《農(nóng)藥污染場地修復技術指南 微生物法》

浙江省環(huán)境科學學會發(fā)布ICS13.080CCSZ05團體標準XXXXchnicalguidelineforremediationofpesticidecontaminnatedsitesMicrobialMethod(征求意見稿)IT/ZJSESXXX—XXXX前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 24適用性評價 25總體要求 36方案設計 47施工建設 58修復效果評估 79事故應急與響應 7附錄A(規(guī)范性)功能微生物的篩選、馴化、放大培養(yǎng)以及重復性試驗操作步驟 8附錄B(規(guī)范性)施工過程中定期采樣技術要求 10T/ZJSESXXX—XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由浙江省生態(tài)環(huán)境科學設計研究院提出。本文件由浙江省環(huán)境科學學會歸口。本文件起草單位：浙江省生態(tài)環(huán)境科學設計研究院、中節(jié)能大地(杭州)環(huán)境修復有限公司、北京高能時代環(huán)境技術股份有限公司本文件主要起草人：吳超、詹領茜、鐘重、肖愉、張弛、倪鑫鑫、李斐、王昌華、方英。1T/ZJSESXXX—XXXX農(nóng)藥污染場地修復技術指南微生物法1范圍本文件確立了通過微生物法修復農(nóng)藥污染場地過程中方案設計、施工建設要求及修復效果評估等設計和施工活動的技術要點。本文件適用于微生物法修復/治理的農(nóng)藥污染場地，以及各類農(nóng)藥污染場地中目標污染物微生物降解性好/固化率高的土壤修復活動。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB16297大氣污染物綜合排放標準GB12348工業(yè)企業(yè)廠界環(huán)境噪聲排放標準GB12523建筑施工場界環(huán)境噪聲排放標準GB3838地表水環(huán)境質(zhì)量標準GB8978污水綜合排放標準GB1848危險廢物焚燒污染控制標準GB9078工業(yè)爐窯大氣污染物排放標準GB13271鍋爐大氣污染物排放標準GB36600土壤環(huán)境質(zhì)量建設用地土壤污染風險管控標準GB50332給水排水工程管道結(jié)構(gòu)設計規(guī)范GB50268給水排水管道工程施工及驗收規(guī)范GB3836.1爆炸性環(huán)境第1部分:設備通用要求GB3836.15爆炸性環(huán)境第15部分:電氣裝置的設計、選型和安裝GB50058爆炸危險環(huán)境電力裝置設計規(guī)范GB50494城鎮(zhèn)燃氣技術規(guī)范GB50727工業(yè)設備及管道防腐蝕工程施工質(zhì)量驗收規(guī)范GB/T14848GB/T20801GBZ/T197GBZ/T160地下水質(zhì)量標準壓力管道規(guī)范工業(yè)管道建設項目職業(yè)病危害控制效果評價技術導則工作場所有毒物質(zhì)測定GBZ2工作場所有害因素職業(yè)接觸限值HJ25.1建設用地土壤污染狀況調(diào)查技術導則HJ25.2建設用地土壤污染風險管控和修復監(jiān)測技術導則HJ25.3建設用地土壤污染風險評估技術導則HJ25.4建設用地土壤修復技術導則HJ25.5污染地塊風險管控與土壤修復效果評估技術導則HJ25.6污染地塊地下水修復和風險管控技術導則HJ682建設用地土壤污染風險管控和修復術語HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范HG/T20719微生物法修復化工污染土壤技術規(guī)范DB33/T2128污染地塊治理修復工程效果評估技術規(guī)范JGJ/T141通風管道技術規(guī)程JGJ46施工現(xiàn)場臨時用電安全技術規(guī)范2T/ZJSESXXX—XXXX工業(yè)企業(yè)污染調(diào)查評估與修復技術指南(試行)3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。原位微生物修復In-situbioremediation指利用微生物的吸收降解作用在污染的原地點長期有效地清除環(huán)境中污染物的一個自發(fā)或受控的過程。包氣帶污染土壤Pollutedsoilintheaerationzone指地下水水位以上至地表的空間部分。深層飽和帶土壤重污染羽Heavy-pollutedplumeinthedeepsaturationzonesoil指污染物在環(huán)境介質(zhì)中的遷移，包括對流擴散、機械彌散和分子擴散等作用，在這些的共同作用下，污染物的分布往往呈由排放點發(fā)散的帶狀。兼性厭氧菌Facultativeanaerobe指在有氧或無氧環(huán)境中均能生長繁殖的微生物。在有氧(O2)或缺氧條件下，可通過不同的氧化方式獲得能量，兼有有氧呼吸和無氧發(fā)酵兩種功能。持久定殖Permanentcolonization具有農(nóng)藥污染物降解能力的微生物通過活化土壤養(yǎng)分、抑制病原菌、降解有毒污染物等方式，在土壤中繁殖，長期保持有效地微生物活動。微生物功能活性保持3個月以上。4適用性評價微生物法適用于土壤滲透率高、污染面積較大、污染濃度適中的污染地塊。微生物法修復效率主要取決于高效、持久的微生物活性，主要影響因素包括污染地塊中相關因素以及設計工藝中的部分因素。微生物法修復效率受污染地塊的影響，影響因素包括污染物性質(zhì)、pH值、土壤含水率、有機質(zhì)含量、土著微生物群落特征等。微生物法修復效率受設計工藝影響，影響因素主要包括菌劑種類、注藥技術、營養(yǎng)供給頻率等。確定采用微生物技術進行農(nóng)藥污染場地治理與修復前，應先開展技術適用性評價，尤其要關注影響微生物修復作用的主要因素。微生物修復技術適用性評價可參照以下步驟進行：(1)確認地塊污染概況，包括確認地塊條件、污染物類型、污染介質(zhì)的種類，同時應建立地塊概念模型，明確修復目標和修復范圍，以及需要進行微生物處理的污染土壤區(qū)域等信息。在充分分析各項指標后，綜合判斷已有的地塊信息是否滿足啟動修復的條件和要求，若無法滿足，則需重新確認地塊污3T/ZJSESXXX—XXXX染概況。確認污染地塊概況的技術流程和技術方法可參照《污染地塊土壤修復技術導則》(HJ25.4)執(zhí)行。確認的主要內(nèi)容如下：a)污染物種類及其理化特性(物理形態(tài)、溶解性、揮發(fā)性等)b)污染物濃度、分布范圍c)污染物背景濃度d)污染區(qū)域、方量e)土壤巖土性質(zhì)(含水量、密度、機械強度、粒度分布、有機質(zhì)含量等)f)地塊污染歷史g)地質(zhì)和結(jié)構(gòu)(包括巖性單元的幾何形態(tài))h)水文地質(zhì)參數(shù)(包括水質(zhì)、地下水位及其季節(jié)性變化)i)含水層相關參數(shù)j)敏感受體的類型及其與地塊的相對位置k)污染鏈相關信息l)地塊入場條件與可操作性基礎設施布局(建筑物、生活設施、地下構(gòu)筑物等)m)土地利用規(guī)劃(近期或長期規(guī)劃)及制約條件n)生態(tài)保護現(xiàn)狀(2)根據(jù)地塊污染概況、地塊概念模型、土地再利用規(guī)劃和功能屬性等綜合制定修復策略，包括明確是否采用控制污染源、切斷暴露途徑、保護敏感受體等方式進行治理與修復；確認現(xiàn)場是否允許原位修復，是否適合采用微生物修復技術等。修復策略制定的技術流程可參照《工業(yè)企業(yè)污染調(diào)查評估與修復技術指南(試行)》執(zhí)行。(3)根據(jù)修復策略比選并確認修復技術，應考慮污染物處理的可行性、污染地塊修復的可行性、污染分布范圍與深度、修復過程污染物的排放、修復時間要求、運輸條件和限制因素，以及修復成本、效益等各種因素。修復技術比選的技術流程可參照《工業(yè)企業(yè)污染調(diào)查評估與修復技術指南(試行)》執(zhí)行。(4)綜合各項因素和選定的最佳修復技術，編制總體修復方案。微生物修復過程二次污染防治的重點包括：(1)減少對污染土壤或其他污染物質(zhì)的擾動與移動；(2)材料/土壤等堆場進行定點定位采取防塵措施；(3)制訂污染泄漏防范措施；(4)控制固/液/氣態(tài)污染物的無組織排放；(5)收集產(chǎn)生的污染土壤、生活垃圾等固體廢物，處理應符合國家、地方和行業(yè)相關規(guī)定；(6)產(chǎn)生的廢水應集中收集處置，并達到國家、地方和行業(yè)相關排放要求；(7)氣態(tài)污染物應控制在國家、地方和行業(yè)相關要求內(nèi)；(8)避免靠近河道作業(yè)，施工區(qū)應與周邊污染受體隔離；(9)做好廢物的存放、轉(zhuǎn)運和處理、處置工作；(10)盡量減少運輸活動；(11)交通運輸工具和其他設備、設施應及時清洗，避免交叉污染；(12)在施工和運行處置期間，應控制噪聲達到國家、地方和行業(yè)相關規(guī)定；(13)注意保護文物資源和生態(tài)環(huán)境。5總體要求一般規(guī)定5.1.1微生物法修復工程需遵循綠色修復的理念，避免能源和資源浪費。5.1.2微生物法修復工程應符合環(huán)境影響評價文件及審批意見的要求，其防治污染設施應與主體工程同時設計、同時施工、同時運行。5.1.3微生物法處理后的土壤和地下水中目標污染物含量需滿足修復目標值的要求。5.1.4所篩選微生物應滿足現(xiàn)行行業(yè)標準《環(huán)保用微生物菌劑環(huán)境安全評價導則》HJ/T415相關4T/ZJSESXXX—XXXX規(guī)定。5.1.5微生物放大培養(yǎng)后濃度應達到105個/mL以上方可使用。5.1.6修復工程所用材料應安全環(huán)保，不與微生物菌液發(fā)生反應。5.1.7應對微生物法修復工程施工和運行過程中所產(chǎn)生的廢氣、廢水、固體廢物及其他污染物進行治理，并達到GB9078、GB13271、GB14554、GB16297、GB37822、GB8978、GB12348等國家、地方和相關行業(yè)排放標準要求?，F(xiàn)場工作安排5.2.1施工前應做好前期準備工作，如現(xiàn)場清理、道路修建，供熱系統(tǒng)、排水系統(tǒng)建設等，人員健康與安全防護設備和措施也應提前到位。5.2.2地塊布局安排應考慮以下需求：(1)來訪車輛和人員接待區(qū)；(2)公共服務區(qū)；(3)材料和設備安全存放區(qū)；(4)危險物質(zhì)或危險廢物貯存隔離區(qū)(可參照GB18596執(zhí)行)；(5)無危害或無污染土壤組分(如大塊礫石)存放區(qū)；(6)設備操作(含前處理)區(qū)；(7)現(xiàn)場和出場交通路線。5.2.3微生物修復項目要根據(jù)修復方法以及修復前、修復中、修復后的工作內(nèi)容與特點，在通盤考慮地塊各項活動的基礎上，分階段統(tǒng)籌安排工作進度。進度安排尤其應重點關注以下工作內(nèi)容的時間節(jié)點與時間要求：(1)人員進場時間；(2)地塊清理和準備工作用時；(3)備到場和試運行用時；(4)安裝或建設公共服務設施用時；(5)實施修復用時；(6)有關部門對施工時間段、運輸時間段進行限制的用時；(7)其他環(huán)境和氣候因素(如低溫、雨天等)對工程進度的影響時間。6方案設計一般規(guī)定6.1.1微生物法修復方案設計的重點是技術可行性試驗研究，即設計并通過試驗確定合適的微生物菌劑與劑量、注藥方式等。6.1.2設計修復方案時，應明確修復目標、職責分工、工作流程、前期準備，以及地塊修復工作的實施、監(jiān)管、效果評估和后期的監(jiān)測與維護等工作內(nèi)容。技術可行性試驗研究6.2.1可行性試驗研究可分為實驗室小試和現(xiàn)場中試等方式。小試完成后，選擇最佳的目標微生物進行現(xiàn)場中試。6.2.2實驗室小試應采集污染地塊的土壤和地下水，針對初步選定的微生物修復技術，進行室內(nèi)試驗，以明確適宜的菌劑、溫度、pH、菌液添加量等參數(shù)。6.2.3功能微生物的篩選、馴化、放大培養(yǎng)以及重復性試驗可參考附錄A執(zhí)行。建議設計試驗重6.2.4現(xiàn)場中試的目的主要是明確微生物注藥系統(tǒng)運行參數(shù)、定量補給營養(yǎng)元素的工藝流程等；是否有其他地塊因素影響(土著微生物的活性、介質(zhì)的不均一性等)的干擾；了解不同空間區(qū)域內(nèi)修復效果的變化情況，如影響半徑隨距離變化修復效果的變化；統(tǒng)計能耗及各項費用成本是否滿足預算要求；全面評估技術可行性、經(jīng)濟性和安全性評價。方案確定5T/ZJSESXXX—XXXX6.3.1微生物法配備的微生物注藥系統(tǒng)、定量補給營養(yǎng)元素的工藝流程等核心工藝設備應根據(jù)現(xiàn)場條件、技術和經(jīng)濟方面選擇，同時考慮質(zhì)控過程。6.3.2基于可行性試驗研究與現(xiàn)場試驗結(jié)果，編制完成微生物修復實施方案，可行性試驗研究與現(xiàn)場試驗結(jié)果須詳細列入修復方案中，應根據(jù)現(xiàn)場試驗結(jié)果明確施工過程的設施和設備要求。6.3.3方案應具有可操作性并最終能達到修復目標的要求。同時，可行性試驗研究階段獲得的有關二次污染排放和適用的檢驗檢測方法等結(jié)果也應納入修復效果評估、健康和安全等方案內(nèi)容之中。7施工建設一般規(guī)定7.1.1施工主要包括微生物注藥系統(tǒng)、定量補給營養(yǎng)元素系統(tǒng)、功能菌群快速檢測系統(tǒng)和土壤生物毒性檢測系統(tǒng)等的構(gòu)筑。7.1.2污染土壤的原位微生物修復主要可以采用表面噴淋法和深層滲管法。表面噴淋法7.2.1根據(jù)條件優(yōu)化實驗確定擬噴淋區(qū)域菌液用量，結(jié)合噴淋面積、作業(yè)周期和噴頭噴淋半徑等，確定需要布設的噴頭和管道直徑、間距，計算水泵、電纜、噴頭、管道及接頭規(guī)格和數(shù)量；7.2.2施工之前，施工人員應按照設計方案熟悉菌液噴淋布局，對所有水泵、電纜、噴頭、管道和接頭的規(guī)格及材質(zhì)進行核對，嚴格按照設計方案進行施工；7.2.3管線布設應遠離易燃、易爆和強烈腐蝕性材料，不能與其它的管道或電纜同溝鋪設；7.2.4塑料材質(zhì)軟管通常采用卡箍進行連接，塑料管道與金屬管道連接應采用法蘭連接或轉(zhuǎn)換接頭連接；7.2.5菌液噴頭須固定于支撐樁柱上，噴頭管垂直于地面，且樁柱高度不得超過噴嘴高度；7.2.6安裝完畢后，檢查連接是否牢固，無明顯缺陷再按規(guī)定要求進行噴淋測試，檢查是否有漏液、噴淋盲區(qū)等，若不合格應及時處理；7.2.7根據(jù)作業(yè)周期，做好相應的噴淋施工組織以及作業(yè)區(qū)域每天噴淋量記錄；7.2.8若微生物在修復過程中需要厭氧狀態(tài)的，可在微生物噴淋后覆蓋密封材料或物料。深層滲管法7.3.1根據(jù)條件優(yōu)化實驗確定擬修復區(qū)域所需菌液用量，結(jié)合土壤滲透系數(shù)、滲透半徑、修復時間需求，確定需要布設的滲管直徑和管道間距，計算水泵、電纜、滲管、管道及接頭規(guī)格和數(shù)量；7.3.2施工之前，安裝人員應熟悉菌液滲管布設，對所有管材、管件的規(guī)格和材質(zhì)進行核對，嚴格按照設計方案進行施工；7.3.3在待修復土壤范圍內(nèi)打滲管安裝孔，孔直徑應保證管道順利豎直安裝；7.3.4按照確定的滲孔數(shù)量、布局和直徑要求在滲管上打孔，滲管應有防止?jié)B孔堵塞的工程措施；7.3.5滲管一端封閉，封閉端向下植入待修復土壤滲管安裝孔內(nèi)，將滲管安裝孔和滲管之間的縫隙填實，滲管口應高出地面0.1-0.2m，滲管口安裝備用蓋(保護帽)；7.3.6應按照設計將滲管、菌液輸送泵和菌液培養(yǎng)容器通過管道連接；7.3.7安裝完畢后，應檢查管道連接，進行開泵測試，若有漏液應及時處理；7.3.8應根據(jù)修復區(qū)域所需菌液用量及滲透速度計算每個區(qū)域總的滲透時間，做好相應的施工組織?？椯|(zhì)量控制7.4.1微生物修復施工過程需進行質(zhì)量管理和控制，方案設計應包含質(zhì)量控制內(nèi)容，并重點考慮以下影響質(zhì)量控制的因素：(1)從業(yè)人員的能力和經(jīng)驗水平；(2)分項任務承包方(如分析實驗室)的能力、資質(zhì)、和經(jīng)驗；(3)修復設備的性能、品質(zhì)等；(4)采樣及分析質(zhì)控樣品，如空白樣、平行樣等；(5)樣品的標記、儲存及聯(lián)運制度；6T/ZJSESXXX—XXXX(6)過程監(jiān)測詳細記錄核對；(7)數(shù)據(jù)記錄與保存；(8)數(shù)據(jù)審核與確認；(9)儀器操作條件發(fā)生波動或分析結(jié)果超出可接受水平時的應對方案；(10)匯報制度。7.4.2施工過程中對污染地塊應定期進行采樣分析，做好過程監(jiān)測。主要采樣方式有監(jiān)測井采樣法、人工鉆孔采樣法和機械鉆孔采樣法等，詳細采樣要求可參考附錄B執(zhí)行。7.4.3樣品采集后應低溫運輸和保存至檢測。樣品檢測應按GB36600、GB15618和GB/T14848標準中污染物分析方法進行檢測，檢測指標根據(jù)修復或風險管控目標確定。環(huán)境監(jiān)測7.5.1建立基于功能菌群快速檢測、修復過程模擬以及土壤微生物毒性檢測，整合修復前場地調(diào)查、修復過程監(jiān)測、修復后效果評價，建立農(nóng)藥污染場地修復全流程監(jiān)測體系。7.5.2環(huán)境監(jiān)測既包括環(huán)境污染指標(如修復過程中固/液/氣態(tài)污染物的無組織排放)的監(jiān)測，也包括對修復后地塊環(huán)境的監(jiān)測。明確監(jiān)測方案編制、工作實施、結(jié)果分析的要求。如若終止或變更要及時記錄。7.5.3環(huán)境監(jiān)測方案應與微生物修復方案同時制定，且監(jiān)測工作應貫穿修復活動的始終。主要監(jiān)測內(nèi)容包括：(1)修復開始前的本底環(huán)境狀況監(jiān)測；(2)修復過程中針對保護各類受體的監(jiān)測；(3)為實施減排措施而進行的基礎監(jiān)測；(4)為判斷是否可以終止監(jiān)測而進行的監(jiān)測。7.5.4修復過程環(huán)境監(jiān)測可參照建設項目施工期環(huán)境監(jiān)測相關技術文件和標準執(zhí)行，如GB12523，具體監(jiān)測內(nèi)容視地塊情況而定。7.5.5環(huán)境監(jiān)測結(jié)果應與相關標準或預先確定的監(jiān)測目標進行比對分析，明確達標情況。監(jiān)測單位應定期向環(huán)境管理部門匯報監(jiān)測結(jié)果，報告內(nèi)容包括：(1)監(jiān)測目標；(2)監(jiān)測人員與設備；(3)監(jiān)測結(jié)果(包括日期、時間，以及氣候、地面狀況等其他觀測結(jié)果)；(4)監(jiān)測結(jié)果展示(可通過時間序列圖、等值線圖等展示)；(5)結(jié)果分析(包括比對評估標準進行核對)；7.5.6監(jiān)測過程中若存在終止監(jiān)測、變更監(jiān)測(如變更監(jiān)測頻次)或采取其他行動等情況，應進行文字說明并解釋原因。健康與安全防護7.6.1明確機械傷害事故風險、觸電事故風險、火災事故風險、化學藥劑及液化石油氣/液化天然氣/管道天然氣泄漏事故、人員中毒事故等防范措施。7.6.2勞動安全應嚴格遵守下列規(guī)定：(1)農(nóng)藥污染場地微生物修復治理工程在設計、施工過程中應始終貫徹“安全第一、預防為主”的原則，遵守安全技術規(guī)程和相關設備安全性要求的規(guī)定，應符合現(xiàn)行國家標準《生產(chǎn)過程安全衛(wèi)生要求總則》GB/T12801的要求；(2)應對現(xiàn)場工作人員進行培訓，并提供工作人員所需的防護用品；(3)應建立并嚴格執(zhí)行經(jīng)常性和定期性的安全檢查制度，制定安全事故應急預案；(4)施工場地應做好圍護，設置安全警示標志或標語，防止無關人員進入；(5)微生物菌劑和化學藥劑的使用應符合國家現(xiàn)行標準《化學品安全技術說明書內(nèi)容和項目順序》GB/T16483和《環(huán)保用微生物菌劑環(huán)境安全評價導則》HJ/T415的要求；(6)微生物培養(yǎng)的菌液池或菌液桶應設置安全警示標志，做好防止人或動物掉入的措施。7.6.3職業(yè)衛(wèi)生應嚴格遵守下列規(guī)定：(1)農(nóng)藥污染場地微生物修復工程過程中產(chǎn)生的廢氣、廢水、廢渣、噪聲及其他污染物排放應嚴格執(zhí)行國家環(huán)境保護法規(guī)、標準和批復的環(huán)境影響評價文件的有關規(guī)定。7T/ZJSESXXX—XXXX(2)施工現(xiàn)場應有保障工作人員衛(wèi)生安全的設施。(3)操作(控制)室和工作崗位應采取采暖、通風、防塵和隔聲等措施，防止職業(yè)病發(fā)生，保護勞動者健康。(4)職業(yè)衛(wèi)生體系應符合現(xiàn)行行業(yè)標準《中華人民共和國職業(yè)衛(wèi)生標準用人單位職業(yè)病防治指南》GBZ/T225的要求。8修復效果評估制定計劃8.1.1在制定微生物法修復方案的過程中，應同時制定修復效果評估計劃，并在修復開始前通過資料收集和數(shù)據(jù)分析等方式預測與評估方案的實施效果，驗證修復是否達標。8.1.2為確保修復不存在拖尾效應，在修復結(jié)束后還應進行監(jiān)測與評估，以保證修復的地塊達到相應的建設用地要求。效果評估8.2.1修復完成后需進行修復效果評估，確認地塊是否滿足后期規(guī)劃用地要求。8.2.2修復效果評估以能夠有效去除土壤及地下水中污染物，從而實現(xiàn)對地塊保護為主要目標，主要評價評價指標一般包括土壤、地下水中污染物濃度、優(yōu)勢功能降解菌群穩(wěn)定性等。特定條件下，還應評價土壤的地質(zhì)情況(如滲透系數(shù)、含水量與修復前的變化情況)。8.2.3污染地塊修復效果評估方法、評估標準和評估流程和可參照HJ25.3、HJ25.5、DB33/T2128和《工業(yè)企業(yè)場地環(huán)境評估與修復工作指南》(試行)。9事故應急與響應項目工程須建立完善的事故應急響應系統(tǒng)，具體包括應急響應系統(tǒng)的建設，應急預案的編制，及污染事故時的應急措施的實施。應急響應系統(tǒng)的建設應包括編制事故應急預案，配置必要的檢測儀器和運輸車輛，配備必要的個人防護和急救用品，并進行應急訓練、演習等。應制訂完善的運行事故的應急預案，主要內(nèi)容應包括：可能發(fā)生事故的原因、類型預測、可能對設備、人員和環(huán)境的危害程度分析、應急對策和應急組織等。8T/ZJSESXXX—XXXX附錄A(規(guī)范性)功能微生物的篩選、馴化、放大培養(yǎng)以及重復性試驗操作步驟A.1功能微生物篩選A1.1.1背景信息分析。對場地調(diào)查報告進行分析，確定擬治理土壤目標污染物種類、含量及場地內(nèi)分布信息。A1.1.2采樣。在選好適當?shù)攸c后，對代表性土壤進行采樣，盛入清潔的牛皮紙或塑料袋中，扎好，標記，記錄采樣時間、地點、環(huán)境條件等，以備查考。A1.1.3樣品運輸與儲存。樣品在4°C條件下進行運輸和儲存，保存時間一般不超過7天。A1.1.4菌懸液的制備。取10g土壤樣品于250mL的錐形瓶中，加入90mL去離子水，于恒溫振蕩器(溫度30°C、轉(zhuǎn)速180r·min-1)中振蕩24h后，制成細菌懸液，靜置，將上清液作為分離篩選樣品。A1.1.5增殖培養(yǎng)(富集培養(yǎng))。取10mL的上層清液，加入90mL的無機鹽培養(yǎng)基(121°C滅菌20min)及不同濃度梯度的目標農(nóng)藥污染物，于30°C、130r·min-1搖床中培養(yǎng)。在同樣條件下，定期轉(zhuǎn)接。A1.1.6培養(yǎng)分離。用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或平板劃線分離法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。A1.1.7篩選。在無機鹽固體培養(yǎng)基上稀釋涂布，于30°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，依據(jù)菌體群落的差異性，挑取平板上長出的單菌落接種至無機鹽培養(yǎng)基中，考察有機物降解效果，選擇具有有機物降解能力的菌株進一步分離純化，最終獲得高效功能菌株。A1.1.8效果檢測。7天(允許偏差為3天)后取樣進行目標污染物微生物作用效果檢測，若具有修復效果，選出修復效果最好的實驗組作為篩選的菌液，完成微生物的第一輪篩選；若無修復效果，則經(jīng)7天(允許偏差為3天)后再次取樣進行檢測，一般情況30天后仍無修復效果，需要重新采集土壤樣品。A1.1.9安全性評價。應分析和評價微生物菌劑及其使用過程中各類代謝產(chǎn)物對人畜健康及生態(tài)環(huán)境可能產(chǎn)生的有害影響和潛在危害，包括致病性和毒性影響等，對菌種進行安全性評價，篩選使用的微生物菌種應安全、有效。A1.1.10菌種保存。將接種菌株的斜面放入4°C冰箱中保存，保存時間通常不超1個月。至此，已經(jīng)完成了微生物的初篩。有關微生物的更多信息可以用鑒別培養(yǎng)基對其進行復篩，或者運用其他手段對其進行鑒別。A1.1.11復篩。根據(jù)第一輪篩選結(jié)果確定是否進行進一步的篩選，若需要進行進一步篩選和馴化，以第一輪篩選出的菌液為初始菌種，添加同樣的培養(yǎng)基，同樣濃度梯度或更高濃度梯度的污染物，其它參照前一輪方法進行。A.2功能微生物馴化A2.2.1取10mL的上層清液，加入90mL的無機鹽培養(yǎng)基(121°C滅菌20min)中，于30°C、180r·min-1搖床中培養(yǎng)。其中待降解有機物濃度設置一系列濃度梯度，由低到高進行菌株的馴化。在同樣條件下，定期轉(zhuǎn)接。A2.2.2經(jīng)過多個周期的馴化后，在無菌條件下，用接種環(huán)蘸取馴化培養(yǎng)液，在固體分離培養(yǎng)基的平板上劃線分離并進一步純化，再將純化的菌株接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，4°C保存于冰箱中。A.3功能微生物放大培養(yǎng)A3.3.1微生物放大培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基原料，應具有出廠合格證明或具有相關資質(zhì)檢測單位出具的檢驗報告。A3.3.2培養(yǎng)基原料在保管與運輸過程中應保持干燥，并做好防水、防潮、防火、防鼠、防蟲等措施，各種原材料分別堆存，放置整齊。A3.3.3微生物培養(yǎng)用水應達到現(xiàn)行國家標準《地下水質(zhì)量標準》GB/T14848III類及以上，具體情況根據(jù)微生物的培養(yǎng)需求而定。A3.3.4培養(yǎng)容器不應與微生物及培養(yǎng)液發(fā)生反應，有機降解微生物建議采用玻璃鋼、不銹鋼等材9T/ZJSESXXX—XXXX質(zhì)。質(zhì)A3.3.5準備培養(yǎng)前，應對微生物的培養(yǎng)容器進行密閉性檢查，并用微生物培養(yǎng)用水清洗干凈。A3.3.6根據(jù)已有微生物菌液量計算放大培養(yǎng)量，每次放大比例宜為已有菌液量的10-20倍。A3.3.7培養(yǎng)容器內(nèi)應依據(jù)計算結(jié)果注水，依次投入培養(yǎng)基原料并攪拌均勻，待其充分溶解后投入需擴大培養(yǎng)的已有目標菌種菌液。A3.3.8微生物放大培養(yǎng)宜在適宜溫度下進行(一般15°C-30°C)，具體培養(yǎng)溫度根據(jù)所用條件優(yōu)化實驗及當?shù)丨h(huán)境條件而定。A3.3.9微生物放大培養(yǎng)至濃度＞105個/mL以上，放大培養(yǎng)的微生物作用效果應達到可行性試驗基本標準，不得檢出