微生物學藥學專業(yè)免疫學應(yīng)用

微生物學藥學專業(yè)免疫學應(yīng)用第一頁，共六十一頁，2022年，8月28日第一節(jié)免疫學預(yù)防第二頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫天然獲得性被動主動人工天然人工天然自然感染（隱性、顯性）抗毒素免疫球蛋白疫苗類毒素來自母親的抗體（IgG，sIgA）區(qū)別第三頁，共六十一頁，2022年，8月28日天然被動免疫:

母親通過胎盤將IgG、通過初乳將IgA傳給嬰兒。第四頁，共六十一頁，2022年，8月28日一、人工主動免疫概念：給機體輸入抗原物質(zhì)，使免疫系統(tǒng)因抗原的刺激，產(chǎn)生類似感染時所發(fā)生的免疫過程，從而產(chǎn)生特異性免疫力。疫苗的概念：1.將細菌制作的人工主動免疫的生物制劑稱為菌苗。2.將病毒、立克次體、螺旋體等制成的人工主動免疫的生物制劑稱為疫苗。3.國際上將細菌制劑、病毒制劑以及類毒素統(tǒng)稱為疫苗。第五頁，共六十一頁，2022年，8月28日

抗原(Ag)與T細胞結(jié)合，激活T細胞記憶T細胞活化的T殺傷細胞與B細胞結(jié)合，誘導(dǎo)B細胞釋放抗體記憶B細胞活化的B細胞抗體第六頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫記憶AB白喉疫苗DE抗白喉抗體白喉Bmcell抗白喉抗體白喉Bmcell第七頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗死疫苗類毒素

用于主動免疫的疫苗第八頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗：由

減毒或無毒力的活病原微生物制成。常見種類：卡介苗、麻疹活疫苗、脊髓灰質(zhì)炎活疫苗。

死疫苗：病原微生物經(jīng)理化方法滅活制成。常見種類：傷寒、百日咳、霍亂、鉤端螺旋體病、流感、狂犬病、乙型腦炎疫苗第九頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗與死疫苗的比較特點制劑特點

接種劑量及次數(shù)恢復(fù)傾向無毒或減毒的活微生物量較小，一般僅需要一次相對穩(wěn)定性不穩(wěn)定可以回復(fù)為毒株強毒死微生物量較大，需要多次接種較穩(wěn)定不回復(fù)為毒株免疫效果較好，維持3-5年甚至更長較差，維持半年至一年活疫苗死疫苗誘導(dǎo)的免疫類型體液免疫和細胞免疫體液免疫為主第十頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗病毒疫苗脊髓灰質(zhì)炎,麻疹,腮腺炎,風疹,雞水痘,甲肝,黃熱病。結(jié)核(BCG).活菌疫苗（唯一）死病毒疫苗(加熱,化學或紫外光照射)流感,狂犬病

傷寒,霍亂,百日咳etc.死疫苗死菌疫苗（大多數(shù)細菌）常見的疫苗第十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日類毒素概念：種類：第十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日新型疫苗1.亞單位疫苗：腦膜炎球菌2.合成肽疫苗3.基因工程疫苗重組乙型肝炎病毒表面抗原

第十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日二、人工被動免疫將一個免疫了的供體的血清或免疫球蛋白轉(zhuǎn)入到一個未免疫的個體.

沒有抗原刺激免疫系統(tǒng)免疫細胞？第十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫血清概念：是指用免疫動物后獲得的免疫血清或從機體組織中提取制成的免疫球蛋白，主要成分為抗體。常用的種類有：（一）抗毒素血清（二）胎盤丙種球蛋白和人血清丙種球蛋白（三）抗菌免疫血清（四）抗病毒免疫血清（五）抗淋巴細胞丙種球蛋白第十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日破傷風抗毒素(馬血清)

異源?

同源人工注射人的球蛋白或免疫動物的球蛋白。第十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日馬血清抗毒素的兩重性：2、異種抗原，可刺激機體產(chǎn)生抗馬血清抗體，或超敏反應(yīng)（I，III）。1、特異性抗體----中和毒素第十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日人工主動免疫與人工被動免疫區(qū)別點人工主動免疫人工被動免疫接種物抗原抗體免疫力出現(xiàn)時間慢，要經(jīng)過1-4周誘導(dǎo)期快，即刻產(chǎn)生免疫力維持時間長（數(shù)月-數(shù)年）較短（2周-數(shù)周）用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防第十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫學治療第二節(jié)第十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）免疫增強劑概念：是增強、促進和調(diào)節(jié)機體免疫功能的生物制劑或非生物制劑。常見種類：免疫因子微生物制劑化學藥物中藥制劑常用來治療免疫缺陷、病毒感染性疾病和腫瘤。第二十頁，共六十一頁，2022年，8月28日細胞因子細胞因子作為一類重要和有效的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，正逐漸稱為一種常規(guī)手段應(yīng)用于免疫治療。目前已在臨床得到應(yīng)用的細胞因子包括IL、IFN、CSF、TNF等。它們主要用于免疫缺陷、自身免疫、病毒感染性疾病和腫瘤的治療。第二十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日第二十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日過繼免疫過繼免疫治療：過繼免疫是將對疾病有免疫力的供者的免疫應(yīng)答產(chǎn)物轉(zhuǎn)移給其他個體，或自體的細胞經(jīng)體外處理后回輸自身，以發(fā)揮治療疾病的作用。用于過繼免疫的物質(zhì)：包括免疫血清、免疫細胞、細胞因子如轉(zhuǎn)移因子、免疫核糖核酸等。第二十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日骨髓干細胞移植概念：是取患者或健康人的骨髓回輸給患者，讓骨髓中的干細胞進入患者體內(nèi)定居、分化、增殖，使患者恢復(fù)造血功能和免疫力。類型：1.自體骨髓干細胞移植

2.異體骨髓干細胞移植

3.臍血干細胞移植應(yīng)用：1.免疫缺陷病

2.再生障礙性貧血

3.白血病第二十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（二）免疫抑制劑概念：是一類抑制機體免疫功能的生物制劑或非生物制劑。常見種類：1.真菌代謝產(chǎn)物

2.McAb3.抗腫瘤藥物

4.中藥制劑

5.激素特點：1.作用是非特異性

2.大多有毒副作用第二十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日治療性疫苗概念：是以抗原為治療劑，用特定的抗原成分制成的疫苗。進入機體后可增強免疫應(yīng)答或誘導(dǎo)免疫耐受，從而達到治療疾病的目的。用途：

1.增強免疫應(yīng)答的疫苗：治療感染和腫瘤。

2.誘導(dǎo)免疫耐受的疫苗：治療自身免疫病和超敏反應(yīng)，防止免疫排斥。第二十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日第三節(jié)免疫學診斷一、體液免疫測定法第二十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）抗原抗體反應(yīng)的原理和特點原理：抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合部位間存在結(jié)構(gòu)的互補性，二者相互結(jié)合，在適宜條件下，出現(xiàn)可見反應(yīng)。原則：用已知抗體檢測未知抗原，也可用已知抗原檢測未知抗體。特點：

1.特異性

2.可見性

3.可逆性第二十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日1.特異性

一種抗原一般僅能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性即特異性。第二十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日2.可見性若抗原、抗體的數(shù)量比例恰當，抗體分子的兩個Fab段分別與兩個抗原分子結(jié)合，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合體，反應(yīng)體系中基本無游離的抗原或抗體。此時，可形成肉眼可見的明顯反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）。因此，確定抗原、抗體的最適比例十分重要，應(yīng)根據(jù)抗原的物理性狀，對抗原或抗體進行稀釋，以確定最適比例。第三十頁，共六十一頁，2022年，8月28日3.可逆性抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的非共價結(jié)合，結(jié)合穩(wěn)定且可逆。在一定條件下，抗原抗體結(jié)合形成的復(fù)合物可被解離，如低pH、高濃度鹽、凍融等。解離后的抗原或抗體分子仍保持原有的理化特性和生物學活性。如解離后的外毒素恢復(fù)其毒性，細菌仍可存活。第三十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日（二）抗原或抗體的檢測方法

根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分因素，可將抗原抗體反應(yīng)分為：凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補體參與的反應(yīng)采用標記物的抗原抗體反應(yīng)第三十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日1.凝集反應(yīng)概念：細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團塊，此類反應(yīng)稱為凝集反應(yīng)。方法：（1）直接凝集（2）間接凝集第三十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）直接凝集將細菌或紅細胞與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。玻片法：是用已知抗體與相應(yīng)抗原在玻片上反應(yīng)，用于抗原的定性檢測，如ABO血型鑒定、細菌鑒定。試管法：是在試管中連續(xù)稀釋待檢血清，加入已知顆粒性抗原，用于抗體的定量檢測，如診斷傷寒病的肥達試驗。第三十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）間接凝集概念：將可溶性抗原包被在與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體反應(yīng)，出現(xiàn)顆粒物凝集的現(xiàn)象。常用的載體：

人O型血紅細胞聚苯乙烯乳膠顆粒反應(yīng)的類型：第三十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接凝集反應(yīng)的類型根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式，間接凝集反應(yīng)可分為：（正向）間接凝集反應(yīng)：用抗原致敏載體以檢測標本中的相應(yīng)抗體。反向間接凝集反應(yīng)：用特異性抗體致敏載體以檢測標本中的相應(yīng)抗原。間接凝集抑制反應(yīng)第三十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接凝集抑制反應(yīng)診斷試劑：為抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體，用于檢測標本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。檢測方法：為將標本先與抗體試劑作用，然后再加入致敏的載體，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說明標本中不存在相同抗原，抗體試劑未被結(jié)合，因此仍與載體上的抗原起作用。如標本中存在相同抗原，則凝集反應(yīng)被抑制。第三十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日2、沉淀反應(yīng)概念：血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，此類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。方法：沉淀反應(yīng)多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進行瓊脂擴散或免疫擴散。即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴散，在比例合適處相遇時形成可見的白色沉淀。第三十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）單向瓊脂擴散方法：將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散。結(jié)果：抗原在擴散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量呈正相關(guān)。取已知量抗原繪制標準曲線，可根據(jù)所形成沉淀環(huán)的直徑，從標準曲線中查出待檢標本的抗原含量。應(yīng)用：本法常用于定量測定血清IgG、IgM、IgA和C3等。第三十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）雙向免疫擴散將抗原與抗體分別加于瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向四周擴散，在相遇處形成沉淀線。若反應(yīng)體系中含兩種以上抗原-抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原的相關(guān)性分析。第四十頁，共六十一頁，2022年，8月28日（3）免疫電泳方法：先將待檢血清標本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組份被分為不同區(qū)帶，然后按電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)抗血清，與已分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散，在各區(qū)帶相應(yīng)位置形成沉淀弧。結(jié)果：對照正常血清形成的沉淀弧數(shù)量、位置和形態(tài)，可分析標本中所含抗原成分的性質(zhì)和含量。應(yīng)用：該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig異常增多或缺失，可診斷骨髓瘤及性聯(lián)低丙種球蛋白血癥等疾病。第四十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日（4）免疫比濁方法：在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。結(jié)果：用濁度計測量反應(yīng)液體的濁度，復(fù)合物形成越多則濁度越高，可繪制標準曲線并依據(jù)反應(yīng)液體的濁度推算樣品中抗原含量。應(yīng)用：該法快速簡便，可取代單向免疫擴散用于測定Ig含量。第四十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日3.免疫標記技術(shù)概念：免疫標記技術(shù)乃用熒光素、酶或放射性核素等標記抗體或抗原，進行抗原-抗體反應(yīng)。標記物與抗體或抗原連接后并不改變后者的免疫特性。優(yōu)點：具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點。是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學檢測技術(shù)。第四十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）免疫熒光法(IF)

概念：用熒光素與抗體連接成熒光抗體，再與待檢標本中抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原-抗體復(fù)合物散發(fā)熒光，借此鑒定或定位標本中的抗原。常用的熒光素：有異硫氰酸熒光素(FITC)和藻紅蛋白（PE），前者發(fā)黃綠色熒光，后者發(fā)紅色熒光。方法：第四十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日直接熒光法方法：將熒光素直接標記抗體，對標本進行染色。優(yōu)點：是特異性高。缺點：是檢查任一抗原均須制備相應(yīng)熒光抗體。

第四十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接熒光法方法：用一抗與標本中抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗染色。優(yōu)點：是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可用于多種抗原的檢查，但非特異性反應(yīng)亦增加。第四十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫熒光法的應(yīng)用檢查細菌、病毒、螺旋體等抗原或抗體，用于診斷傳染病。鑒定免疫細胞表面的CD分子。檢測自身免疫病的抗核抗體。第四十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）酶免疫測定(EIA)方法：將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應(yīng)判定結(jié)果。結(jié)果觀察：可用目測定性，也可用酶標測定儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量，靈敏度可達每毫升ng甚至pg水平。常用于標記的酶：有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等。常用的方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗：測定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：檢測組織或細胞表面抗原第四十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)是酶免疫測定中應(yīng)用最廣的技術(shù)?；痉椒ㄊ牵簩⒁阎乖蚩贵w吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原-抗體反應(yīng)在固相表面進行，用洗滌法將固相上的抗原-抗體復(fù)合物與液相中的游離成份分開。ELISA的操作方法很多，簡介以下方法：

雙抗體夾心法間接法第四十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日雙抗體夾心法用于檢查特異性抗原。方法：將已知抗體包被固相，加入待檢標本，標本中若含有相應(yīng)抗原即與固相表面的抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分，加入該抗原特異的酶標記抗體，洗去未結(jié)合的酶標記抗體，加底物后顯色。若標本中無相應(yīng)抗原，固相表面即無抗原結(jié)合，加入的酶標記抗體則不能結(jié)合于固相并被洗滌去除，當加入無色底物后，因無酶催化故不顯色。

第五十頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接法用于檢查特異性抗體。方法：用已知抗原包被固相，加入待檢血清標本，再加酶標記的二抗，加底物觀察顯色反應(yīng)。ELISA敏感性高、操作簡便，配套儀器設(shè)備的發(fā)展使操作程序規(guī)范化和自動化，并進一步提高了穩(wěn)定性，被廣泛用于檢測多種病原體抗原或抗體、血液及其它體液中微量蛋白成分、細胞因子等。第五十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫組化技術(shù)概念：是應(yīng)用標記的抗體與組織或細胞抗原發(fā)生反應(yīng)，結(jié)合形態(tài)學觀察，對抗原作定性、定量、定位檢測。常用的技術(shù)包括：酶免疫組化（辣根過氧化物酶標記）免疫金組化（膠體金顆粒標記）免疫電鏡技術(shù)（鐵蛋白、膠體金、過氧化物酶標記）第五十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日

（3）放射免疫測定法(RIA)概念：用放射性核素標記抗原或抗體進行免疫學檢測。它將放射性核素具有的高靈敏度和抗原-抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，使檢測的靈敏度達pg水平。常用于標記的放射性核素有：125I和131I。采用的方法分為：液相法和固相法兩種。應(yīng)用：常用于測定微量物質(zhì)，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛等藥物，以及IgE等。第五十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日二、細胞免疫測定法檢測淋巴細胞的類別、數(shù)量與功能，是判斷機體免疫功能狀態(tài)的重要手段?；颊咄庵苎侵饕臉吮緛碓矗珒H代表再循環(huán)的淋巴細胞。實驗動物還可取胸腺、脾臟、淋巴結(jié)等作為標本進行檢查。第五十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）體外測定法1.E花結(jié)試驗：

人成熟T細胞表面CD2分子是綿羊紅細胞（SRBC）受體，能結(jié)合SRBC而形成花結(jié)。第五十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日2.T細胞增殖試驗原理：植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等絲裂原以及抗CD3抗體等均能非特異性激活培養(yǎng)的