病原生物學實驗二課件

病原生物學實驗（二）細菌接種技術(shù)實驗目的1掌握常用的細菌接種方法2熟悉細菌生長現(xiàn)象的觀察方法

（一）細菌的分離培養(yǎng)和接種技術(shù)接種工具接種針和接種環(huán)L型涂布棒接種環(huán)境接種罩、超凈工作臺或無菌室內(nèi)進行。分區(qū)劃線劃線時接種環(huán)與平皿約成30-40度角,輕輕接觸,以腕力在瓊脂表面輕快滑動,不能劃破瓊脂.第一次劃線應占平皿面積的1/10,以后每次劃線約占面積的1/4—1/5.劃線為連續(xù)劃線,不能間斷.應占滿平皿.劃線不能交叉重復.每次劃完后應滅菌.2.斜面接種法：用于菌種移種，以進一步鑒定和保存菌種。

四種接種方法將上述已接種細菌的培養(yǎng)基置37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育18～24h，觀察細菌的生長現(xiàn)象。（二）細菌在培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象菌落與菌苔菌落菌苔2.細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象渾濁：大多數(shù)細菌，如E.c.沉淀：多見于鏈狀排列的細菌。菌膜：專性需氧菌（如結(jié)核分枝桿菌、枯草桿菌）。細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌膜菌沉淀均勻渾濁對照細菌在半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有動力現(xiàn)象無動力現(xiàn)象腸道致病菌的分離培養(yǎng)(1)

一.腸道桿菌的生物學性狀

二.S-S培養(yǎng)基的特性及用途三.分離培養(yǎng)方法

主要內(nèi)容1.相似的形態(tài)染色—從形態(tài)上無法區(qū)別中等大小的G-桿菌

多有鞭毛、菌毛乳糖發(fā)酵試驗腸道致病菌

腸道非致病菌

多數(shù)不發(fā)酵乳糖

多數(shù)發(fā)酵乳糖2.活潑的生化反應初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌

+/-

-

+傷寒桿菌

-

-

+痢疾桿菌

-

⊕

⊕大腸桿菌硫化氫乳糖葡萄糖菌名

三種細菌的生化反應膽鹽抑制G+,枸櫞酸鈉和煌綠能部分抑制大腸桿菌,致病的沙門菌和志賀菌能大量生長。中性紅指示劑和乳糖,中性紅遇酸變粉紅。常用于腸道致病菌的分離培養(yǎng)。

（二）SS培養(yǎng)基細菌SS平板大腸桿菌粉紅色大菌落痢疾桿菌無色細小，半透明菌落傷寒桿菌無色細小半透明菌落(中間有黑色沉淀）SS培養(yǎng)基中菌落特點1.空氣中細菌的檢查（每個班2個平皿）

原理：根據(jù)空氣中攜帶有微生物氣溶膠（以固體或液體微小顆粒分散于空氣中的分散體系稱為氣溶膠，其中的氣體是分散介質(zhì)）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。

方法：在室內(nèi)選擇一處放一個平皿。揭開皿蓋，皿蓋扣置于皿底下，暴露放置15min，即蓋上皿蓋，放入37℃培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果。細菌在自然界的分布2.紫外線對細菌的影響（每個實驗室2個培養(yǎng)皿）取一個平皿，用密涂法將細菌涂布于培養(yǎng)皿中，打開一半平皿蓋，置于紫外燈下照射30分鐘，然后蓋好平皿，置37℃培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。密涂接種

分三次接種，每次取一環(huán)。第一次密涂接種后旋轉(zhuǎn)60度二次密涂接種，然后同方向旋轉(zhuǎn)60度后再次密涂接種。3.咽喉部細菌的檢查（每班4個平皿）取血瓊脂平板1塊，打開平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于口腔前10cm處，受試者用力咳嗽幾次；蓋上平皿蓋，置37℃溫箱中倒置培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。4.化學消毒劑對細菌的影響方法：取一普通平皿培養(yǎng)基，一部分寫上“前”，另一部分寫上“后”，然后將手指在寫有“前”的部分沾一下，再將手指用酒精進行消毒，在寫有“后”的部分沾一下。放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時后觀察。

（每個實驗室4個平皿）5.自選細菌進