講義參考說明

DNA

二、雞血細胞的DNA粗提取與鑒三、菜花的DNA

1、DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低;在0.14mol/L時，DNA溶解度最小；當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時，DNA的溶解度又逐漸增大。1、DNA在不同濃度的NaCl

2、DNA不溶 溶液，此可以將DNA與蛋白質(zhì)進一步分開3、DNA①蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA②大多數(shù)蛋白 受60－80℃的高溫，而DNA在80℃以上會變性③洗滌劑可以溶解細胞的細胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對DNA沒14、DNA與二苯胺在沸水浴的條件下呈現(xiàn)藍色反應(yīng)；

二、雞血細胞的DNA粗提取與鑒1凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量雞血、豬肝等DNA含量較高的實驗材料.2 雞血細胞核的DNA②雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常二、雞血細胞的DNA3

二、雞血細胞的DNA粗提取與鑒3 新鮮的雞血加抗凝劑檸檬酸鈉

破碎細

溶鑒

析

②破碎細胞，獲取含DNA，同時用玻璃棒沿一個方向快速攪拌，過濾后收集濾液即可。一般～10mL的雞血細胞液加入20mL蒸餾水?dāng)嚢?min釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，應(yīng)用～42二、雞血細胞的DNA3③溶解在濾液中加入NaCl，至2moL/L，沿一個方向攪拌1min。注意應(yīng)沿一個方向攪拌，使DNA充分溶解，過濾留濾液。④析出緩慢加蒸餾水至0.14moL/L，同時沿同一方向攪拌，過濾留絲狀物。用3-4層紗布對DNA稀釋液進行過濾，濾去蛋白質(zhì)，收集DNA

二、雞血細胞的DNA3④析出直接在濾液中加 粉，反應(yīng)10-- 酶能分解蛋白將濾液放在60--75℃的恒溫水浴箱中保溫10--15min，注意嚴格控二、雞血細胞的DNA3、提?、軩NA2moL/LNaCl溶液20mL溶解DNA黏稠物，仍沿一個方向3min。注意應(yīng)沿一個方向攪DNA充分溶解。3-4層紗布進行過濾或離心，濾去雜質(zhì)，收集含有DNA的濾液。向濾液中加入等體積冷卻的體積分數(shù)為95%的 溶液，并玻璃棒朝一個方向緩慢、均勻地攪拌，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。

二、雞血細胞的DNA3⑤DNA濃縮后的DNA絲狀物，可以用緩緩旋轉(zhuǎn)玻璃棒的方法卷起(璃棒有吸附DNA的作用)。如果DNA，也可以用筷子等表面粗糙的用具來幫助DNA3二、雞血細胞的DNA3⑤DNA

二、雞血細胞的DNA3⑤DNA為何使用預(yù)冷 溶液抑制核酸水解酶活性防止DNA降解降低分子運動，易于形成沉淀析出低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷4、DNA取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解，然后向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。5min，待試管冷卻后，觀察試管中溶液顏色的變化，溶解有DNA的溶液變藍。

4、DNA4二、雞血細胞的DNA5①玻璃棒的使用DNA向含核物質(zhì)的2mol/LNaCl溶液滴加蒸餾三、菜花的DNA

二、雞血細胞的DNA5②過濾的使用③NaCl④蒸餾水的作用于DNA析出DNA下降，從而析出DNA三、菜花的DNA1稱取30g2將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min5三、菜花的DNA2可以使用專門的研磨液，也可以采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污洗滌劑，使植物細胞膜破碎，釋放NA；同時要加入NaC，有利于DNA溶解。研磨液配方：將10.1gTris加入到50mL后，用2moL/L的HCl溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，再加入8.76gNaCl37.2gEDTA、20gSDS。待上述藥品全部溶解后，再用蒸餾水定容至1000mL。

三、菜花的DNA3的學(xué)?？蓪V液倒入塑料離心管中進行離心，用1000r/min的轉(zhuǎn)速，離心2～5min，取上清液放入燒杯中)。在4℃冰箱中放置幾4將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體分數(shù)95％的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪溶(玻璃棒不要直插到燒杯底部)。沉淀35 m后，可見白色的N絮狀物出現(xiàn)。用璃棒緩緩轉(zhuǎn)。，很難提取到②100mL3g檸檬酸③可在濾液中加

當(dāng)NaCl濃度為2mol/L時，DNANaCl溶⑤用預(yù)冷的 ，防止DNA降解；降低分子運動，易形成沉淀；低溫有利于增加DNA的柔韌性，減少斷裂；碎，釋放DNA；第二次加蒸餾水是為了稀釋NaCl溶液到0.14mol/L，使DNA析出；6⑦實驗中有多次攪拌，攪拌要朝向一個方向，并且在析出、DNA再溶解和純化中，各步攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，防止DNA分子斷裂；動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的，不利于后續(xù)步

【例1 ）關(guān)于DNA 用兔的成熟紅細胞可提取PCR的每個循環(huán)一般依次經(jīng)過變性-延伸-DNA【例2（2014江蘇）下列關(guān)于“DNA 酵母和菜花均可作為提取DNADNA既溶于2mol/LNaCDNA

【例3（2012江蘇）下列關(guān)于“DNA 洗滌劑 細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解將DNA常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA用玻棒緩慢攪拌濾液會導(dǎo)致DNA7【例4（2013江蘇）某同學(xué)用洋蔥進行DNA粗提取和鑒定實驗，操作錯誤的 BDNAC．加

【例5（2015江蘇，多選）圖1、2分別為“DNA的粗提取與鑒定”實驗中部 C．圖2D．在圖1雞血細胞液中加入少 粉有助于去除雜【例6如圖是利用雞血粗提取DNA的基本操作，下表中操作目的不能實現(xiàn)的 A． B． C． D．

【例7“DNAA、B、C、D、E五個小組除下表實驗材料選擇錯誤的組別 ，其原因是B組實驗不成功的最主要原因 沸水浴后試管顏色變藍的組別 ；藍色較淡的 ，其原因．8【例8如圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗過程中的一些重要操作示意圖，（1）正確的操作順序 （用字母和箭頭表示

實驗前由教師 雞血細胞液作為學(xué)生實驗材料，而不是選用雞全血，這是因 ， 牧區(qū)的人們， 牛、羊和馬血比方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟，結(jié) ．但若改用物肝臟作實驗料，實驗?zāi)軌蝽樌M，是因為 ．3如圖CE步驟都加入蒸餾水，但其目的不同，分別是和 4如圖A步驟中所用 5為鑒定A中所得到的絲狀物的主要成分為DNA，可滴加 則證明該絲狀物的主要成分為DNA．【例9某實驗小組以洋蔥組織為實驗材料，進行DNA粗提取和鑒定的實驗，（1）步驟一中需加入一定量的洗滌劑和對洋蔥組織進行處理，加入前者是為了細胞膜結(jié)構(gòu)，加入后者的目的是．將攪拌和研磨后的物質(zhì)進行過濾，即可得到含有DNA的濾液．

2步驟二是DNA法：①濾液中NaCl濃度在0.14mol/L時可分離出DNA，需要將其溶解在2mol/L的NaCl溶液中；