標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 40225-2021 肌動(dòng)蛋白抗體的檢測 免疫印跡法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了通過免疫印跡法（Western Blot）來檢測肌動(dòng)蛋白抗體的具體方法。適用于醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷等領(lǐng)域中對于肌動(dòng)蛋白抗體存在與否及其濃度水平進(jìn)行測定。

在準(zhǔn)備階段，首先需要確保所有實(shí)驗(yàn)材料和試劑的質(zhì)量符合要求，包括但不限于抗原、一抗、二抗、封閉液等，并且操作環(huán)境需達(dá)到生物安全實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)要求。樣品處理過程中，根據(jù)待測樣本類型不同，可能涉及細(xì)胞裂解物制備或血清直接使用等步驟。關(guān)鍵在于保證目標(biāo)蛋白質(zhì)能夠有效提取并保持其天然狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)特性。

接下來是電泳分離環(huán)節(jié)，采用SDS-PAGE技術(shù)將混合物中的各種蛋白質(zhì)按照分子量大小區(qū)分開來。之后通過轉(zhuǎn)移膜裝置把已分離好的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持介質(zhì)上，通常為硝酸纖維素膜或PVDF膜。此過程需注意控制電流強(qiáng)度及時(shí)間以獲得最佳轉(zhuǎn)印效果。

完成轉(zhuǎn)移后進(jìn)入免疫反應(yīng)階段，首先是用適當(dāng)濃度的一抗溶液與膜上的特異性抗原結(jié)合；經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的一抗后，再加入帶有標(biāo)記物的二抗，使其識別并與一抗形成復(fù)合體。最后通過化學(xué)發(fā)光或其他顯色系統(tǒng)顯示出陽性條帶的位置，從而判斷是否存在針對肌動(dòng)蛋白的特異性抗體以及它們的大致含量。

整個(gè)流程強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)條件的選擇、操作規(guī)范性以及結(jié)果判讀的重要性。每一步驟都需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)給出的方法執(zhí)行，以保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。此外，還應(yīng)定期對儀器設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn)維護(hù)，確保長期穩(wěn)定運(yùn)行。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2021-05-21 頒布
  • 2021-12-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
GB/T 40225-2021肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法_第1頁
GB/T 40225-2021肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法_第2頁
GB/T 40225-2021肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法_第3頁
GB/T 40225-2021肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法_第4頁
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文檔簡介

ICS07080

CCSA.40

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T40225—2021

肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法

Determinationofactinantibody—Westernblottingmethod

2021-05-21發(fā)布2021-12-01實(shí)施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法

GB/T40225—2021

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20215

*

書號

:155066·1-67373

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T40225—2021

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本文件起草單位中國測試技術(shù)研究院成都正能生物技術(shù)有限責(zé)任公司深圳市第二人民醫(yī)院

:、、、

甘肅中商食品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測有限公司深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司上海市計(jì)量測試技術(shù)研

、、

究院

。

本文件主要起草人李懷平周李華邱俊康馬麗俠顧大勇張秦川張譯文蔣子敬王偉葉德萍

:、、、、、、、、、、

何海寧洪霞劉剛

、、。

Ⅰ

GB/T40225—2021

肌動(dòng)蛋白抗體的檢測免疫印跡法

1范圍

本文件描述了肌動(dòng)蛋白抗體的免疫印跡檢測方法

。

本文件適用于基于免疫印跡法原理的肌動(dòng)蛋白抗體的測定

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

肌動(dòng)蛋白actin

一類形成微絲的球狀多功能蛋白質(zhì)細(xì)胞骨架的主要成分廣泛表達(dá)于真核細(xì)胞中

,,。

注1目前發(fā)現(xiàn)肌動(dòng)蛋白至少存在種異構(gòu)體形式主要分布在心肌骨骼橫紋肌和平滑肌組織中調(diào)控細(xì)胞的收縮

:6,、,

能力也表達(dá)于非肌肉細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和活力

,,。

注2肌動(dòng)蛋白分子質(zhì)量為具有高度保守性在細(xì)胞中的表達(dá)相對穩(wěn)定因此它常被用作

:45ku±3ku(1u≈1Da),,,

校正系統(tǒng)的內(nèi)參

。

32

.

肌動(dòng)蛋白抗體actinantibody

以肌動(dòng)蛋白為抗原免疫動(dòng)物之后獲得的動(dòng)物血清中能夠與肌動(dòng)蛋白特異性抗原抗體結(jié)合的免

,“-”

疫球蛋白的總稱

。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

過硫酸銨

APS:(ammoniumperoxodisulphate)

二喹啉甲酸

BCA:(bicinchoninicacid)

化學(xué)發(fā)光試劑

ECL:(electrogeneratedchemiluminescence)

辣根過氧化物酶

HRP:(horseradishperoxidase)

乙基苯基聚乙二醇

NP-40:(NonidetP40)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebuffersaline)

磷酸鹽吐溫緩沖液

PBST:(phosphatebuffersalinew

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