朱虹課件：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究：討論探究：1.探究實驗的一般步驟是什么？2.本實驗的實驗材料有哪些？3.實驗步驟有哪些？4.該實驗的注意事項有哪些?5.影響酵母菌種群數(shù)量增長的因素有哪些？探究11．提出問題：2．作出假設(shè)：3．設(shè)計實驗：4．進行實驗：5．分析結(jié)果：

6．得出結(jié)論：培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？酵母菌在開始一段時間呈“J”型增長，隨著時間的推移，由于資源和空間有限，呈“S”型增長。連續(xù)培養(yǎng)7天，每天用顯微鏡和血球計數(shù)板計數(shù)出酵母菌種群密度各小組匯報實驗結(jié)果，結(jié)合前4天的結(jié)果，畫出酵母種群增長的曲線圖并進行分析。酵母菌在開始一段時間呈“J”型增長，但隨著時間的推移，由于資源和空間有限，將呈“S”型增長，并最終將全部死亡。實驗材料：1.無菌培養(yǎng)液2.酵母菌3.血球計數(shù)板4.顯微鏡酵母菌:1.酵母菌是原核生物還是真核生物？與乳酸菌的主要區(qū)別是什么？2.酵母菌的生長特點是什么?3.酵母菌的呼吸方式是？寫出相關(guān)的方程式？4.酵母菌的生殖方式是什么？酵母菌1.酵母菌是單細胞真核生物,2.生長周期短，增殖速度快，3.既可有氧呼吸,又可無氧呼吸,還可以用酵母菌作為實驗材料研究（探究酵母菌的呼吸方式，判斷細胞的死活探究膜的透性:）4.主要是出芽生殖(有絲分裂)酵母菌的計數(shù)（1）計數(shù)工具——血球計數(shù)板

每個計數(shù)板有兩個計數(shù)室（1個計數(shù)室即一個大格）。血球計數(shù)板:一種專門計數(shù)較大單細胞微生物的儀器計數(shù)室計數(shù)室（中間大方格）的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為______mm3，合_________mL。1mm0.11×10-4血球計數(shù)板:一種專門計數(shù)較大單細胞微生物的儀器計數(shù)室計數(shù)室分為25中格（雙線邊）每一中格又分為16小格計數(shù)室是由___________個小格組成25×16=400計數(shù)室計數(shù)室分為16中格（雙線邊）每一中格又分為25小格計數(shù)室是由___________個小格組成16×25=400取樣方法:25個中格每個中格有16個小格16個中格每個中格有25個小格*********抽樣檢測（書上68頁）5×16=80個小格抽樣檢測：4×25=100個小格實驗步驟：①將10mL無菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液加入3支試管中；②將酵母菌接種入試管中的培養(yǎng)液中混合均勻；③將試管在28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)7d；④每天固定時間（即相同時間）取樣計數(shù)酵母菌數(shù)量，每個樣品計數(shù)三次，取平均值，連續(xù)7天；怎樣計數(shù)?估算公式?⑤分析結(jié)果，得出結(jié)論。酵母菌的計數(shù)的操作震蕩試管：使酵母菌在培養(yǎng)液中分布均勻。稀釋：將酵母菌培養(yǎng)液進行適當?shù)南♂?；若菌液不濃，可不必稀釋。加樣品：在清潔干燥的血球計?shù)板上先蓋上蓋玻片，再用無菌滴管將稀釋的酵母菌液滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液沿縫

隙自行滲入計數(shù)室。注意不可有氣泡產(chǎn)生。多余培養(yǎng)液用濾紙吸去。稍待片刻，待酵母菌細胞全部沉降到計數(shù)室底部。再將血球計數(shù)板置于顯微鏡下進行計數(shù)。顯微計數(shù)：根據(jù)血球計數(shù)板的規(guī)格，每個計數(shù)室選取5個（或4個中方格中的菌體進行計數(shù)。當菌體數(shù)太多，數(shù)不清時，事先要稀釋培養(yǎng)液）例1：血球計數(shù)板計數(shù)室（大方格）規(guī)格為1mm*1mm,蓋玻片下培養(yǎng)液厚度為0.1mm,若一個小方格內(nèi)酵母菌有a個，則10ml培養(yǎng)液中有多少個酵母菌？若稀釋10倍后，一個小方格中的酵母菌有b個，則10ml培養(yǎng)液中有多少個酵母菌？提示：先算每毫升培養(yǎng)液中的酵母菌細胞數(shù)是多少？酵母菌的計數(shù)（2）計算：

每毫升培養(yǎng)液中的酵母菌細胞數(shù)是多少？

酵母細胞個數(shù)/mL=所數(shù)小方格中細胞總數(shù)x400x104x稀釋倍數(shù)所數(shù)的小方格數(shù)例3:酵母菌的計數(shù)通常用血球計數(shù)板進行，血球計數(shù)板每個大方格容積為0.1mm3，由400個小方格組成?，F(xiàn)對某一樣液進行檢測，如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以計數(shù)，應(yīng)先

后再計數(shù)。若多次重復(fù)計數(shù)后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個。例2:在用血球計數(shù)板（2mm×2mm方格）對某一稀釋50倍樣品進行計數(shù)時，發(fā)現(xiàn)在一個計數(shù)室內(nèi)（蓋玻片下的培養(yǎng)液厚度為0.1mm）酵母菌平均數(shù)為16，據(jù)此估算10mL培養(yǎng)液中有酵母菌

個。2x1072×108稀釋例4

檢測員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由25×16＝400個小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3?，F(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內(nèi)共有藍藻n個，則上述水樣中約有藍藻

個／mL。5n×105

第1天第4天第6天第7天死亡第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第1組第2組第3組------第n組平均值酵母菌數(shù)量變化記錄表酵母菌數(shù)量變化記錄表計數(shù)時有哪些注意事項？①從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾次；如果酵母菌濃度過大，應(yīng)先稀釋。②對于壓在中格界線上的酵母菌，一般只取相鄰兩邊及夾角計數(shù)；③對于已經(jīng)出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算；已死亡的酵母菌不計數(shù)※。④每個樣品一般計數(shù)三次，取其平均值。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化該實驗的注意事項：1.每天計數(shù)的時間要固定（即相同）。2.進行計數(shù)前，應(yīng)先將試管搖勻，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中混合均勻，以減少計數(shù)誤差。（即不能直接從靜置的試管中取樣計數(shù)）3.顯微鏡計數(shù)時，對于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計數(shù)。4.若一個小方格內(nèi)酵母菌數(shù)量過多，難以數(shù)清時，則可將培養(yǎng)液稀釋一定倍數(shù)后再計數(shù)。5.本實驗無對照實驗，酵母菌每天的數(shù)量變化在時間上已形成前后對照。6.本實驗需要重復(fù)實驗或重復(fù)組，使結(jié)果更準確。7.血球計數(shù)板使用后的清洗，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和自來水沖洗的方法清洗,然后自行晾干。死亡在計數(shù)前，還應(yīng)有哪些步驟？需注意些什么？培養(yǎng)液配制滅菌接種培養(yǎng)無菌操作培養(yǎng)條件影響酵母菌種群數(shù)量的變化因素有:

種群數(shù)量的變化包括增長、波動、穩(wěn)定、下降等“S”型曲線有一個K值，即環(huán)境容納量。

種群數(shù)量的增長也受到許多環(huán)境因素（如溫度、培養(yǎng)液的pH、培養(yǎng)液的養(yǎng)分種類和濃度、代謝產(chǎn)物等）的影響。試管編號培養(yǎng)液/mL無菌水/mL酵母菌母液/mL溫度（℃）A10—0.128B10—0.15C—100.128針對“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化”，有人提出了新的問題，某同學按下表完成了有關(guān)實驗。溫度、營養(yǎng)物質(zhì)對酵母菌生長的影響試管編號培養(yǎng)液/mL無菌水/mL酵母菌母液/mL溫度（℃）A10—0.128B10—0.15C—100.128以計數(shù)酵母菌為例

(1)用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù).

(2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù),以每小方格內(nèi)含有4-5個酵母細胞為宜,一般稀釋10倍即可.

(3)將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數(shù)室上加蓋專用的厚玻片.

(4)將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內(nèi).

血球計數(shù)板的使用(5)計數(shù)時,如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數(shù).如果規(guī)格為25格×16格的計數(shù)板,除了取其4個對角方位外,還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù).

(6)當遇到位于大格線上的酵母菌,一般只計數(shù)大方格的上方和左方線上的酵母細胞(7)對每個樣品計數(shù)三次,取其平均值,按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù).3.計算公式

(1)16格×25格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/100×400×104×稀釋倍數(shù)

(2)25格x16格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)

怎樣進行酵母菌的計數(shù)？

對一支試管中的培養(yǎng)液(可定為10ml)中的酵母菌逐個計數(shù)是非常困難的，可以采用抽樣檢測的方法：先將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液用濾紙吸去，稍待片刻，待酵母菌細胞全部沉降到計數(shù)室底部，將計數(shù)板放在載物臺的中央，計數(shù)一個小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量，再以此為根據(jù)，估算計算中的酵母菌總數(shù)，蓋玻片下，培養(yǎng)液厚度為0.1mm，可算出10ml培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)的公式：2.5×104x(x為小方格內(nèi)酵母菌數(shù))

從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，建議你將試管輕輕振蕩幾次。這是為什么？本探究需要設(shè)置對照嗎？如果需要請討論對照組應(yīng)怎樣設(shè)計和操作；如果不需要，請說明理由。需要做重復(fù)實驗嗎？目的是使培養(yǎng)液中的酵母菌均勻分布，以保證估算的準確性，減少誤差。不需要，本實驗旨在探究培養(yǎng)液中酵母菌在一定條件下的種群數(shù)量變化，只要分組實驗，獲得平均數(shù)值即可。

不用重復(fù)，只要分組實驗獲得平均值即可。5、怎樣記錄結(jié)果？記錄表怎樣設(shè)計？如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以計數(shù)，應(yīng)采取怎樣的措施？第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第1組第2組第3組------第n組平均值搖勻試管取1mL酵母菌培養(yǎng)液稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以n×2.5×104，即為10mL酵母菌液中酵母菌個數(shù)。只計數(shù)相鄰兩邊及其頂角的酵母菌數(shù)。7對于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)當怎樣計數(shù)？設(shè)計實驗：A組為實驗組，裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃。B組裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度5℃，與A組形成溫度條件對照。C組不裝培養(yǎng)液，只裝無菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃，