TNAIA 032-2021 枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜 質(zhì)譜法

ICS01.040.65CCSB04

TB團 體 標 準T/NAIA032-2021枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法DeterminationofspinetoramanditsmetabolitesresiduesinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry2021-03-16發(fā)布 2021-04-01實施寧夏化學分析測試協(xié)會 發(fā)布前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學分析測試協(xié)會提出并歸口。環(huán)境研究所、寧夏化學分析測試協(xié)會。開建榮、楊春霞、王彩艷、張艷、王曉靜、李冬、姜瑞、張小飛。本文件為首次發(fā)布。枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本文件適用于枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定。規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。乙基多殺菌素及其代謝物spinosynanditsmetabolites乙基多殺菌素是一種新型多殺菌素類殺蟲劑，有兩種本體分別為XDE-175-J和XDE-175-L，有兩種代謝產(chǎn)物，分別為N-demethyl-XDE-175-J和N-formyl-XDE-175-J。原理試樣用乙腈提取，用石墨化炭黑N-丙基乙二胺固相萃取用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測和確證，外標法定量。試劑與材料除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH4O）：色譜純。氯化鈉（NaCl）：分析純。N-丙基-乙二胺吸附劑（PSA）：40μm～63μm。石墨化炭黑（GCB）：120-400目。 農(nóng)藥標準品：N-formyl-XDE-175-J（TSN105647）、N-demethyl-XDE-175-J（批號TSN030175-0002）、XDE-175-J（CAS187166-40-198.1%）、XDE-175-L（批號ZZS-20-065-A8，純度95.0%）。標準溶液配制乙基多殺菌素及其代謝物標準儲備溶液：分別準確稱取適量的乙基多殺菌素及其代謝（0.011000μg/mL-18℃下保存。乙基多殺菌素及其代謝物混合標準中間溶液：根據(jù)需要分別取適量乙基多殺菌素及其10μg/mL標準中間溶液，-18℃下保存。儀器與設(shè)備高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2 0.01g0.00001g。組織搗碎機。高速萬能粉碎機：10000r/min。振蕩器。離心機：4000r/min。渦旋混合器。離心管：50mL，塑料。濾膜：0.22μm，有機相。分析步驟試樣的制備鮮、干枸杞樣品于-18（可加少量的液氮（30g30s），分別置于樣品瓶中，-18℃冷凍備用。樣品提取與凈化鮮果10.00g（0.01g）50mL20mL乙腈，在水浴恒405.0g1r/min52mL15mL（50mgPSA10渦旋0.22μm濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。干果5.00g（0.0150mL10mL30min，加入20mL乙腈，在水浴恒溫振蕩器上震蕩40min5.0g氯化鈉，蓋上蓋子，振搖約1min，放入離心機，4000r/min5min2mL15mL離心管中（提前稱好50mgPSA和10mgGCB）渦旋凈化后過0.22μm濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。測定液相色譜參考條件色譜柱：InertsilC8-3柱，150mm×2.1mm（i.d），5.0μm，或性能相當者。柱溫：35℃。流速：0.4mL/min。d）流動相：乙腈+水（90+10）e）進樣量：1.0μL。質(zhì)譜參考條件見附錄A。色譜測定與確證液和待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。在上述儀器條件下，N-formyl-XDE-175-J、N-demethyl-XDE-175-J、XDE-175-J、XDE-175-L的保留時間分別1.742.843.393.69B1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應(yīng)的被測物。表1定性確證相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%空白試驗除不加試樣外，均按上述操作步驟進行。結(jié)果計算和表達用色譜數(shù)據(jù)處理或按式（1）計算試樣中各農(nóng)藥的含量，計算結(jié)果需將空白值扣除。式中：

XACSV （1）ASmX——試樣中農(nóng)藥的含量，單位為微克每千克（mg/kg）；A——試樣中農(nóng)藥的峰面積；V——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；CS——標準工作液中農(nóng)藥的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AS——標準工作液中農(nóng)藥的峰面積；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（率），C的要求。在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（率），D的要求。定量限和回收率定量限本方法的定量限XDE-175-J為0.01mg/kg，N-demethyl-XDE-175-J為0.01mg/kg，XDE-175-L為0.01mg/kg，N-formyl-XDE-175-J為0.02mg/kg?；厥章时痉椒ǖ奶砑訚舛群突厥章史秶姼戒汦。附錄A（資料性）質(zhì)譜分析參考條件a）電離方式：ESI+；b）檢測方式：MRM；c）電噴霧電壓：3.5kV；毛細管傳輸溫度：300℃；碰撞壓力：1.5f）鞘氣：30arb；g）輔氣：10arb。表A.1乙基多殺菌素及其代謝物的多反應(yīng)離子監(jiān)測分析參數(shù)名稱保留時間/min定性離子對/m/z定量離子對/m/z滯留時間/s碰撞能量/eVXDE-175-J3.39748.4/142.0748.4/203.0748.1/142.00.10.13240N-demethyl-XDE-175-J2.64734.5/128.1734.5/128.1734.5/128.10.10.12222formyl-XDE-175-J1.74762.5/156.1762.5/156.1762.5/156.10.10.11212XDE-175-L3.69760.4/142.0760.4/203.1760.4/142.00.10.13434附錄B（資料性）乙基多殺菌素及其代謝物標準溶液譜圖RT:0.00-6.01100

2.55

3.313.323.343.28

NL:1.42E6TICMSBQ05-2802.5260 2.5140 2.49

2.572.592.60

3.263.253.23

3.363.383.39

3.5920010080604020

0.04

0.56

0.96

1.391.691.731.792.03

2.472.43

2.55

2.64 3.212.69

3.653.733.814.004.304.504.664.83

5.20

5.525.615.93

NL:1.10E6TICF:+cESISRMms2734.500[128.099-128.101]MSBQ05-2010080604020

0.07

0.400.600.721.051.161.451.621.842.032.14

2.812.993.183.293.473.763.904.124.224.454.625.005.123.32

5.475.61

NL:1.42E6TICF:+cESISRMms2748.400[141.999-142.001,202.999-203.001]MSBQ05-2010080604020

0.04

0.56

0.961.16

1.39

1.69

2.03

2.332.452.65

2.90

3.59

3.683.894.064.224.504.664.834.97

5.29

5.525.615.93

NL:4.38E5TICF:+cESISRMms2760.400[141.999-142.001,203.099-203.101]MSBQ05-20100806040200

0.09

0.44

0.770.95

1.39

1.841.73

2.182.39

2.62

2.903.093.28

3.964.104.304.47

4.804.945.095.24

5.63

5.86

NL:2.49E40.08 0.410.690.890.08 0.410.690.891.241.45 1.912.122.322.54 2.863.033.363.553.643.814.084.334.584.704.94 5.355.445.665.79[156.099-156.101]MSBQ05-20.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0Time(min)圖B.1乙基多殺菌素及其代謝物標準溶液（濃度為0.1μg/mL）LC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖附錄C（規(guī)范性）實驗室內(nèi)重復性要求表C.1實驗室內(nèi)重復性要求被測組分含量mg/kg精密度%≤0.00136>0.001≤0.0132>0.01≤0.122>0.1≤118>114附錄D（規(guī)范性）實驗室間再現(xiàn)性要求表D.1實驗室間再現(xiàn)性要求被測組分含量mg/kg精密度%≤0.00154>0.001≤0.0146>0.01≤0.134>0.1≤125>119附錄E（資料性）乙基多殺菌素及其代謝物回收率范圍表E.1乙基多殺菌素及其代謝物在枸杞鮮、干果中的添加濃度及回收率范圍（%）名稱（mg/kg）枸杞鮮果回收率范圍（%）枸杞干果回收率范圍（%）XDE-175-J0.0182.0～89.8106.3～116.50.180.7～89.1100.3～110.80.584.5～91.282.2～102.6283.4～91.084.4～101.5N-demethyl-XDE-175-J0.0181.9～86.4106.1～116.80.185.8～89.892.8～116.00.580.1～84.283.7～92.1280.1～80.981.1～89.5N-