黃瓜綠斑駁花葉病毒發(fā)生概況、檢測鑒定及防治

黃瓜綠斑駁花葉病毒發(fā)生概況、檢測鑒定及防治紐內(nèi)姆（北京）種子有限公司齊中舉（病理助理）1.黃瓜綠斑駁花葉病毒病概況黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumbergreenmottlemosaicvirus,CGMMV）,為煙草花葉病毒屬，是西瓜、黃瓜、南瓜等葫蘆科作物上的一種毀滅性病害，具有危害嚴(yán)重，致病性強，防止難度大等特點。1.1危害癥狀：CGMMV侵染許多葫蘆科作物，引起植物葉片斑駁、系統(tǒng)性花葉及果肉惡化等癥狀。在黃瓜上,最初新葉上出現(xiàn)黃色小斑點,隨后逐漸發(fā)展為花葉、斑駁和濃綠泡狀突起等癥狀,葉脈間褪色呈綠帶狀。在西瓜上，初期莖端幼葉呈現(xiàn)淡黃色花葉，隨后出現(xiàn)濃綠凹凸斑，隨葉片老化癥狀減輕；果實表現(xiàn)有濃綠圓斑，中央有壞死點，種子周圍的果肉呈赤紫色水漬狀，成熟時變?yōu)榘岛稚页霈F(xiàn)空洞。在甜瓜上，受害的新葉上出現(xiàn)黃斑，隨葉片老化癥狀減輕；成株側(cè)枝的葉片呈現(xiàn)不定形或星狀黃化葉，生長后期頂部葉片有時產(chǎn)生大型黃色輪斑；幼果受害后有綠色花紋，后期為綠色斑，或在綠色斑中央出現(xiàn)灰白色斑。在黃瓜葉片上引起色斑、水泡及變形，使植株矮化、結(jié)果延時，果實大部分黃化或變白并產(chǎn)生黑綠色水皰狀的壞死斑，產(chǎn)量損失達15%；可延緩黃瓜植株的生長發(fā)育，甚至導(dǎo)致不孕。1.2發(fā)生分布：黃瓜綠斑駁花葉病毒病20世紀(jì)30年代在歐洲國家發(fā)生，60年代因黃、西瓜和瓠瓜而傳入印度和日本，80年代傳入臺灣。2002年中國從日本引進種苗中截獲，2004年廈門從日本進口的南瓜種子上檢測到CGMMV，2005年中國遼寧省蓋州市感染CGMMV在我國遼寧蓋州地區(qū)造成西瓜大面積毀滅，受害面積達333hm2,約13hm2絕收，CGMMV現(xiàn)在中國部分地區(qū)已造成西瓜毀滅性的損失。農(nóng)業(yè)部發(fā)布的第788號公告，鄭重宣布將CGMMV確定為全國農(nóng)業(yè)植物檢疫性有害生物，屬國家三類檢疫性病害。目前，CGMMV在中國主要分布于遼寧、河北、湖北、廣東和山東，發(fā)生率達80%，河南、四川、江西、上海、新疆、陜西及寧夏等省份還未發(fā)現(xiàn)。1.3傳播方式：該病毒主要侵染甜瓜、西瓜、黃瓜及瓠瓜等多種葫蘆科作物，主要通過種子、土壤、機械摩擦、田間農(nóng)事操作、植物間接觸、葉片接觸、嚙齒動物（如兔子、小白鼠等）的糞便、栽培營養(yǎng)液、河水、灌溉水、被污染的包裝容器、用作肥料的牛糞、菟絲子等方式進行傳播，另外，有學(xué)者認(rèn)為莧色藜、馬齒莧等雜草寄主也為病毒的定殖提供了可能。黃瓜葉甲是可能的傳播介體;但桃蚜和棉蚜不傳毒,被侵染葫蘆、瓠子的根際土壤中未發(fā)現(xiàn)介體真菌。根據(jù)目前關(guān)于種子帶毒的研究，西瓜的種子帶毒率有24%~100%不等，可能是由于CGMMV感染西瓜時期不同導(dǎo)致種子感染病毒的程度不同，也可能是CGMMV毒株的致病力不同引起的，或者和種子材料的新鮮程度也有關(guān)系，傳毒率2.25%，甜瓜帶毒率為93.85%，傳毒率2.83%，黃瓜種子收獲后一個月檢測種傳率為8%，保存5個月后種傳率降低到0.1%。土壤帶毒率為0~3.5%。種子傳播是該病毒遠(yuǎn)距離傳播的主要方式。為防止CGMMV通過種子貿(mào)易和遠(yuǎn)距離調(diào)運而擴散，加強種子帶毒檢測，從源頭控制該病害的蔓延，對保護西瓜、甜瓜產(chǎn)業(yè)的安全生產(chǎn)具有重要意義。CGMMV不同株系體外生物學(xué)特性有差異，鈍化溫度為一般90OC~100OC，稀釋限點為106~107,常溫下病毒侵染力可保持?jǐn)?shù)月，在土壤中至少存活10個月，在0OC則可保持?jǐn)?shù)年。2．黃瓜綠斑駁花葉病毒病的檢測鑒定2.1試劑條檢測：現(xiàn)在有Agdia公司生產(chǎn)的試劑條可以對葉片上的病毒進行初步檢測2.2電子顯微鏡檢測：電子顯微鏡可檢測在土壤及營養(yǎng)液中生長的植物中的CGMMV。2.3血清學(xué)方法檢測：DAS-ELISA及快速免疫濾紙顯色法，multi-RIPA檢測，multi-RIPA檢測純化CGMMV的最低量為50ng/ml,瓊脂凝膠沉淀法(Precipitationinagar)和單抗檢測法，modifiedELISA(M-ELISA)檢測黃瓜種子，結(jié)果比標(biāo)準(zhǔn)ELISA更靈敏，其靈敏度相當(dāng)于檢測到800粒健康種子中的1粒病種子。就目前的經(jīng)濟條件及操作條件，國內(nèi)的一般研究單位采用的是DAS-ELISA檢測方法。2.4PCR檢測:cDNA雜交檢測,6堿基隨機引物或oligod(T)16進行RT-PCR檢測，免疫誘捕RT-PCR(ImmunocaptureRT-PCR,IC-RT-PCR)檢測方法，該方法比DAS-ELISA靈敏105倍，比F(ab，)2ELISA靈敏102倍,高密度乳膠微粒凝集試驗(Highdensitylatexparticleagglutinationtest,HDLPAT)、ELISA、RT-PCR及生物測定(使用Chenopodiumamaranticolor)檢測。國內(nèi)的一般研究單位采用的是IC-RT-PCR隨機檢測方法。只有生物測定可用于檢測干熱處理的種子。對未處理的種子,RT-PCR則是一種靈敏的方法，綜合考慮樣品制備、檢測費用及檢測時間等因素,HDLPAT則是一種快速檢測未處理種子的實用方法。3．黃瓜綠斑駁花葉病毒病的防治對CGMMV的防治同其他病害一樣,最根本的要使用無侵染的種苗;在農(nóng)事操作中盡量避免病毒經(jīng)器械等傳播,加強栽培管理,及時拔除初侵染病株,銷毀病株殘體。3.1種子處理：根據(jù)國內(nèi)對帶毒砧木進行藥劑消毒、干熱處理、干熱處理結(jié)合藥劑消毒、溫湯浸種、溫湯浸種結(jié)合藥劑消毒等五種種子處理方法的研究：其中干熱處理結(jié)合藥劑消毒的防效最好,為100%,發(fā)芽率85.2%,明顯優(yōu)于其他處理及對照;其次是干熱處理（40OC、24h后72OC、72h），防效為93.46%,發(fā)芽率85.6%；溫湯浸種結(jié)合藥劑消毒，防效為80.47%，發(fā)芽率87.8%；藥劑消毒（10%磷酸三鈉溶液浸泡20~30min），防效為73.93%,發(fā)芽率90.3%；溫湯浸種（55OC,1