實驗植物的組織培養(yǎng)2

實驗植物的組織培養(yǎng)演示文稿第一頁，共二十九頁。實驗植物的組織培養(yǎng)第二頁，共二十九頁。

我國用花藥培養(yǎng)法先后培育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的經(jīng)濟作物、糧食和蔬菜等新品種，廣泛應用于果樹和花卉的快速繁殖。借助于組織培養(yǎng)生產(chǎn)人工種子，解決某些作物品種繁殖力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。第三頁，共二十九頁。

生產(chǎn)藥物、食品添加劑、香料、色素和殺蟲劑等。例如：紫杉醇，生物堿、紫草素等。轉(zhuǎn)基因植物的培育植物去病毒第四頁，共二十九頁。實驗：菊花的組織培養(yǎng)第五頁，共二十九頁。第六頁，共二十九頁。第七頁，共二十九頁。（用于配置發(fā)芽和生根培養(yǎng)基）第八頁，共二十九頁。第九頁，共二十九頁。第十頁，共二十九頁。第十一頁，共二十九頁。植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，含有植物生長發(fā)育所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)同樣為細菌等微小的生物提供了適合的營養(yǎng)。在這種培養(yǎng)基上，細菌等微小的生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，它們比植物細胞生長、繁殖得更快，而且它們會產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)的植物細胞很快中毒死亡。因此，植物組織培養(yǎng)要想取得成功，必須有效地防止細菌等的污染，保證培養(yǎng)材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)用具完全無菌。為了達到這一要求，就要在植物組織培養(yǎng)過程中進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。第十二頁，共二十九頁。實驗材料用具培養(yǎng)瓶、鑷子、超凈臺、滅菌鍋、封口膜和橡皮圈、有棉球的廣口瓶、酒精燈、三角漏斗、培養(yǎng)皿MS培養(yǎng)基萘乙酸、芐基腺嘌呤發(fā)芽培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基第十三頁，共二十九頁。制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒

接種

生芽定植五、實驗過程

移栽鍛煉

生根注意：對培養(yǎng)材料進行表面滅菌時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區(qū)別對待。第十四頁，共二十九頁。（一）制備MS固體培養(yǎng)基1、配制母液

按照MS培養(yǎng)基成分表,分別配制培養(yǎng)基的母液。

(1)大量元素母液(10倍液)

分別稱取10倍用量的各種大量無機鹽，依次溶解于大約800ml熱的（60-80℃）蒸餾水中。（一種成分完全溶解后再加入下一種，最后加水，定容至1000ml后裝入試劑瓶中，冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆茫?2)微量元素母液(100倍液)(3)鐵鹽母液（100倍液）(4)有機成分母液(100倍數(shù))(5)生長素母液(6)細胞分裂素母液注意:配制培養(yǎng)基時，一定要注意調(diào)節(jié)pH。第十五頁，共二十九頁。MS培養(yǎng)基配制方法返回第十六頁，共二十九頁。你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？問題思考微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。

微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。第十七頁，共二十九頁。

（1）把裝好的培養(yǎng)基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中，蓋好鍋蓋。

（2）設(shè)置滅菌溫度參數(shù)為121℃，20min，開始滅菌。

2、滅菌無菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵．

第十八頁，共二十九頁。（二）外植體（離體組織）消毒

注意：對培養(yǎng)材料進行表面滅菌時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區(qū)別對待。

1、70﹪酒精中浸泡10min，無菌水沖洗2、5%次氯酸鈉溶液中浸泡，無菌水沖洗3、用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡5min，無菌水沖洗4、超凈臺中用無菌水多次沖洗第十九頁，共二十九頁。（三）切段后接種

1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。2、放入培養(yǎng)瓶和滅菌后的接種用具(鑷子、解剖刀、接種針)，把鑷子、解剖刀、接種針插入內(nèi)盛70%酒精的廣口瓶中。第二十頁，共二十九頁。

3、在酒精燈火焰旁，打開三角瓶，把花莖用無菌解剖刀切成幾段，每段至少有一張葉片

4、切段插入培養(yǎng)基，誘導愈傷組織，蓋上封口膜。

5、愈傷組織插入生芽培養(yǎng)基，蓋上封口膜。6、用記號筆在瓶壁上寫明培養(yǎng)材料、培養(yǎng)基代號、接種日期。注意事項

全部接種操作都是在無菌條件下進行的，所以要特別認真仔細，以防雜菌污染。第二十一頁，共二十九頁。（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應定期消毒，溫度控制在１８～２5℃，并且每日照光１4.5小時。觀察記錄生長情況，并照相存檔。2-3周后將生長健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)第二十二頁，共二十九頁。（五）移栽（六）栽培生根后，將苗移至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上濕度，2-3天后打開玻璃罩低濕度鍛煉轉(zhuǎn)移至土中培養(yǎng)（定植）第二十三頁，共二十九頁。此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個植物體的光能自養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細胞到一個個體的演變過程。1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機物培養(yǎng)基？2、培養(yǎng)過程中為什么需要進行光照?思考？第二十四頁，共二十九頁。1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。3、在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？第二十五頁，共二十九頁。結(jié)果分析與評價（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（三）是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格第二十六頁，共二十九頁。六、結(jié)果分析與評價

（一）對接種操作中污染情況的分析

接種3～4d后，在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請學生適時統(tǒng)計污染率，分析接種操作是否符合無菌要求。第二十七頁，共二十九頁。（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化觀察實驗結(jié)果，看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織，記錄多長時間長出愈傷組織。統(tǒng)計更換培養(yǎng)基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。（三）是否進行了統(tǒng)計、對照與記錄做好統(tǒng)計和對照，填好結(jié)果記錄表，培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。從實驗的第一步開始就要求做好實驗記錄，實驗小組配制不同培養(yǎng)基，如誘導愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基，然后做不同配方的比較。第二十八頁，共二十九頁。（四）生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培