標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 35911-2018 偽狂犬病病毒熒光PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在提供一種用于檢測(cè)動(dòng)物樣本中偽狂犬病病毒(PRV)核酸的方法。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行PRV核酸檢測(cè)的操作流程、試劑要求、儀器設(shè)備配置以及結(jié)果分析與報(bào)告等內(nèi)容。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn),首先需要準(zhǔn)備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)材料和試劑,包括但不限于DNA提取試劑盒、Taq酶混合液、特異性引物及探針等,并確保所有使用的試劑都在有效期內(nèi)且按照制造商提供的說明正確儲(chǔ)存。接著,從疑似感染或攜帶PRV的動(dòng)物體內(nèi)采集樣品,如血液、組織液或其他體液等,并通過適當(dāng)?shù)姆椒◤闹刑崛〕隹侱NA作為后續(xù)PCR擴(kuò)增的目標(biāo)模板。
在正式開始PCR反應(yīng)之前,應(yīng)先設(shè)置好對(duì)照組以驗(yàn)證整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的有效性,通常包括陽性對(duì)照、陰性對(duì)照以及內(nèi)參對(duì)照等。隨后,將待測(cè)樣品與上述已準(zhǔn)備好的各種成分按一定比例混合,在特定條件下進(jìn)行循環(huán)加熱降溫處理,促使目標(biāo)序列得到指數(shù)級(jí)放大。此過程中利用熒光標(biāo)記探針對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)PRV核酸的存在與否及其含量水平的準(zhǔn)確判斷。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2018-02-06 頒布
- 2018-09-01 實(shí)施
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文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T35911—2018
偽狂犬病病毒熒光PCR檢測(cè)方法
Real-timePCRmethodfordetectionofpseudorabiesvirus
2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T35911—2018
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗(yàn)檢疫局中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所中華
:、、
人民共和國深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院湖南圣湘生物科技有限公司
、、。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張強(qiáng)童光志李健熊煒趙和平李樹清王艷李國新楊忠蘋花群義林穎崢
:、、、、、、、、、、、
王巧全蔡開妹喻正軍吳紹強(qiáng)林祥梅
、、、、。
Ⅰ
GB/T35911—2018
偽狂犬病病毒熒光PCR檢測(cè)方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了偽狂犬病病毒熒光檢測(cè)的操作方法
PCR。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于偽狂犬病病毒核酸檢測(cè)
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范
GB/T25172
3縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
熒光熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
PCR(real-timepolymerasechainreaction)
Ct值每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)量達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
(cyclethreshold)
脫氧核糖核酸
DNA(deoxyribonucleicacid)
Taq酶Taq聚合酶Taq
DNA(DNApolymerase)
緩沖液緩沖液
TETris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)
偽狂犬病病毒
PRV(pseudorabiesvirus)
4儀器
41熒光檢測(cè)儀
.PCR。
42高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)可控溫至離心速度可達(dá)以上
.:4℃、12000r/min。
43組織研磨器或者研缽
.。
44普通冰箱
.:2℃~8℃。
45普通冰柜以下
.:-20℃。
46超低溫冰箱可控溫至以下
.:-70℃。
47微量移液器并
.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,
配備與移液器匹配的吸頭
。
48高壓滅菌鍋
.。
5耗材
51
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