅該次應(yīng)急響應(yīng)終止。疫情的應(yīng)急監(jiān)測(cè)與報(bào)告疫情應(yīng)急監(jiān)測(cè)依據(jù)《省軍團(tuán)菌病監(jiān)測(cè)方案》的要求開展重點(diǎn)人群重點(diǎn)地區(qū)監(jiān)測(cè)覺(jué)察軍團(tuán)菌臨床診斷病例個(gè)案應(yīng)準(zhǔn)時(shí)報(bào)告。醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員接診群體性軍團(tuán)菌病爆發(fā)或群體不明緣由肺炎患者具有相像臨床病癥并在發(fā)病時(shí)間、地點(diǎn)、人群上有關(guān)聯(lián)性的要依據(jù)《群體性不明緣由疾病應(yīng)急處置方案》要求準(zhǔn)時(shí)報(bào)告。疫情報(bào)告各級(jí)各類醫(yī)療衛(wèi)生氣構(gòu)為軍團(tuán)菌病臨床診斷病例個(gè)案責(zé)任報(bào)告單位執(zhí)行職務(wù)的各級(jí)各類醫(yī)療衛(wèi)生氣構(gòu)的醫(yī)療衛(wèi)生人員、個(gè)體開業(yè)醫(yī)生為責(zé)任報(bào)告人?？h區(qū)級(jí)疾病預(yù)防掌握機(jī)構(gòu)接到軍團(tuán)菌病例或爆發(fā)疫情報(bào)告后應(yīng)馬上進(jìn)展核實(shí)并在2小時(shí)內(nèi)向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門報(bào)告同時(shí)向級(jí)疾病預(yù)防掌握中心報(bào)告。級(jí)疾病預(yù)防掌握中心接到報(bào)告后2小時(shí)內(nèi)向同級(jí)衛(wèi)生行政部門和省疾病預(yù)防掌握中心報(bào)告。省疾病預(yù)防掌握中心接到報(bào)告后2小時(shí)內(nèi)向同級(jí)衛(wèi)生行政部門和中國(guó)疾病預(yù)防掌握中心報(bào)告。先期處置現(xiàn)場(chǎng)工作的啟動(dòng)縣區(qū)級(jí)疾病預(yù)防掌握中心接到疫情報(bào)告后應(yīng)馬上確定信息是否屬實(shí)經(jīng)初步證明后馬上報(bào)告同級(jí)衛(wèi)生行政部門并快速組織現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和實(shí)施掌握措施。級(jí)疾病預(yù)防掌握中心接到下級(jí)單位的疫情報(bào)告后應(yīng)依據(jù)對(duì)大事嚴(yán)峻性的判定或下級(jí)的懇求做出相應(yīng)的響應(yīng)必要時(shí)派專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)和參與調(diào)查處置。如果大事規(guī)模到達(dá)“突發(fā)公共衛(wèi)生大事應(yīng)急預(yù)案分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)”的應(yīng)馬上向同級(jí)衛(wèi)生行政部門報(bào)告；同時(shí)成立調(diào)查處理小組成員應(yīng)包括流行病學(xué)、檢驗(yàn)、消殺等人員。初步確定調(diào)查處理方案準(zhǔn)備好各種調(diào)查表格、采樣用品、消殺藥械等。核實(shí)疫情首先了解診斷是否明確是否牢靠。假設(shè)診斷明確、牢靠則可明確疫情性質(zhì)；否則需要進(jìn)展初步調(diào)查來(lái)核實(shí)與參與診治的臨床醫(yī)生進(jìn)展訪談了解就診的病人狀況收集病人的病癥、體征和試驗(yàn)室資料必要時(shí)親自對(duì)現(xiàn)癥病人進(jìn)展體格檢查和采樣檢測(cè)并詢問(wèn)其發(fā)病經(jīng)過(guò)、診治過(guò)程、有關(guān)的流行病學(xué)史、疾病傳播以及危急因子等。最終依據(jù)病例的臨床表現(xiàn)、試驗(yàn)室結(jié)果結(jié)合流行病學(xué)資料進(jìn)展綜合分析對(duì)疫情作出初步推斷。現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急處置個(gè)案調(diào)查對(duì)覺(jué)察并核實(shí)后的每個(gè)病例都應(yīng)準(zhǔn)時(shí)地進(jìn)展流行病學(xué)調(diào)查完整地、逐項(xiàng)地填寫個(gè)案調(diào)查表〔見(jiàn)附件《軍團(tuán)菌病個(gè)案調(diào)查表》〕并采集相應(yīng)的標(biāo)本。依據(jù)病人的臨床病癥、體征和試驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果以及流行病學(xué)特點(diǎn)了解軍團(tuán)菌病發(fā)病及疫源地現(xiàn)況以便掌握疫情集中積存資料作為當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)分析的根底。在進(jìn)展個(gè)案調(diào)查時(shí)應(yīng)留意：對(duì)調(diào)查表中雖然沒(méi)有列入但有流行病學(xué)意義的內(nèi)容也應(yīng)具體詢問(wèn)和描述盡可能收集一切和闡明流行有關(guān)的材料特別要留意具體收集指征病例和特別病例的資料。爆發(fā)調(diào)查依據(jù)疫點(diǎn)范圍內(nèi)病人發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)和人群分布特點(diǎn)把從現(xiàn)場(chǎng)獲得的資料加以比照綜合分析爆發(fā)的影響因素和初步假設(shè)制定針對(duì)性的調(diào)查方案開展爆發(fā)緣由調(diào)查。疫情處置病例定義和病例搜尋依據(jù)爆發(fā)疫情的實(shí)際狀況確定病例定義在爆發(fā)點(diǎn)四周搜尋病例病例定義早期亦承受較為寬松的病例定義以便覺(jué)察更多可能的病例。監(jiān)測(cè)和宣教加強(qiáng)應(yīng)急監(jiān)測(cè)與報(bào)告對(duì)于發(fā)生軍團(tuán)菌病疫情的地區(qū)依據(jù)軍團(tuán)菌病監(jiān)測(cè)方案進(jìn)展監(jiān)測(cè)和報(bào)告；同時(shí)要全面開展宣傳教育對(duì)可疑者及易感人群選用紅霉素、阿奇霉素等治療。外環(huán)境監(jiān)測(cè)和消毒處理由于目前無(wú)軍團(tuán)桿菌疫苗對(duì)爆發(fā)點(diǎn)安康人群進(jìn)展安康教育外、重點(diǎn)進(jìn)展外環(huán)境監(jiān)測(cè)和消毒處理以掌握疫情的集中。公共場(chǎng)所內(nèi)覺(jué)察軍團(tuán)菌病例或者疑似病例時(shí)應(yīng)對(duì)所使用的空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)展調(diào)查明確空調(diào)系統(tǒng)的類別、供風(fēng)范圍、管道分布特點(diǎn)、供風(fēng)對(duì)象、管道的材質(zhì)和密閉狀態(tài)等根本狀況對(duì)疫情可能涉及的范圍予以確定并實(shí)行停用等緊急掌握措施對(duì)集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)展消毒、監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)。集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)消毒前應(yīng)先進(jìn)展系統(tǒng)或部件的清洗到達(dá)相應(yīng)衛(wèi)生要求后再進(jìn)展消毒處理。應(yīng)在保證消毒效果的前提下選擇對(duì)風(fēng)管及設(shè)備損害小的消毒劑必要時(shí)消毒后應(yīng)準(zhǔn)時(shí)進(jìn)展沖洗與通風(fēng)防止消毒溶液殘留物對(duì)人體與設(shè)備的有害影響。清洗消毒的部位應(yīng)包括空調(diào)機(jī)組的外表、送回風(fēng)管道系統(tǒng)的外表以及過(guò)濾器〔過(guò)濾網(wǎng)〕、表冷器、加濕器、冷凝水盤、風(fēng)機(jī)組、開放式冷卻塔等空調(diào)系統(tǒng)的關(guān)鍵部位。清洗消毒方法應(yīng)按照《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)清洗標(biāo)準(zhǔn)》由獵取資質(zhì)的機(jī)構(gòu)進(jìn)展?？照{(diào)系統(tǒng)經(jīng)過(guò)清洗消毒后應(yīng)依據(jù)《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)展評(píng)價(jià)合格前方可使用。具體采樣監(jiān)測(cè)應(yīng)留意以下幾點(diǎn)：采樣部位：主要為集中空調(diào)的冷卻塔和冷凝水集水盤采集冷卻水、冷凝水及沉積物。采樣容器的預(yù)備：可選擇玻璃瓶或聚乙烯瓶沉積物與軟泥需用廣口瓶容器均需螺口或磨口使用前消毒滅菌。采樣量：每個(gè)采樣點(diǎn)依據(jù)無(wú)菌操作取水樣〔或軟泥、沉積物樣品〕200ml。中和余氯：假設(shè)樣品是經(jīng)過(guò)氯或臭氧消毒過(guò)采樣容器滅菌前參加少許硫代硫酸鈉溶液以中和水樣中的剩余氯或臭氧。樣品運(yùn)輸和貯存：樣品最好在2天內(nèi)送達(dá)試驗(yàn)室不15樣品處理：水樣如有雜質(zhì)可靜置沉淀或1000r/min離心1min去除。水樣與軟泥的分析操作應(yīng)分別參考水質(zhì)與土壤的微生物學(xué)方法。檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)：參照《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》操作。醫(yī)療救治軍團(tuán)菌病依據(jù)臨床特征一般分為兩種類型:一類為非肺炎型病情較輕埋伏期1~2天似一般感冒或流感樣起病有發(fā)熱、肌痛、咽喉苦痛、咳嗽等病癥約1~2周可自愈,又稱龐蒂亞克熱〔Pontiacfever〕。另一類是肺炎型埋伏期2~10病癥為全身不適、疲乏、肌肉酸痛、頭痛、發(fā)熱、咳嗽、胸痛、咳血、呼吸困難等還能侵害消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)重癥病人可消滅肝功能變化及腎功能衰竭并可消滅精神紊亂等臟器損害。早期覺(jué)察病人、早期治療。對(duì)可疑病人應(yīng)準(zhǔn)時(shí)進(jìn)展特異性試驗(yàn)室檢查以明確診斷。肺炎型軍團(tuán)菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)如下：①臨床表現(xiàn)：發(fā)熱、寒戰(zhàn)、咳嗽、胸痛等呼吸道感染病癥；②_線胸片具有炎性陰影；③呼吸道分泌物、痰、血或胸腔積液在活性炭酵母浸液瓊脂培育基或其他特別培育基中有軍團(tuán)菌生長(zhǎng)；④呼吸道分泌物直接熒光法檢查陽(yáng)性；⑤血間接熒光法：241：128試管凝集試驗(yàn)：測(cè)前后241：160或以上；微量凝集試驗(yàn)：測(cè)前后24上增高達(dá)1：64或以上。凡具有以下①、②項(xiàng)同時(shí)具有③、④、⑤項(xiàng)中任何一項(xiàng)者可診斷為肺炎型軍團(tuán)菌病。確診者可選用紅霉素、阿奇霉素等或/和利福平一并使用。復(fù)方諾明、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素對(duì)局部病人有效。應(yīng)盡量避開使用糖皮質(zhì)激素。早期覺(jué)察并發(fā)癥如急性腎功能衰竭、休克等應(yīng)準(zhǔn)時(shí)樂(lè)觀搶救。無(wú)論疑似、臨床診斷或試驗(yàn)室確診病例同時(shí)具備以下3項(xiàng)者方可出院。1.全身病癥、肺炎表現(xiàn)等消逝；2.體溫正常3天；3.外周血常規(guī)檢查恢復(fù)正常。防控技術(shù)效果評(píng)估軍團(tuán)菌病疫情完畢后及區(qū)應(yīng)急指揮部門應(yīng)組織有關(guān)人員對(duì)疫情的處置工作進(jìn)展評(píng)估。評(píng)估內(nèi)容主要包括大事概況、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查處理概況、病人救治狀況、所實(shí)行措施的效果評(píng)價(jià)、應(yīng)急處理過(guò)程中存在的問(wèn)題和取得的閱歷以及改進(jìn)建議等。評(píng)估報(bào)告上報(bào)衛(wèi)生局和政府。附件附件一軍團(tuán)菌病個(gè)案調(diào)查表編號(hào)：□□□□□□□□一般狀況：姓名：1.2性別： ⑴男1.3年齡(歲): □□1.4職業(yè)： □□⑵女□⑴幼托或散居兒童⑵學(xué)生⑶教師 ⑷醫(yī)院工作人⑹餐飲業(yè)⑺商業(yè)效勞⑻工人⑼民工⑽農(nóng)現(xiàn)居住地(詳填)： 省 縣〔區(qū)〕 鄉(xiāng)〔街道〕 村聯(lián)系工作〔學(xué)習(xí)〕單位：發(fā)病與就診狀況發(fā)病狀況發(fā)病時(shí)間： 年 月 日□□□□□□□□首發(fā)病癥〔描述〕：發(fā)病地點(diǎn)： 省 縣(區(qū)) 醫(yī)院〔學(xué)校/旅館/其他〕初診時(shí)間： 年 月 日□□□□□□□□確診時(shí)間： 年 月 日□□□□□□□□入院狀況入院日期： 年 月 日□□□□□□□□所住醫(yī)院名稱：入院診斷：出院狀況出院日期： 年 月 日□□□□□□□□出院診斷：流行病學(xué)史調(diào)查：請(qǐng)具體描述發(fā)病前二周內(nèi)特別活動(dòng)狀況(如到醫(yī)院、去工地、旅游、聚會(huì)、野外活動(dòng)等).發(fā)病前2周內(nèi)是否接觸過(guò)不明緣由發(fā)熱或肺炎患者：⑴是 ⑵否 □3.2如3.2選“是”則與患者關(guān)系是： □⑴家庭成員⑵同事//⑸其他臨床表現(xiàn)：發(fā)熱 ⑴有 ⑵無(wú) □體溫(最高) ℃咳嗽 ⑴有 ⑵無(wú) □咳痰 ⑴有 ⑵無(wú) □上呼吸道卡他病癥 ⑴有 ⑵無(wú) □胸悶 ⑴有 ⑵無(wú) □呼吸困難 ⑴有 ⑵無(wú) □腹瀉 ⑴有 ⑵無(wú) □中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥 ⑴有 ⑵無(wú) □根底疾?。孩盘悄虿?⑵高血壓 ⑶心臟病 腎?、善渌?⑹臨床及試驗(yàn)室檢查：血常規(guī)入院時(shí)：白細(xì)胞計(jì)數(shù): ×109/L 中性粒細(xì)胞： 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)：%胸部Ｘ線檢查入院時(shí)：日期： 年月日 結(jié)果：⑴正常 滲出液 ⑶其他軍團(tuán)菌血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果：⑴陰性⑵陽(yáng)性⑶未檢測(cè)PCR⑵陽(yáng)性⑶未檢測(cè)軍團(tuán)菌病原分別結(jié)果：⑴陰性⑵陽(yáng)性⑶未檢測(cè)轉(zhuǎn)歸與最終診斷狀況〔隨訪或依據(jù)醫(yī)療報(bào)告完成〕：最終診斷：⑴軍團(tuán)菌肺炎 ⑵其他轉(zhuǎn)歸:⑴痊愈⑵死亡 假設(shè)病例死亡,則填寫6.2.1病例死亡時(shí)間 年 月 日□□□□□□□□調(diào)查者簽名：調(diào)查時(shí)間： 年 月 附件二軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法實(shí)施細(xì)則適用范圍本細(xì)則適用于各類樣品中軍團(tuán)菌的檢測(cè)鑒定。標(biāo)本的采集血液標(biāo)本：雙份血清第一份血液標(biāo)本于病人入院時(shí)采集2~3ml血液分別血清作血清學(xué)診斷；其次份血液于病人出院2~3ml。血清于-20℃冰箱保存。支氣管肺泡灌洗液、胸水、痰液或纖支氣管鏡標(biāo)本：取標(biāo)本后馬上送檢如標(biāo)本放置30min以上時(shí)應(yīng)將標(biāo)本放4℃冰箱如放置24~48小時(shí)則應(yīng)放-20℃以下保存。應(yīng)避開反復(fù)凍融。大型醫(yī)院、賓館等冷卻水樣：采集水樣500ml/份取樣后馬上送檢。如標(biāo)本需放置30min以上時(shí)應(yīng)放于4℃保存。24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。檢測(cè)依據(jù)國(guó)家《傳染病診斷標(biāo)準(zhǔn)》.軍團(tuán)病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則.》.WS195-20 衛(wèi)生部.軍團(tuán)病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則20 年〔第一版〕.上1979設(shè)備與材料4.1冰箱：4～-20℃4.2：36±1℃4.34.440x100x離心機(jī)：12023rpm架盤藥物天平：0g-500g,0.5g錐形瓶：100mL、500mL滅菌吸管：1mL(具0.01mL10mL(具0.1mL刻度)90mm滅菌試管：16mm×160mm.一般用的是18_180mm4.11：36±1℃二氧化碳培育箱：5%CO236±1℃紫外燈過(guò)濾器培育基和試劑BCYEαN-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸〔ACES〕 10.00克氫氧化鉀片〔85%KOH試劑級(jí)〕 2.80克活性炭〔NoritA〕 1.50克酵母浸膏〔Difco〕10.00克瓊脂〔Difco〕 17.00克α-酮戊二酸〔單鉀鹽〕 1.00克L-半胱氨酸鹽酸鹽〔溶于10毫升蒸餾水中〕 0.40克焦磷酸鐵〔溶于10毫升蒸餾水中〕 0.25克蒸餾水 1000毫升甘氨酸、萬(wàn)古霉素、多粘菌素B〔GVP〕瓊脂BCYEα甘氨酸 3.00克萬(wàn)古霉素 5.00毫克多粘菌素B 10萬(wàn)單位明膠酶試驗(yàn)培育基此培育基的制備除用明膠〔每100ml中加3g〕代替瓊脂BCYEα酪氨酸BCYEα在BCYEα瓊脂中除去碳粉再于每升培育基中加0.45g酪37℃5血平板無(wú)半胱氨酸BCYEα平板1%配制的四甲基對(duì)苯二胺水溶液3%配制的過(guò)氧化氫液1%馬尿酸鈉水溶液5.103.5%茚三酮2%亞甲蘭水溶液10%中性福馬林液96孔U型〔8×12〕微孔板和微量移液器〔8道及單道〕0.01mol/LpH2.00.3mol/lKOH革蘭氏染色液軍團(tuán)菌成套診斷血清檢驗(yàn)程序〔軍團(tuán)菌檢驗(yàn)程序〕臨床含雜菌的標(biāo)本痰、肺或其它組織〔均用少量蒸餾水調(diào)勻或機(jī)械研磨成均勻的懸液〕和氣管灌洗液等標(biāo)本直接免疫熒光法鏡檢 酸處理或放50℃30min必要時(shí)放－70℃保存劃種GVPC瓊脂平板〔36℃5%CO27—14天〕血液標(biāo)本水樣類標(biāo)本水樣〔0.5L～5L水的離心沉淀物或經(jīng)過(guò)濾后的0.22μm孔徑濾膜〕或水龍頭等處的棉拭子洗液菌種初步鑒定BCYEα接種無(wú)半胱氨酸的BCYEα瓊脂平板〔36℃5%CO23～7天〕生長(zhǎng) 不生長(zhǎng)〔從原始平板做革蘭氏片染色鏡檢〕23出單個(gè)菌落的革蘭氏陰性桿菌陰性桿菌陽(yáng)性桿菌或陰性球菌不是軍團(tuán)菌接種血瓊脂平板可能是軍團(tuán)菌不是軍團(tuán)菌不生長(zhǎng) 生長(zhǎng)可能是橡樹嶺軍團(tuán)菌 菌種做進(jìn)一步鑒定操作步驟樣品處理病人培育標(biāo)本加熱處理：將標(biāo)本放50℃水浴30min可殺滅大局部雜菌而不影響軍團(tuán)菌的存活。環(huán)境標(biāo)本(水樣)加酸處理：采集500ml水樣經(jīng)0.22μm孔徑的濾膜抽濾后將濾膜剪碎放置于5ml原水樣中混勻。取1ml混勻或研勻的標(biāo)1ml0.01mol/LpH2.0混勻。然后于室溫中作用5～15min再于其中加0.03mol/lKOH0.2ml血清學(xué)試驗(yàn)標(biāo)本于發(fā)病時(shí)和兩周后采血測(cè)定軍團(tuán)菌抗體效價(jià)每次采血2毫升〔不加抗凝劑〕并分別血清。單次采血可在發(fā)病一兩周后。培育分別軍團(tuán)菌菌的標(biāo)本材料如胸水可以在離心沉淀后劃種BCYEα瓊脂平板而污染的材料則應(yīng)先劃種GVPC瓊脂平板劃種時(shí)應(yīng)先在原始區(qū)深厚接種然后再分別單個(gè)菌落。將平板放36℃5%CO2培育箱〔或燭缸〕培育。每日觀看結(jié)果。生化鑒定氧化酶試驗(yàn)承受平板法或?yàn)V紙法馬上1%配制的四甲基對(duì)苯二胺水溶液直接滴在BCYEα瓊脂平板生長(zhǎng)出的菌苔和菌落上30秒內(nèi)消滅明顯深紫色時(shí)為陽(yáng)性或直接挑取穎菌落揉擦在清潔的白30觸酶試驗(yàn)預(yù)備一管培育的BCYEα斜面培育物于其中滴加3%過(guò)氧化氫液馬上消滅大量氣泡者為陽(yáng)性。也可用鉑絲、小玻棒等挑取少量穎生長(zhǎng)的菌落或菌苔研均于盛有少量3%過(guò)氧化氫液的清潔試管內(nèi)馬上消滅大量氣泡者為陽(yáng)性。動(dòng)力試驗(yàn)用軍團(tuán)菌養(yǎng)分肉湯的穎培育物做懸滴法。觀看時(shí)留意與布朗氏運(yùn)動(dòng)區(qū)分。測(cè)定菌落熒光：將被試菌接種酪氨酸BYE瓊脂平板待生長(zhǎng)出單個(gè)菌落后在黑暗處以長(zhǎng)波〔365mμm〕紫外線照耀下觀看菌落發(fā)出的熒光。棕色色素產(chǎn)生試驗(yàn)將被試菌劃種酪氨酸BYE瓊脂平板待生長(zhǎng)出單個(gè)菌落后〔36℃7〕觀看菌落和菌苔消滅棕色時(shí)為陽(yáng)性。馬尿酸水解試驗(yàn)將一滿環(huán)〔環(huán)直徑3mm〕BCYEα瓊脂斜面的生長(zhǎng)物接種于馬