GAL性能說明新講解檢驗科用2012

露喜佳?Lucica?

GA-L

酶法糖化白蛋白（液狀試劑）

澳斯邦生物工程有限公司2012。6。28１．露喜佳?GA-L的開發(fā)歷史２．露喜佳?GA-L試劑性能介紹３．露喜佳?GA-L試劑的優(yōu)點1976ＴＢＡmethod

FlukigerR.,et.al1981

Furosinemethod

SchleicherE.,et.al1982

Fructosamine

JohnsonRN.,et.al1982

Affinitymethod

DennisC.,et.al1985ＲＩＡmethod

TanedaS.,et.al

1988ＨＰＬＣmethod

ShimaK.,et.al1989

ELISAmethod

CohenMP.,et.alEIAmethod

MiyakeY.,et.al

Enzymaticmethod

高妻

Ｔ.,et.al(LucicaGA)2004Enzymaticmethod

高妻

Ｔ.,et.al(LucicaGA-L)露喜佳?GA-L的歷史（論文報告）年代

糖化血紅蛋白

１９８０年代

血紅蛋白A1c

GA和A1C的進化

（商業(yè)上）１９８０年代

果糖胺

：葡萄糖＋球蛋白等

34%66%白蛋白白蛋白+HbA1a,HbA1bHbA1cHbA1cHbA1c不穩(wěn)定型A1c１９８２年代

穩(wěn)定型HbA1c

２００２年酶法糖化白蛋白１９８８年ＨＰＬＣ糖化白蛋白GA為血清蛋白(果糖胺)的進化型。其發(fā)展比血紅蛋白(A1C)晚。GSP/ALB(%)

１．露喜佳?GA-L的開發(fā)歷史２．露喜佳?GA-L試劑性能介紹３．露喜佳?GA-L試劑的優(yōu)點

露喜佳?

Lucica?GA-L產(chǎn)品概述·用于自動生化分析·試劑全部為液體并分別包裝·

有效期:12個月·對白蛋白和糖化白蛋白的雙向測定·保存方法：2～10℃露喜佳?GA-L反應(yīng)原理

（GA試劑）葡萄糖酮ＫＡＯＤ（酮胺氧化酶）內(nèi)因性糖化氨基酸氨基酸＋１）糖化氨基酸的消失反應(yīng)（GA

R-1）

H2O2H2O＋O2＋ＰＯＤＴＯＤＢ４-ＡＡ青紫色蛋白酶糖化血清白蛋白：葡萄糖葡萄糖酮氨基酸糖化氨基酸ＫＡＯＤ（酮胺氧化酶）２）糖化白蛋白的測定

（GAR-2）

專利露喜佳?GA-L反應(yīng)原理（ALB試劑）ＡＬＢＡＬＢＡＬＢ還原性白蛋白氧化性白蛋白氧化性白蛋白+氧化１）白蛋白的前處理

（ALB

R-1）２）白蛋白的測定

（ALB

R-２）ＡＬＢ溴甲酚紫（ＢＣＰ）青紫色氧化性白蛋白專利露喜佳?GA-L操作法和反應(yīng)曲線

０５分１０分

主波長５４６ｎｍ

副波長７００ｎｍ

試料；６μＬ酶液；６０μＬ

前處理液；２４０μＬ糖化白蛋白試劑操作法糖化白蛋白值(%)的計算用糖化白蛋白的濃度除以白蛋白的濃度，算出試料中的糖化白蛋白值(%)。

０５分１０分

主波長６００ｎｍ

副波長６６０ｎｍ

試料；３μＬ發(fā)色液；１１０μＬ

前處理液；２２０μＬ白蛋白試劑操作法（日立７１７０Ｓ為例）糖化白蛋白反應(yīng)曲線025507510012515005101520253035測定點（日立７１７０ｓ）靈敏度（ｍＡｂｓ）健康者血清患者血清白蛋白反應(yīng)曲線05010015020025030005101520253035測定點（日立７１７０ｓ）靈敏度（ｍＡｂｓ）低白蛋白血清健康者血清露喜佳?GA-L定量性(稀釋直線性)?GA濃度至４.０９g/dＬ有直線性。?ALB濃度至８.００g/dＬ有直線性。糖化白蛋白濃度的測定范圍Ｙ=71.9Ｘ+1.72R2=0.99901002003004005000123456糖化白蛋白濃度（ｇ／ｄｌ）靈敏度(mAbs)４.０９g/dＬ用高濃度試樣，以蒸餾水稀釋；研究稀釋直線性，取得測定上限濃度。白蛋白濃度的測定范圍Ｙ=57.3Ｘ-4.05R2=1.00001002003004005006000246810白蛋白濃度（ｇ／ｄｌ）靈敏度(mAbs)８.００ｇ/ｄＬ露喜佳?GA-L測定范圍?將高GA值(68.1%)試樣和低GA值(3.2%)試樣進行混合，測定各個混合試樣的GA值，確認(rèn)其直線性，并研究GA值的測定范圍。?顯示良好的直線性，作為GA值在3.2～68.1％范圍能作正確地測定。

y=0.649x+2.978ｒ=0.99901020304050607080020406080100高GA試樣混合率(%)GA%露喜佳?GA-L同時重復(fù)性?用管理血清，健康者血清以及患者血清，同時測定２０次，研究重復(fù)性。?同時重復(fù)性不管血清的種類，CV均在1％以內(nèi)，取得穩(wěn)定的測定結(jié)果。露喜佳?GA-L日間重復(fù)性?用健康者血清和患者血清，32天內(nèi)測定20次，研究日間重復(fù)性。?不依靠校準(zhǔn)方法，也能取得穩(wěn)定的測定結(jié)果。測定日初次每次初次每次初次每次初次每次初次每次初次每次第１天0.6090.6094.564.5016.116.20.8970.8954.104.0224.625.0第２天0.6030.6104.564.4615.916.40.8850.8974.084.0024.425.1第３天0.6050.6014.544.4616.016.20.8920.8864.164.0624.224.5第４天0.6080.6024.584.4616.016.20.8980.8894.124.0224.524.8第５天0.6090.6024.624.5215.916.00.8910.8904.104.0624.424.6第９天0.6130.6044.584.4816.116.20.8930.8874.144.0224.324.8第10天0.6110.6064.564.5016.116.20.8930.8974.164.0824.224.7第11天0.6050.6004.564.4816.016.10.8900.8914.124.0224.324.9第12天0.6090.6054.604.5415.916.00.8910.8904.144.0824.224.5第15天0.6120.6064.604.5016.016.20.8940.8904.164.0424.224.7第19天0.6100.6074.644.5215.916.10.8950.8934.164.0424.224.8第22天0.6120.6074.664.4815.816.20.8960.8914.204.0424.024.8第23天0.6020.6004.624.4615.716.10.8840.8884.124.0024.224.9第24天0.6050.6094.624.5015.816.20.8900.8964.164.0424.124.9第25天0.6130.6054.684.5215.816.10.8960.8894.164.0424.224.7第26天0.6150.6074.644.4816.016.20.8900.8964.124.0024.325.1第29天0.6090.6004.664.4815.816.10.8860.8834.204.0023.824.8第30天0.6120.6084.624.5615.916.00.8880.8884.124.0424.324.7第31天0.6000.6054.564.4615.916.30.8850.8904.084.0024.425.0第32天0.6060.6064.624.5215.816.10.8850.8864.064.0424.524.6AVG0.6080.6054.604.4915.916.20.8910.8914.14.024.324.8SD0.0040.0030.0400.0290.1090.0910.0040.0040.0380.0250.1820.166CV%0.660.530.880.650.680.560.490.440.920.630.750.67患者血清GA濃度(g/dl)ALB濃度(g/dl)GA%GA濃度(g/dl)ALB濃度(g/dl)GA%健康者血請?初次:只有初次測定時作校準(zhǔn)?每次:每次測定時都作校準(zhǔn)露喜佳?GA-L共存物質(zhì)的影響-1-

膽紅素F的影響02040608010012005101520膽紅素F(mg/dl)影響率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ膽紅素C的影響02040608010012005101520膽紅素C(mg/dl)影響率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ乳糜的影響0204060801001200400800120016002000乳糜（度）影響率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ葡萄糖的影響0204060801001200.00.20.40.60.81.01.2葡萄糖(g/dl)影響率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ露喜佳?GA-L共存物質(zhì)的影響-２-血紅蛋白對LucicaGA-L的影響是跟LucicaGA同等水平。血紅蛋白的影響0204060801001200100200300400500600溶血血紅蛋白(mg/dl)影響率(%)ＧＡＧＡ-ＬLucicaＧＡ-Ｌ很大改善抗壞血酸的影響?？箟难岬挠绊?204060801001200.000.020.040.060.080.100.12抗壞血酸(g/dl)影響率(%)ＧＡＧＡ-Ｌ露喜佳?GA-L抗凝血劑、解糖阻止劑的影響?研究采血時用的抗凝血劑、解糖阻止劑的影響。

?所有被研究的采血管標(biāo)本，都適用LucicaGA-L。從健康者６名采血。

表示血清值為100時的相對值。100101.3102.7100.3101.1020406080100120血清EDTA檸檬酸肝素ＮａＦ+EDTA相對值（％）*露喜佳?GA-L保存穩(wěn)定性?本試劑在２～１０℃下保存，12個月內(nèi)穩(wěn)定。（表１）?開封后的試劑，在自動分析儀里（５～１５℃）保存，穩(wěn)定１個月。（表２）表-1

試劑冷藏（２～１０℃）的保存穩(wěn)定性0102030405003691215保存月數(shù)ＧＡ值（％）Ｌｏｔ．ＡＬｏｔ．ＢＬｏｔ．ＣＬｏｔ．ＡＬｏｔ．ＢＬｏｔ．Ｃ管理血清L管理血清H表-2

開封后試劑的保存穩(wěn)定性（５～１５℃）0510152025300123456保存期間(周)ＧＡ值（％）Lot.ＡLot.ＢLot.ＣＬｏｔ.ＡＬｏｔ.ＢＬｏｔ.Ｃ健康者血清患者血清結(jié)論

確認(rèn)DCCT研究時使用的樣品（存儲19-23年）保存穩(wěn)定性。存儲23年的樣品可使用于GA測定。

ClinicalChemistry57-2286-290(2011)＊1986-90年時保存標(biāo)本和2009年保存標(biāo)本的相關(guān)公式?jīng)]有顯示有意截距和斜率。露喜佳?GA-L基本性能一覽表項目功能露喜佳Lucica

ＧＡ-Ｌ既成品測定功能重復(fù)性：同時；ＣＶ％0.63～0.931％以內(nèi)

日間；ＣＶ％0.56～0.672％以內(nèi)直線性：健康者群良好良好

患者群良好良好測定范圍（ＧＡ％）３.２～６８.１％３.１～７０.７％共存物質(zhì)的影響

膽紅素Ｆ（ｍｇ／ｄｌ）≦１４.２≦１８.３

膽紅素Ｃ（ｍｇ／ｄｌ）≦１５.６≦１９.0Ｈｂ（干擾檢查；ｍｇ／ｄｌ）≦１９６≦１９６

乳糜（濁度）≦１９３０≦１９３０

抗壞血酸（ｍｇ／ｄｌ）≦１００≦１７

葡萄糖（ｍｇ／ｄｌ）≦１０００≦１０００

Fructosyl-N-α-Ｚ-Ｌ-ｌｙｓｉｎｅ≦１５ｍＭ≦0.007mＭ抗凝血劑、解糖阻止劑的影響ＥＤＴＡ２Ｎａ１００ｍｇ／ｄｌ?采血管?采血管

檸檬酸３Ｎａ１００ｍｇ／ｄｌ?添加試驗?添加試驗

膽素Ｌｉ１０ｍｇ／ｄｌ

均無影響

均無影響

ＮａＦ１０００ｍｇ／ｄｌ露喜佳?GA-L項目間演算式

對ＨＰＬＣLot傾斜度截矩G１/１.１６3.08H１/１.１３2.80I１/１.１４2.88平均１/１.１４2.92?由該法和ＨＰＬＣ法的相關(guān)式研究該試劑項目間演算式。?得到項目演算式ＧＡ值（％）＝１/１.１４×［ＧＡ濃度］/［ＡＬＢ濃度］×１００＋2.9

相関ＨＰＬＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.Ｇ）y=1/1.16x+3.08ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相関HPLＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.H）y=1/1.13x+2.80ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相関HPLＣ法ｖｓルシカGA-L（Lot.Ｉ）y=1/1.14x+2.88ｒ=0.999010203040010203040ルシカGA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相關(guān)ＨＰＬＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.Ｇ）y=1/1.16x+3.08ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相關(guān)HPLＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.H）y=1/1.13x+2.80ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）相關(guān)HPLＣ法ｖｓLucicaGA-L（Lot.Ｉ）y=1/1.14x+2.88ｒ=0.999010203040010203040Lucica

GA-L（GA％）HPLC法（ＧＡ％）?相關(guān)式【ＨＰＬＣＧＡ％＝１/１.１４×Lucica

ＧＡ-Ｌ＋２.９】?項目間演算式ＧＡ值（％）＝１/１.１４×［ＧＡ濃度］/［ＡＬＢ濃度］×１００＋２.９(n=61)(n=55)(n=55)露喜佳?GA-L使用時的注意事項１．Lucica

GA-LのGAR-2（酶液）試劑由于交叉污染的原因，對一部分試劑＊有可能產(chǎn)生影響。

希望能通過追加堿洗來避免污染。＊免疫法測定試劑（藥物血中濃度測定用試劑等）以及膽汁酸測定試劑（循環(huán)酶法）２．要得到GA%值必須用以下的項目間演算式：ＧＡ％＝ＧＡ／ＡＬＢ×１００×1／1．14＋２．９

如果使用的是有序排列系統(tǒng)，則有必要更改該系統(tǒng)。３．由于血紅蛋白的負面影響，明顯的溶血試樣應(yīng)先稀釋再測定。４．關(guān)于管理血清，請使用GA管理血清L、H。１．露喜佳?GA-L的開發(fā)歷史２．露喜佳?GA-L試劑性能介紹３．露喜佳?GA-L試劑的優(yōu)點露喜佳?GA-L酶的選擇糖化白蛋白用酮胺氧化酶

檢出方法；過氧化氫

基質(zhì)；ε糖化氨基酸

特征；對糖化蛋白質(zhì)沒有影響。糖化白蛋白用蛋白酶

檢出方法；酮胺氧化酶

基質(zhì)；糖化白蛋白

特征；對白蛋白以外的蛋白質(zhì)沒有影響。按以下基準(zhǔn)從數(shù)千種酶中進行選擇。

露喜佳?GA-L酶的選擇菌體破碎酶的精制菌體土壤等離心分離選擇酶培養(yǎng)露喜佳?GA-L對以前產(chǎn)品的改進項目露喜佳Lucica

GA-L以前產(chǎn)品１）劑型液狀品凍干品（可以直接使用）（需要溶解處理）２）穩(wěn)定性１個月（開封后）２周（溶解后）（由于提高穩(wěn)定性，可用于（少量標(biāo)本單位不適用）標(biāo)本較少的小規(guī)模單位）３）白蛋白試劑新ＢＣＰ試劑ＢＣＧ試劑（不受Alb濃度的影響）

（受Alb濃度的影響）４）校準(zhǔn)１次/２周（１點）１次/１天（２點）（節(jié)約費用、操作簡便）５）和HPLC法相關(guān)性優(yōu)良可（不受低ＡＬＢ標(biāo)本的影響）（受低ＡＬＢ標(biāo)本的影響）６)輸液的影響有消失系統(tǒng)無消失系統(tǒng)（異常高值）糖化氨基酸的消去反應(yīng)

避免特殊輸液（糖化氨基酸）的影響?與管理血清添加標(biāo)準(zhǔn)糖化氨基酸，研究糖化氨基酸的影響。?LucicaＧＡ－Ｌ大幅度減少糖化氨基酸的影響。添加糖化氨基酸的影響020040060080010000.05.010.015.020.0Z糖化賴氨酸添加濃度（ｍM）GA值(%)Lucica

GA-LLucica

GAZ糖化賴氨酸LucicaＧＡ-ＬLucicaＧＡ(FZL)添加濃度管理血清管理血清（ｍＭ）ＧＡ值（％）ＧＡ值（％）0.0015.216.60.2515.443.60.5015.469.90.7515.495.31.0015.5119.02.0015.6219.54.0015.9405.110.0016.1980.515.0016.01458.620.0069.71845.4100±５％以內(nèi)Z糖化賴氨酸：Fructoｓｙｌ-Z-Lysine專利2.共存物質(zhì)的影響(糖化氨基酸、葡萄糖)GSP/ALB(BCG)同露喜佳?GA-L相比，受糖化氨基酸的影響非常大,不能用于高卡路里氨基酸輸液的患者。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）共存物質(zhì)的影響

(脂質(zhì))ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）GSP/ALB(BCG)同露喜佳?GA-L相比，受血清脂質(zhì)的影響非常大,針對乳糜樣本或者脂肪乳劑注射(輸液)患者不能反映正確的GA值。共存物質(zhì)的影響（膽紅素）GSP/ALB(BCG)同露喜佳?GA-L相比，受到膽紅素

F、C的影響非常大。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）共存物質(zhì)的影響（維生素

C）GSP/ALB(BCG)同露喜佳?GA-L相比，受到維生素

C

(ascorbic

acid)的影響非常大。ＧＳＰ／ＡＬＢ（ＢＣＧ法）糖化血清蛋白GSP(果糖胺)與露喜佳?GA-L的區(qū)別１）血清蛋白中有66%的

白蛋白。２）GSP是用來測定血清蛋白中糖化物的絶対量

的，而GA是用來測定

白蛋白的糖化率的。其它的血清蛋白質(zhì)α

球蛋白（１１％）β

球蛋白（１０％）γ球蛋白（１３％）白蛋白（６６％）：葡萄糖ＧＡGSP１）不受白蛋白以外的蛋白影響。２）不受蛋白質(zhì)濃度的影響。露喜佳?GA-L的特征１）不受白蛋白以外的蛋白影響

＊GA用來測定血清中的白蛋白。GSP是測定血液中的糖化蛋白質(zhì)。白蛋白以外大量的血清蛋白是免疫球蛋白，GSP可能因為多種原因發(fā)生變動。

α球蛋白

(11%)β球蛋白

(10%)γ球蛋白

(13%)其它的血清蛋白質(zhì)糖化氨基酸、肽測定結(jié)果酮胺氧化酶×白蛋白特異的蛋白酶白蛋白(66%)：葡萄糖GA的測定原理

２）不受蛋白質(zhì)的濃度影響

＊GA的測定值是以白蛋白中的糖化白蛋白含有比率來表示的。而GSP的值是絕對量。蛋白質(zhì)的濃度因人而異，疾患及治療也會使之發(fā)生變動。而GA不受那些變動的影響。GA酶法的測定原理

GA測定ALB測定用改良BCP法測定白蛋白。計算GA的值GA(%)=GA濃度/ALB濃度

X100用酶測定糖化白蛋白。備注：實際測定時，用下述修正公式加以修正。

修正