動物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備-副本

動物細(xì)胞融合與單克隆抗體學(xué)習(xí)目標(biāo)：舉例說出動物細(xì)胞融合與單克隆抗體的原理和應(yīng)用學(xué)習(xí)重點(diǎn)和難點(diǎn)：單克隆抗體的制備和應(yīng)用提問：哪種植物細(xì)胞工程技術(shù)可以突破不同生物之間的生殖隔離障礙，培育出新的作物類型？

植物體細(xì)胞雜交技術(shù)你能回憶出植物體細(xì)胞雜交的過程嗎？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程圖動、植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？無細(xì)胞壁全能性受限制，不能發(fā)育成雜種動物動物細(xì)胞雜交與植物細(xì)胞雜交的不同：不需去除細(xì)胞壁不能發(fā)育成新的動物個(gè)體思考動物細(xì)胞融合的概念

動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指

或

動物細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞的過程動物細(xì)胞融合融合后形成的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞多個(gè)兩個(gè)請同學(xué)們閱讀課本P52動物細(xì)胞融合細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞生物：滅活的病毒物理法化學(xué)法動物細(xì)胞體外融合誘導(dǎo)方式用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面先質(zhì)融合，再核融合細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動性）問題討論2、動物細(xì)胞融合有什么意義？1、不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？病毒一般對生物體是有傷害的。不滅活的病毒會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。滅活的病毒物理或化學(xué)方法喪失感染活性保留融合活性突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。主要用于制備單克隆抗體有何同？不同？動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物、動物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理步驟誘導(dǎo)方法用途主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒

物理（離心、振蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去壁→誘導(dǎo)融合→組培細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞全能性由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

單克隆抗體特點(diǎn)：

特異性強(qiáng)、靈敏度高抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.抗體是如何產(chǎn)生的？主要分布于哪里？？單克隆抗體抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。主要存在于血清中。B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。..傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問題？？單克隆抗體傳統(tǒng)制備抗體的缺點(diǎn)：傳統(tǒng)制備抗體的方法是：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？（怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？）單克隆抗體提示：1.什么樣的細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體？2.什么樣的細(xì)胞可以無限增殖？？

設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖雜種細(xì)胞單克隆抗體B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中融合細(xì)胞幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能無限增殖又能產(chǎn)生專一的特異性抗體。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性專一抗體檢驗(yàn)陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？本過程利用的那些技術(shù)？動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？幾種融合細(xì)胞？兩次篩選的目的分別是什么？2、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點(diǎn)？①診斷疾病單克隆抗體的應(yīng)用②用于治療疾病和運(yùn)載藥物

（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）（位置準(zhǔn)確、療效高、副作用小）兩個(gè)過程動物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢課堂小結(jié)你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細(xì)胞－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的 B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ即時(shí)訓(xùn)練

單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③C．①②③④D．②③C

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌特異性抗體無限增殖B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC1、陰性：測試區(qū)中出現(xiàn)一條紫紅色線（對照線C線），表明未懷孕。2、陽性：測試區(qū)中出現(xiàn)兩條紫紅色線（對照線C線和檢測線T線），表明懷孕。不同懷孕階段的檢測線顯色強(qiáng)度隨HCG濃度的改變而改變。3、無效：測試區(qū)無紫紅色線出現(xiàn)或測試區(qū)僅出現(xiàn)